脊柱裂动物模型制作与胚胎发生机制探讨

目的 建立大鼠隐性脊柱裂和显性脊柱裂畸形动物模型，观察丙戊酸钠和维甲酸诱导大鼠脊柱裂畸形的特点，初步探讨脊柱裂畸形的发生机制。方法 雌性Wistar孕鼠随机分成组：对照组，实验组分成丙戊酸钠三个不同剂量组和维甲酸组。对照组孕鼠不予任何处置，20d胎鼠脊柱染色标本采集图像经计算机软件显微图像分析，测量出每个椎体椎弓两个软骨端距离，目的确定软骨端距离参考值。雌性Wistar大鼠，在确定怀孕的第9d9：00、16：00，按体重计算剂量后于后肢皮下注射20％丙戊酸钠溶液。妊娠第20d剖宫，检查胚胎外观，判定是否有外观可见畸形，然后取脊柱进行骨和软骨双重染色，染色后标本采集图像测量出每个椎体椎弓两个软骨端距离。参照正常胎鼠确定的参考值判定隐性脊柱裂。Wistar大鼠确定怀孕的第10d9：00，胃管灌入维甲酸矿物油混悬液135mg／kg(40mg／m1)，妊娠第20d剖宫，检查胚胎外观判定显性脊柱裂畸形发生情况并记录。结果 丙戊酸钠诱导隐性脊柱裂畸形随药物剂量加大，畸形发生率升高，丙戊酸钠剂量400mg／kg、450mg／kg、500rng／kg~导畸形发生率分别是80％、93％、100％，腰椎对丙戊酸钠的致畸作用最敏感；丙戊酸钠还可以导致头端神经管畸形，未观察到显性脊柱裂的发生。维甲酸135rng／kg诱导胎鼠显性脊柱裂的发生率52．3％，畸形都发生在腰骶段，其他畸形的总发生率高达90．7％。结论 丙戊酸钠抑制软骨细胞增生，影响椎体的软骨发生使椎弓不能闭合导致胎鼠隐性脊柱裂的发生。腰椎对丙戊酸钠的致畸作用最敏感，隐性脊柱裂多发生在腰骶段。过量的维甲酸直接影响神经上皮细胞、神经嵴细胞、原基器官间质细胞的生化过程和尾端未分阶段的中胚层，导致胚胎尾端发育不良综合症复杂畸形出现。丙戊酸钠和维甲酸通过不同机制导致畸形的发生。     

大鼠肛门直肠畸形的胚胎发育研究

目的：观察大鼠正常的和畸形的肛门直肠发育过程，探讨肛门直肠畸形的胚胎发生机制。方法：用乙烯硫脲（ethylenethiourea,ETU）致畸21只孕鼠共生产泄殖腔畸形和无肛畸形胎鼠（204只）。胎龄12．5－20d的正常（n=223)及泄殖腔发育畸形的胎鼠正中矢状连续切片HE染色。连续动态对比观察泄殖腔及肛门直肠的发育过程。结果：泄殖腔发育过程中，胎龄15d前的正常鼠胚，尿直肠隔将泄殖分为腹侧的尿生殖窦和背侧的直肠两部分，二者共同相通于泄殖腔管，尿直肠隔下降与泄殖腔膜的距离逐渐减小，直至胚胎15d时与泄殖腔膜融合，直肠与膀胱分离。16d时肛膜破裂，直肠与尾沟相通。ETU致畸的胎鼠泄殖腔发育中有以下下特点；（1）尿直肠隔始终未与泄殖腔膜融合；（2）泄殖腔构型异常；（3）泄殖腔膜过短；（4）没有尾沟形成。ETU致畸胎鼠中所有的无肛畸形均为泄殖腔畸形和直肠尿道瘘。结论：鼠胚胎15d时尿直肠隔与泄殖腔膜融合。胚胎16d肛膜完全破裂，直肠与外界相通。泄殖腔构型的变化以及尿直肠隔下降并与泄殖腔隔合使直肠与膀胱分离。尿直肠隔与泄殖腔膜融合是直肠和膀胱分离的决定因素。肛门直肠畸形发生与泄殖腔构型异常以及尿直肠隔未与泄殖腔膜融合等因素有关。尿直肠隔未与泄殖腔融合是ETU诱导的大鼠肛门直肠畸形发生的直接原因。     

孕妇血清微小RNA-423对胎儿神经管缺陷产前诊断的意义

目的 母亲血清中微小RNA(microRNA,miRNA)的发现为无创性产前诊断开辟了新途径.但是对神经管缺陷胎儿母亲血清中妊娠相关的miRNA的研究甚少.该文旨在研究微小RNA-423(mi-croRNA-423,miR-423)在神经管缺陷胎儿孕妇血清中的异常表达及其作为潜在诊断标志物的临床价值.方法 33例产前超声检查确诊为胎儿神经管缺陷的患儿为研究对象,其中脊柱裂22例,无脑儿11例;33例胎儿健康孕妇为对照组.所有孕妇均于清晨空腹抽外周静脉血5ml离心后取血清,提取血清总RNA,用Real-time RT-PCR方法测定miR-423表达水平.并用ROC曲线分析用miR-423诊断胎儿神经管缺陷的价值.结果 神经管缺陷胎儿孕妇血清中miR-423含量(0.96±0.14)明显低于健康胎儿孕妇对照组(2.28±0.43),P＜0.05.ROC分析miR-423曲线下面积为0.711(95％ CI:0.566～0.856)(P＜0.05).另外,对不同类型的神经管缺陷孕妇血清中的miR-423表达水平分析发现,只有在无脑儿中表达降低(0.58±0.08)差异有统计学意义.结论 孕妇血清中miR-423可作为胎儿神经管缺陷的无创性产前诊断标志物,具有潜在的临床价值,可能预示胎儿神经管缺陷严重程度.     

质谱多反应监测技术筛查先天性心脏畸形蛋白标志物的价值

目的探讨质谱多反应监测技术(multiple reaction monitoring-mass spectrometry,MRM-MS)对先天性心脏畸形(congenital heart diseases,CHD)蛋白标志物的筛查价值。方法 CHD胎儿孕妇30例为CHD组,正常胎儿孕妇20例为对照组,分别采用MRM-MS法及ELISA法检测2组血清LMNA、TPM4、MYH9、TLN1、APOC1、PF4V1、SAA4和HP蛋白表达水平,Pearson法分析ELISA法与MRM-MS定量检测结果的相关性,ROC曲线评估候选蛋白标志物诊断CHD的效能。结果MRM-MS定量检测CHD组血清LMNA[(0.18±0.16)fmol/mL]、TPM4[(0.94±0.46)fmol/mL]水平低于对照组[(0.30±0.19)、(1.56±0.88)fmol/mL](P0.05),APOC1[(33.89±13.65)fmol/mL]高于对照组[(22.81±10.49)fmol/mL](P0.05),MYH9、TLN1、PF4V1、HP、SAA4表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05);血清LMNA以0.14fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.800(95%CI:0.662~0.938,P0.001),准确率为78.6%,灵敏度为100.0%,特异度为54.5%;血清TPM4以0.87fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.752(95%CI:0.601~0.904,P=0.001),准确率为73.8%,灵敏度为90.0%,特异度为54.6%;血清APOC1以22.8fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.777(95%CI:0.621~0.933,P0.001),准确率为81.0%,灵敏度为80.0%,特异度为81.8%;LMNA、TPM4、APOC1分别以0.80、0.79、67.78fmol/mL为最佳截断值时,3种蛋白联合诊断CHD的准确率最高(88.1%),灵敏度为85.0%,特异度为90.9%;Pearson相关分析结果显示,MRM-MS定量与ELISA检测的LMNA、TPM4、APOC1蛋白水平均呈正相关(r=0.74,P=0.002;r=0.75,P=0.001;r=0.78,P=0.001)。结论 MRM-MS定量技术可获得LMNA、TPM4、APOC1 3种蛋白分子标志物,其联合诊断CHD具有较高的准确率。     

直肠癌术后肛门外括约肌神经电生理研究

目的:通过对会阴-肛门反射弧脊髓中枢传导时间的检测,探讨直肠癌患者术后支配肛门外括约肌神经功能的改变。方法:对52例患者进行会阴-肛门反射、脊髓肛门反应和马尾神经诱发电位3种潜伏期检测,对会阴-肛门反射弧的传入、传出和脊髓中枢3部分神经传导情况进行定量分析,并与20例正常人进行比较。结果:正常人脊髓中枢传导时间为(17.8±6.5)ms,传入神经传导时间为(7.2±6.3)ms,传出神经传导时间为(8.2±6.1)ms,直肠癌术后患者各种反射潜伏期均有不同程度延长,传入和传出神经传导时间延长更明显,潜伏期与临床评分有明显的负相关性(r=0.691)。结论:直肠癌术后患者支配肛门外括约肌神经功能异常是影响临床疗效的重要因素,神经损害在会阴-肛门反射弧的传入和传出神经最严重。     

先天性肛门直肠畸形术后合并便秘患儿排便功能评定及病因探讨

目的便秘是先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)术后常见的并发症,其病理改变复杂,病因尚不清楚。本研究利用多种客观检查方法对ARM术后便秘患儿肛门直肠功能和神经功能进行评定,并对其病因进行探讨。方法利用同位素排便造影、直肠肛管测压、肌电图和肛门括约肌神经电生理等方法对49例ARM患儿和31例正常儿童的排便功能进行全面、系统和动态的评价,49例ARM患儿根据畸形位置分为中低位组和高位组,每组再根据是否发生便秘分出两个亚组,并对上述测量指标进行统计分析。结果同位素排便造影结果显示,ARM术后便秘组半排时间[中低位:(13.45±8.35)s;高位:(20.59±4.26)s]与术后无便秘组[中低位:(4.69±6.86)s;高位:(7.66±6.38)s]相比明显延长,ARM术后便秘组排空率[中低位:(29.35±14.84)s;高位:(33.00±9.04)s]与术后无便秘组[中低位:(61.70±23.01)s;高位:(60.31±30.38)s]相比明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。直肠肛管测压检测结果显示,直肠感觉阈在所有ARM组中均明显高于正常组(P<0.05),ARM便秘组[中低位:(53.57±9.45)mL;高位:(57.50±9.14)mL]高于ARM无便秘组[中低位:(46.32±14.61)mL;高位:(47.27±8.76)mL]。ARM便秘组感觉收缩时间[中低位:(2.79±0.39)s;高位:(3.51±1.93)s]明显长于ARM无便秘组[中低位:(1.97±0.67)s;高位:(2.11±0.43)s],差异具有统计学意义(P<0.05)。肌电图结果显示,反映排便动力的痉挛指数在术后合并便秘组均明显高于未合并便秘组。神经电生理结果显示会阴-肛门反射潜伏期在ARM患儿组均明显延长,其中ARM合并便秘组[中低位:(66.04±16.20)ms;高位:(70.41±17.91)ms]延长更加明显,与ARM无便秘组[中低位:(38.51±16.92)ms;高位:(49.91±9.45)ms]相比存在统计学差异(P<0.05)。结论ARM术后便秘患儿直肠感觉功能和排便动力存在明显异常,其严重程度与支配盆底肌肉的神经功能异常有关。治疗前应进行详细、系统的肛门直肠和神经功能的客观检查,明确排便功能障碍的具体病因和病理改变。     

小儿便秘结肠动力学机制的初步探讨

目的探讨慢性便秘患儿的结肠动力学变化特点和规律。方法 2 5例便秘儿童接受结肠传输时间测定和直肠肛管向量测压检查 ,根据结肠传输时间将便秘儿童分为传输时间正常型便秘组和传输时间延长型便秘组 ,探讨直肠肛管向量测压对于不同类型便秘的意义。结果便秘组的全胃肠传输时间 (TGITT)、左半结肠传输时间 (LCTT)和直肠乙状结肠传输时间 (RSTT)较对照组显著延长 [(92± 5 6 )h比 (2 9± 8)h ,P <0 0 1;(17± 13)h比 (7± 4 )h ,P <0 0 1;(6 2± 2 9)h比 (13±6 )h ,P <0 0 1]。肛管最大收缩压显著升高 [(2 36± 4 4 )mmHg比 (190± 38)mmHg ,P <0 0 5 ],对称指数显著降低 [(0 71± 0 0 6 )比 (0 84± 0 0 8) ,P <0 0 5 ]。传输时间正常型便秘组和传输时间延长型便秘组的肛管最大压力、向量容积和对称指数之间差异无显著意义。结论便秘儿童的TGITT、LCTT和RSTT比正常儿童显著延长 ,肛管最大收缩压升高 ,对称指数降低。便秘儿童的结肠传输功能和 (或 )直肠肛管动力存在不同程度异常。     

EphB2在先天性肛门直肠畸形直肠末端表达的研究

目的 研究酪氨酸蛋白激酶受体--EphB2在先天性肛门直肠畸形直肠末端组织中的mRNA表达和蛋白表达的水平,探讨EphB2与先天性肛门直肠畸形发生的关系.方法 RT-PCR方法和Western蛋白印迹方法,检测31例不同类型先天性肛门直肠畸形直肠后壁末端、5例后天瘘及8例正常直肠后壁末端EphB2在蛋白水平和mRNA水平的表达情况,应用单因素方差分析比较正常组和畸形组、不同类型的畸形组之间EphB2表达水平的差异.结果 ①先天性肛门直肠畸形末端肠壁EphB2基因mRNA相对表达量明显低于正常对照组(0.99±0.11,P=0.00).不同类型的畸形组之间,高位组(0.43±0.07)和中位组(0.47±0.10)之间差异无统计学意义(P=0.33),但二者明显低于低位组(0.64±0.06,P=0.00).后天瘘组(0.97±0.09)与正常对照组比较差异没有统计学意义(P=0.63);②Western蛋白印迹结果显示,先天性肛门直肠畸形高位组(0.21±0.05)、中位组(0.24±0.04)和低位组蛋白表达水平均明显低于后天瘘组(0.51±0.05)和正常对照组(0.52±0.03,P=0.00).不同类型的畸形之间,高位组和中位组之间无明显差异(P=0.11),但二者明显低于低位组(P＜0.01).后天瘘组与正常对照组比较差异没有统计学意义(P=0.67).结论 EphB2在先天性肛门直肠畸形直肠末端低表达.EphB2的表达和肛门直肠畸形的发生有关,EphB2在先天性肛门直肠畸形的发生中可能具有重要作用.     

EphB2基因多态性与先天性肛门直肠畸形的相关性研究

目的 探讨EphB2受体基因第6外显子的-1395A/G多态性在辽宁地区汉族人群中的分布及其与先天性肛门直肠畸形(CAM)的关系.方法 采用PCR-RFLP方法,对65例CAM患儿和115名健康儿童EphB2基因-1395A/G多态位点进行基因型检测,用SHEsis在线统计软件分析等位基因频率、基因型频率及其组间差异.结果 EphB2受体基因第6外显子的-1395A/G多态A等位基因频率及AA基因型频率在CAM组(85.4%、75.4%)与正常对照组(17.0%、4.3%)间差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 EphB2受体基因第6外显子的-1395A/G多态与CAM存在相关性.     

应用生物反馈训练无肛术后患儿的排便功能

背景先天性无肛术后患儿大便失禁常常会引起心理、生理和社会交往能力的障碍.目的采用生物反馈训练方法对先天性无肛术后大便失禁的患儿进行排便训练,以期改善患儿术后的排便功能.设计自身对照实验.单位中国医科大学第二临床学院小儿外科.对象纳入中国医科大学第二临床学院小儿外科1998-01/2004-10收治的无肛术后有大便失禁的患儿20例,其中完全大便失禁4例,稀便失禁7例,污便9例,均为随访病例.中低位无肛畸形9例;高位无肛畸形11例.方法利用直肠肛管向量测压与肛门外括约肌肌电等客观检测手段,对无肛术后大便失禁的患儿经自行收缩肛门和排便习惯训练1个月后,再选择适宜的矫治大便失禁的方法,进行针对性的生物反馈训练.①加强肛周肌肉力量的生物反馈训练2次/d,待3周后患儿能正确进行肛周肌肉收缩训练,可使用便携式生物反馈训练仪回家继续训练.②改善直肠感觉性与肛门外括约肌协调性生物反馈训练,要反复进行扩张气囊的训练,建立一种正常的排便反射,只要直肠扩张,肛门外括约肌就会出现反射性收缩,防止大便失禁.③每日三餐后30min内进行排便习惯的训练.④电刺激结合生物反馈训练每次持续10min,2次/d,连续三四周.主要观察指标①患儿的最大肛管压、肛管的向量容积和肛门外括约肌肌电的振幅变化.②训练前后患儿直肠肛管反射的阳性率.结果按实际处理分析,20例患儿均进入结果分析.①肛管的最大压力值中低位畸形和高位畸形组训练后比训练前增加[(24.88±16.58)和(18.18±13.71)kPa,(11.87±5.61)和(5.76±3.84)kPa,P＜0.05].②肛管内的向量容积中低位畸形和高位畸形组训练后比训练前增加[(608.10±131.06)和(452.17±69.43)cm(cmHg)2,(139.17±130.02)和(117.01±74.35)cm(cmHg)2,P＜0.05].③肛门外括约肌肌电振幅中低位畸形和高位畸形组训练后比训练前增加[(324.12±67.78)和(266.18±49.38)μV,(152.20±37.42)和(114.08±51.41)μV,P＜0.05].④直肠肛管收缩反射的阳性率训练后高于训练前[90%(18/20),55%(11/20)].结论经生物反馈训练后无肛术后各组肛周肌肉力量、直肠感觉性与肛门外括约肌协调性、排便习惯、肛门外括约肌能力均有明显提高,尤以中低位畸形最明显,最大限度的改善了肛门外括约肌功能,起到了治疗大便失禁的作用.