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1.
APA微胶囊免疫隔离生物膜制备中的质量控制 总被引:3,自引:0,他引:3
为了优化制备条件, 简化工艺, 控制质量, 本文观测了APA(海藻酸盐-聚赖氨酸-海藻酸盐)微胶囊免疫隔离生物膜制备过程中部分物理因素和化学因素与质量的关系.结果表明: 微囊的粒径与静电微囊发生仪脉冲频率呈负相关; 与推进泵速度呈正相关; 与针头内径呈正相关.随着聚赖氨酸浓度的增加, 膜厚度显著增加.微囊的粒径不随聚赖氨酸成膜反应时间延长而改变, 但影响膜的厚度.柠檬酸钠的液化时间对微囊的粒径与厚度均无明显影响.通过优化制备条件, APA微胶囊免疫隔离生物膜将具有更好的通透性、柔韧性、生物相容性和强度. 相似文献
2.
APA-3T3细胞微囊的深低温保存 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA)。分别将不同的冻存液加入APA-3T3中。按程序控制降温梯度,置于液氮中保存。快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性。结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低最少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P<0.01。微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P<0.01。②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度最小,活率达(73±1.26)%,P<0.01。微囊完好率最高,为(85.1±0.82)%,P<0.01。③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响。结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性。 相似文献
3.
目的:了解海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙(APA)微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC)植入蛛网膜下腔后患者的免疫反应。方法:实验于2002-07/2003-02在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成。采用腰椎穿刺术,将APA-BCC注入20例中、重度癌痛患者L3~4或L4~5蛛网膜下腔内。检测患者移植前后的血象、免疫球蛋白、T细胞亚群及脑脊液。结果:移植后外周血中淋巴细胞比例较移植前无明显变化(P>0.05)。移植后7d复查16例患者的脑脊液,其中8例(50%)脑脊液中白细胞升高,范围在(15~700)×106L-1犤(198±248)×106L-1犦。但外周血免疫球蛋白、T细胞亚群较移植前无明显变化。结论:APA-BCCs微胶囊植入癌痛患者蛛网膜下腔,未引起宿主明显的免疫反应,表明APA微囊具有良好的免疫隔离作用。 相似文献
4.
目的 探索以中医基础理论指导、通过睡眠认识人体身心状态的方法.方法 以一种自然睡眠检测技术为平台,通过对2 000余例受试者睡眠检测数据和临床资料的分析,提出睡眠周期反映经脉循行的假说,并初步探索夜间睡眠参数趋势中的气血阴阳信息.结果 睡眠周期是睡眠过程中气血依时辰在不同经脉间循行的表现;经脉或相关脏腑的疾病状态下,睡眠的周期性以及睡眠结构会发生相应变化;夜间睡眠过程中的心率、呼吸率等动态变化同样反映了阴阳的交替、推移.结论 可将睡眠过程参数判读作为中医辨证手段的补充. 相似文献
5.
目的:在前期微囊化基因工程细胞制备平台的基础上,构建分泌型人肿瘤坏死因子α的真核表达载体PSNAV2.0-TNFα重组质粒,并鉴定其蛋白的体外瞬时表达,为进一步利用该基因进行微囊化细胞移植治疗和改善疾病奠定基础。方法:实验于2006-06/2007-05在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学实验室完成。①以含有人肿瘤坏死因子αcDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得人肿瘤坏死因子α基因片段;将其定向插入真核表达载体PSNAV2.0中,获得重组质粒PSNAV2.0-TNFα。采用SalⅠ和EcoRⅠ双酶切法、PCR法及插入片段序列测定法鉴定该质粒。②利用阳离子脂质体介导法,将其转染到人胚胎肾细胞HEK-293细胞中,构建可持续分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染细胞培养上清液中人肿瘤坏死因子蛋白的体外瞬时表达。结果:①通过SalⅠ和EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定证明:在HEK-293中插入片段正确。②采用RT-PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有人肿瘤坏死因子α蛋白,Mr17000。结论:成功构建了重组质粒PSNAV2.0-TNFα真核表达载体,转染HEK-293细胞后可有效分泌人肿瘤坏死因子α蛋白,并能分泌到细胞外。 相似文献
6.
目的 建立裸鼠皮下C6脑胶质瘤模型,了解其生长特性.方法 将C6脑胶质细胞的培养悬液注射于裸鼠左侧腋下区皮下.观察接种区皮下肿瘤的生长状况,测量肿瘤直径并计算肿瘤体积,绘制肿瘤体积-时间生长曲线.HE染色和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色观察肿瘤细胞的生长及转移状况.结果 瘤细胞接种后第7天,裸鼠腋下区开始出现肿瘤,并呈加速生长.20 d后,皮下肿瘤呈快速的近指数生长.裸鼠生存期为22~48 d.光镜下见瘤体边界清晰,瘤内血管丰富,存在大量GFAP阳性细胞.结论 将体外培养的C6脑胶质瘤细胞植入裸鼠皮下,可建立重复性好的脑胶质瘤动物模型. 相似文献
7.
1材料和方法 1.1材料倒置显微镜,恒温振荡器,微囊制备仪,APA微 囊,PBS缓冲液。 1.2方法 ①APA微囊机械强度的测定于显微镜下分别 取APA微囊各100个,分装入3只100ml三角烧瓶中,加入 生理盐水50ml。置于37.5℃恒温振荡器中,以120r/min速 度水平振摇。分别于6h、24h、48和72h在光镜下计数破损 微囊的数量,计算微囊破损率(破损率=破损微囊个数/微囊 总数×100%)。②APA微囊化学强度的测定取制备好的 … 相似文献
8.
利用激光扫描共聚焦显微镜测定APA微囊通透性 总被引:11,自引:0,他引:11
目的:海藻酸钠多聚赖氨酸海藻酸钠(APA)微囊能够成功地延长同种或异种移植组织或细胞的存活时间,而微囊膜的通透性是决定囊内细胞存活和微囊免疫隔离效果的关键因素。本实验用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)以测定APA微囊膜的通透性。方法:采用FITC标记的不同分子量的葡聚糖(FD)和IgG与微囊共孵育,观察形成的激光共聚焦图像。结果:平均分子量为71和167kDa的FD及分子量为150kDa的IgG均不能扩散进入微囊内,而平均分子量为12和20kDa的FD则可自由扩散进微囊内,平均分子量为40kDa的FD可部分扩散进微囊内。提示微囊膜的截割分子量在40~71kDa之间。利用LSCM的时间扫描功能可动态观察FD12向单个微囊内的扩散情况,表明较小直径微囊内FD12增加的速度明显快于直径较大的微囊。包囊细胞和含血清的培养液对微囊膜的分子截割范围和FD12向微囊内的扩散速度无明显影响。结论:我们制备的APA微囊既可允许小分子的营养物通过,以满足微囊内细胞的生存需要,又能截割71kDa以上的大分子物质,起到免疫隔离作用。利用LSCM技术可简便易行地测定微囊通透性 相似文献
9.
10.
本实验分别测定了55例神经外科患者及正常人头发中微量元素硒(Se)的含量。方法:留取被检者枕部近发根处发样,长2cm,经常规清洗,硝酸、高氯酸湿法消化处理.用2,3-二氨基萘荧光法测定硒含量。结果:①正常组(9例):发硒值为0.53±0.15μg/g:②神经经外科非肿瘤组(19例):Se=0.51±0.13μg/g.与正常组无显著差异(P>0.05);③良性脑瘤组(21例):Se=0.48±0.15μg/g,与正常组及神经外科非脑瘤组均无显著差异(P>0.05);④恶性脑瘤组(6例):Se=0.36± 相似文献