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目的了解生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术去除产品中细菌内毒素。方法采用药典半定量凝胶法测定五步蛇蛇毒先后经DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析、Phenyl Sepharose疏水柱层析、HiLoad 26/60 Sephadex75pg凝胶过滤柱层析等技术所得各阶段产品中细菌内毒素的含量;采用Folin-酚试剂法和蕲蛇酶注射液药品标准中的效价测定方法分别测定产品的蛋白含量和酶活力,求出每毫克蛋白和每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素的量。结果无论是DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析还是PhenylSepharose疏水柱层析或是HiLoad 26/60 Sephadex75pg凝胶过滤柱层析均有去除细菌内毒素的作用,最终所得产品每毫克蛋白所含细菌内毒素为6.3~12.5EU·mg-1,每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素为0.5~1.0EU·U-1。结论生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术具有去除产品中细菌内毒素的作用,所得产品细菌内毒素的含量远低于药典对注射剂的细菌内毒素的含量要求。 相似文献
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蕲蛇酶与降纤酶的生物活性比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的比较蕲蛇酶和降纤酶在试管内的酶活力及在兔体血液凝固系统的生物活性。方法分别体外测定蕲蛇酶和降纤酶的相对分子质量(Mr)、蛋白质含量、精氨酸酯酶活力和凝血酶活力等。分别给家兔静脉注射蕲蛇酶0.75U/kg和降纤酶5U/kg,连续3d,比较给药前后纤维蛋白原含量、凝血酶时间、凝血酶原时间、部分凝血酶活酶时间、血小板数目、血小板聚集率、血栓长度及血栓重量的变化。结果蕲蛇酶Mr比较小(27000),且由2个Mr为15500的亚基构成,降纤酶Mr较大(40900),为单链蛋白质。0.75U蕲蛇酶和0.21U凝血酶相当;5U降纤酶约相当于1.4U凝血酶.蕲蛇酶的精氨酸酯酶活力为(973±14)μmolTAME/(mg.min),降纤酶的精氨酸酯酶活力为(1140±18)μmolTAME/(mg.min)。家兔实验,两者均能减少血栓形成及降低纤维蛋白原含量,但蕲蛇酶的药效比降纤酶强,其余指标无明显差异。结论蕲蛇酶与降纤酶不同,蕲蛇酶在生物体内(家兔)表现的药效比降纤酶强。 相似文献
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山楂精降脂片及其原料熊果酸含量的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的建立山撞精降脂片及其原料山楂提取物熊果酸含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil BDS C18(4.6×250mm),以乙腈-甲醇-0.6%醋酸铵(68:12:20)为流动相,检测波长为210nm,流速为1mL·min^-1结果熊果酸进样量在0.4221.505μg范围内峰面积呈良好线性关系,相关系数r=0.9993(n=5),山楂提取物的平均加样回收率为98.16%,RSD=1.20%,山挂精降脂片的平均加样回收率为100.56%,RSD=0.51%。结论测定方法操作简便、灵敏度高、重现性好、结果准确。可做为山撞精降脂片及其原料山撞提取物中熊果酸含量测定方法。建议熊果酸做为山撞精降脂片及其原料山碴提取物质量控制指标。 相似文献
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