铜绿假单孢菌感染的耐药性监测和分析

目的了解本院铜绿假单孢菌感染细菌耐药性现状及分析相应对策。方法采用纸片扩散法(K-B法)测定2006年1月~6月临床微生物室临床分离的64株铜绿假单孢菌,并对临床常用抗菌药物进行药物敏感试验。结果铜绿假单孢菌在所有检出菌株中所占比例较高,占14.5%;该菌对头孢吡圬、阿米卡星、头孢他啶等较为敏感,其敏感率达84%、82%、78%,对氧氟沙星、庆大霉素、氨曲南等较为耐药,其耐药率分别达90%、84%、82%,同时第一、第二季度铜绿假单孢菌对不同抗菌药物耐药性亦有一定变化。结论分析铜绿假单孢菌的临床感染分布和耐药性变迁,对指导临床合理使用抗菌药物具有重要意义。     

生物导向药物TGFα-SAP的联结与生物学鉴定

目的观察半毒素Saporin联结导向因子TGFα后细胞毒性作用的改变及其生物学鉴定。方法用SPDP化学联结的方法合成了TGFα-SAP,通过细胞计数观察TGFα-SAP对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用,并用3H-leucine掺入法进一步探讨了TGFα-SAP对平滑肌细胞的蛋白质合成的影响。结果发现Saporin对于真核细胞的细胞毒性作用很弱,联结TGFα后构建的TGFα-SAP可明显抑制平滑肌细胞的增殖,而过量的TGFα可通过竞争抑制逆转TGFα-SAP对平滑肌细胞3H-TdR掺入量的明显抑制作用。结论细胞毒性药物Saporin联结导向因子TGFα构建的TGFα-SAP通过TGFα的介导已具有较Saporin明显增强的细胞毒性作用。     

血管成形术后再狭窄与平滑肌细胞转化和迁移及转化生长因子α表达上调有关

目的为探讨血管成形术后再狭窄形成与平滑肌细胞(Smooth muscle cells,即SMCs)的迁移和表型转化,以及转化生长因子α(Transforming growth factor-α,即TGFα)在内膜增生过程中的表达变化的关系。方法取40只Sprague-Dawle大鼠行右颈总动脉球囊内膜剥脱术建立再狭窄动物模型,于第1,3,9,28天和2月取实验动脉段和对侧正常动脉段行光镜观察及计算机图像分析,同时在透射电镜下观察SMCs亚微结构变化。并以放免测定内膜增生时损伤血管组织中TGFα表达的变化。结果图像分析显示在球囊损伤第3天即见损伤血管中膜出现明显增厚,而后恢复正常厚度。与此同时球囊损伤第3天内膜明显增厚,而在第9～28天逐渐达到高峰;在透射电镜下观察可见:术后第3天损伤血管增生内膜中近腔面的SMCs就已主要表现为合成表型,在28d和2个月时大部分SMCs又恢复收缩表型的形态特征。而通过放免测定发现球囊损伤后第3天对血管组织TGFα表达明显增加,与对侧正常颈总动脉标本中的TGFα含量有统计学意义的差异。结论故认为大鼠再狭窄模型的内膜增生过程具有明显的时相特征,SMCs从中膜向内膜的迁移,而SMCs的表型转化在这过程中显示出明显的双向转化特点,而TGFα在损伤血管的表达明显增加,可能参与了内膜过度增生过程的SMCs的表型转化和迁移的机制。     

TGFα与bFGF联结皂草毒素蛋白对增殖平滑肌细胞和内皮细胞的特异性细胞毒作用

目的:为比较生物导向药物转化生长因子-皂草毒素蛋白(TGFα-SAP)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-SAP对增殖平滑肌细胞特异性细胞毒性作用。方法:用SPDP化学联结的方法合成了导向药物TGFα-SAP和bFGF-SAP,以3H-亮氨酸渗入法观察了TGFα-SAP及bFGF-SAP对平滑肌细胞(SMCs)和内皮细胞(ECs)蛋白质合成的影响,并以MTS法和3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)渗入法比较TGFα-SAP及bFGF-SAP对SMCs和ECs的增殖和DNA合成的抑制作用。结果:10-9mol/L的TGFα-SAP可明显抑制SMCs增殖,SMCs细胞增殖抑制率达到77.5%,而相同浓度bFGF-SAP的抑制率仅46.1%;并且TGFα-SAP也比bFGF-SAP更明显抑制了培养SMCs的蛋白质合成。与空白对照组比较,3H-亮氨酸掺入量降低了47.3%;该浓度的TGFα-SAP和bF-GF-SAP对ECs却未显示出明显的细胞毒性作用。10-9mol/L的TGFα-SAP明显抑制了SMCs的DNA合成,使3H-TdR掺入量较对照组降低了29.5%,但同样浓度的bFGF-SAP仅使3H-TdR掺入量较空白对照组降低了9.86%。在10-7mol/L浓度下的TGFα-SAP未显示出明显对ECs的细胞毒性作用,而bFGF-SAP具有明显降低ECs的3H-TdR掺入量。结论:TGFα-SAP通过表皮生长因子受体介导具有明显增强的细胞毒性作用,其对增殖SMCs的细胞毒性作用较bFGF-SAP更为敏感,而在10-7mol/L浓度下,bFGF-SAP比TGFα-SAP对ECs显示出更明显的细胞毒性作用。本实验为TGFα-SAP在经皮冠脉成形术后再狭窄临床防治中的应用前景提供进一步实验依据。     

硫化氢通过STAT1途径对小鼠酒精性肾间质纤维化的影响

目的 观察气体信号分子硫化氢(H2S)对小鼠酒精性肾间质纤维化以及基质金属蛋白酶-24(MMP-24)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)及信号转导和转录激活因子-1(STAT1)表达的影响.方法 将40只雄性昆明小鼠适应性喂养1周后,随机分为4组:对照组、酒精干预组、酒精加H2S组、酒精加炔丙基甘氨酸(PAG)组,每组10只.在标准饲料喂养的基础上,除对照组外,小鼠经由每天饮用4％ (Vol/Vol)的乙醇水溶液12周制作慢性酒精中毒模型,对照组则每天自由饮用等量清水.另外,酒精加H2S组小鼠每天腹腔注射H2S供体硫氢化钠(NaHS)(50μmol/kg),酒精加PAG组小鼠每天腹腔注射PAG(40 mg/kg),对照组和酒精干预组每天腹腔注射1次PBS.90 d后处死小鼠,取出肾脏组织,PAS染色观察小鼠肾组织结构变化以及Masson染色观察肾间质纤维化,Western blot检测MMP-24、TIMP-1以及STAT1蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,酒精干预组肾脏肾小球肥大,肾小管间质炎性改变以及肾间质出现明显纤维化,同时MMP-24、TIMP-1以及STAT1蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);与酒精干预组相比,酒精加H2S组肾小球和肾小管间质炎性及肾间质纤维化明显改善,而肾组织中MMP-24、TIMP-1和STAT1蛋白表达水平也显著降低(P＜0.05);酒精加PAG组与酒精干预组相比,小鼠肾组织肾间质纤维化加重,且TIMP-1和STAT1蛋白表达水平均明显上升(P＜0.05).结论 H2S可改善小鼠酒精性肾间质纤维化,其机制可能通过下调STAT1改善MMP-24/TIMP-1失调有关.     

线粒体H2S供体AP39对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响及其与线粒体动力学的关系

目的]已有研究表明H₂S可拮抗心肌纤维化,但线粒体靶向性H₂S能否拮抗心肌梗死后心肌纤维化,且是否与调控线粒体融合与分裂有关目前并不明确。为了探究这一关系,进行了该研究。 [方法]在动物实验中予以异丙肾上腺素[ISO,50 mg/(kg·d)]腹腔注射构建SD大鼠心肌梗死模型,对各组大鼠行心电图检测,使用线粒体H₂S供体AP39[36 μg/(kg·d)],腹腔注射连续处理SD大鼠4周,使用Masson染色检测心肌纤维化情况,使用Western blot检测相关蛋白表达情况。体外实验以氯化钴(CoCl₂,800 μmol/L)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤,AP39(100 nmol/L)处理H9c2细胞,使用DL-炔丙基甘氨酸(PAG,2 mmol/L)抑制内源性硫化氢合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE),并通过荧光探针检测心肌细胞活性氧(ROS)的水平。 [结果]梗死大鼠心肌存在明显间质纤维化,胶原纤维大量堆积,且CSE、线粒体融合蛋白2(MFN2)表达下调,线粒体动力相关蛋白1(DRP1)表达增加,AP39干预后则可明显改善以上变化,而加入CSE抑制剂PAG则可逆转AP39的以上作用。同时在体外实验中发现,以CoCl₂诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤时,细胞内ROS水平升高,MFN2表达下调,DRP1表达增加,AP39则可上调MFN2蛋白表达,抑制DRP1表达,降低心肌细胞ROS水平,而PAG则可逆转以上变化。 [结论]线粒体靶向性H₂S供体AP39可以改善心肌梗死大鼠心肌纤维化,且可促进线粒体融合,抑制线粒体过度分裂。     

冠心病患者外周血RANTES、PAI-1和ADMA水平的变化及与GRACE评分的相关性分析

目的观察不同类型冠心病患者外周血活化T细胞趋化因子(RANTES)、血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、非对称性二甲基精氨酸(ADMA)水平的变化,探讨其与冠心病GRACE评分的关系。方法选择行冠状动脉造影术的住院患者150例,其中无症状心肌缺血(SMI)组28例,稳定型心绞痛(SAP)组59例,急性冠脉综合征(ACS)组63例。用ELISA法测定血清RANTES、PAI-1和ADMA水平,并计算患者GRACE评分,分析RANTES、PAI-1和ADMA水平与GRACE危险分层的关系。结果 ACS组外周血RANTES、PAI-1、ADMA水平均高于SMI组和SAP组,差异有统计学意义(P0.05);SAP组和SMI组RANTES、PAI-1、ADMA水平间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。外周血RANTES与PAI-1、ADMA水平均呈正相关(r=0.334,P=0.000;r=0.173,P=0.021),而血清PAI-1与ADMA水平无明显相关性,血清RANTES、PAI-1、ADMA水平与患者GRACE评分均未显示出明显相关性。结论 GRACE评分联合检测外周血RANTES、PAI-1和ADMA水平,可能有助于冠心病患者危险分层,能更有效地预测急性冠脉事件的发生。     

缺氧对肥大心肌细胞凋亡和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨缺氧对正常心肌细胞和肥大心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法将培养的乳鼠心肌细胞或诱导肥大后的心肌细胞分别缺氧24 h,并以Hoechst33258染色法检测缺氧对心肌细胞凋亡的影响,Western blot和免疫荧光法检测Cx43的表达。结果培养的心肌细胞经血管紧张素Ⅱ诱导48 h后出现肥大,肥大心肌细胞缺氧24 h比正常心肌细胞出现更明显的凋亡,缺氧明显下调心肌细胞Cx43的表达,而肥大心肌细胞Cx43的表达下调更为明显。结论缺氧导致肥大心肌细胞Cx43的表达显著下调,细胞凋亡更明显,可能与缺氧时肥大心肌的电生理重构和恶性心律失常的产生机制有关。     

血清Fractalkine在不同类型冠心病患者中的表达及意义

目的 观察血清Fractalkine （FKN）在不同类型冠心病（CHD）患者中的表达,并评估其水平对CHD危险分层的价值.方法 选取CHD患者81例,根据冠状动脉造影结果将其分为稳定型心绞痛（SAP）患者22例（SAP组）、不稳定型心绞痛（UAP）患者32例（UAP组）、急性心肌梗死（AMI）患者27例（AMI组）,同期选择非CHD患者62例作为对照组.采用ELISA法检测各组血清FKN水平,Gensini评分系统评定冠状动脉狭窄程度.结果 AMI组及UAP组血清FKN水平明显高于对照组和SAP组（P均＜0.05）,AMI组与UAP组、SAP组与对照组比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）.Pearson相关分析显示,CHD患者血清FKN水平与Gensini积分无相关性（r=0.19,P＞0.05）.结论 随着CHD患者病情的加重,血清FKN水平明显升高;血清FKN水平可以作为CHD危险分层的指标.