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目的 NeoE是费氏链霉菌合成新霉素途径中一种重要的NAD(P)+依赖性脱氢酶,本研究的目的是预测其生物学性质及其对新霉素合成能力的影响。方法 由NCBI网站蛋白质数据库获得NeoE氨基酸序列,利用生物信息学网站及软件分析预测其特征。随后构建neoE过表达质粒,以接合转移方式得到高产重组菌株SF-neoE。最后经摇瓶发酵以及相关基因的转录分析探究NeoE对新霉素生物合成的影响。结果 NeoE由340个氨基酸组成,理论相对分子质量约为35228.33 Da,理论pI值5.14,不存在信号肽和跨膜区,是一个疏水性的稳定胞内蛋白。对含空载质粒菌株和重组菌株摇瓶发酵与RT-qPCR分析,结果表明第48小时neoE的相对表达水平较对照菌株提高了2.1倍,且NeoE的过量表达使得新霉素效价提高42%。结论 该结果为提高新霉素效价提供思路,并为后续定向改造NeoE探究其对费氏链霉菌生长代谢的影响奠定理论基础。 相似文献
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目的:利用响应面分析法优化纤维素酶和果胶酶复合水解丹参提取得到丹酚酸B的工艺。方法:在单因素试验基础上选取因素与水平,利用SAS分析软件以丹酚酸B得率为相应值,采用四因素三水平的响应面分析法,以获得多元二次线性回归方程选取较优工艺,并进行预测。结果:确定最优工艺条件为纤维素酶与果胶酶的配比为2∶1,复合酶量为68 U,酶解温度38.8℃,酶解pH 3.8,酶解时间0.9 h,提取预测值与理论值的相对误差为1.1%。结论:响应面法优化纤维素酶和果胶酶复合水解丹参提取得到丹酚酸B的工艺,方法简便,可预测性较优。 相似文献
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目的 筛选出那西肽高产菌株.方法 以活跃链霉菌CB040517作为出发菌株,通过紫外-氧化锂诱变处理,并结合前体复合氨基酸抗性筛选,选育那西肽高产菌.结果 通过致死率和正突变率的考察,确定紫外最佳诱变剂量为100s.在分离培养基上层加入氯化锂和底层加入复合氨基酸进行正突变株的定向筛选,选育得到那西肽高产菌株UV-19-A12,其摇瓶效价达904.00μg/mL,比出发菌株提高72.5%,经过五代斜面传代试验考察,该菌株遗传性状稳定.结论 紫外诱变和氨基酸抗性筛选可以获得那西肽高产菌株. 相似文献
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目的 建立酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素的含量。方法 对酶标仪法的主要影响因素进行优化,并验证此
方法的精密度;在此基础上,分别利用酶标仪法与分光光度计法测定 25 株突变株经 48 孔板发酵后林可霉素的含量并进行曲线
拟合,以验证两种方法的相关性。结果 确定了在测定林可霉素含量的适宜反应体系中 0.02mol/L 氯化钯溶液为 150μL,盐酸添
加浓度为 1mol/L,且该方法精密度良好;拟合曲线相关系数 R2
=0.9551,显示两种方法具有很好的相关性。结论 该实验结果表
明酶标仪法能准确、快速地测定微孔板发酵液中林可霉素的含量,为后续高通量选育林可霉素高产菌株奠定了基础。 相似文献
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目的 建立并优化费氏链霉菌的遗传操作体系,并通过分子改造得到新霉素效价提高的重组菌株,为后续获得新霉素高产菌株奠定理论基础。方法 选择费氏链霉菌最适产孢培养基和抗性筛选标记,对接合转移体系的关键影响因素进行优化,获得过表达neoC基因的重组菌株,以进一步研究neoC基因对新霉素效价的影响。结果 费氏链霉菌接合转移最适培养基为A75培养基,孢子最适处理条件为50℃热激10min,37℃预培养4h,最适供受比为10:1,安普霉素最适添加时间为15h,优化后接合转移频率提高了7.69倍,并得到了一株新霉素效价提高了22.29%的neoC基因过表达菌株SF-neoC。结论 成功建立并优化了费氏链霉菌的遗传操作体系,为后续基于费氏链霉菌分子改造的其它应用提供依据。 相似文献
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响应面法优化那西肽发酵条件 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 优化活跃链霉菌NXT-NA10摇瓶发酵生产那西肽的发酵条件.方法 首先用Plackett-Burman设计法筛选出影响发酵的显著因素,再用响应面法分析优化显著影响因素参数.结果 Plackett-Burman设计法筛选出4个显著影响因素为酵母粉、黄豆粉、NaCl和接种量,响应面法优化出它们的最佳数值分别为酵母粉0.31%、黄豆粉6.42%、NaCl 0.41%、接种量5.5%.结论 在此优化条件下,摇瓶效价达到(1121.28±26) μg/mL,比优化前提高了10.95%. 相似文献
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目的 研究中药饮片生产企业在药品GMP符合性检查中发现的检查缺陷,探讨中药饮片生产企业在质量管理方面存在的问题,为企业提升质量管理,确保产品质量提供借鉴和参考。方法 以2020年82家次中药饮片生产企业GMP符合性检查中存在的缺陷为研究对象,采用分析归纳的方法对缺陷项目进行分析。结果与结论 中药饮片生产企业在质量管理方面发现的严重缺陷所占比例最高,饮片生产企业应牢固树立质量主体责任意识,开展有针对性的改进措施,切实提升质量管理水平,确保中药饮片质量符合用药要求。 相似文献
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目的 研究不同通气量对生产新霉素的费氏链霉菌生理状况的影响,优化种子罐控制条件和移种时机,从而提高发酵水平,节约动力消耗,为工业化生产奠定基础。方法 在4个50L发酵罐中,控制装液量35L,转速400r/min,培养温度35℃,对同一批种子分别探究了通气比在0.5VVM(F2罐)、0.75VVM(F3罐)、1.0VVM(F4罐)、1.25VVM(F1罐)下,4罐还原糖、总糖、pH、菌浓、氨基氮、黏度、新霉素B产量、杂质C的变化趋势。结果 得出通气比大小对前20h孢子萌发速率影响小,20h后菌体开始进入对数生长期后,通气比较高(1.25VVM)有利于缩短pH回升时间,最大菌浓更高,杂质C组分更低。结论 前20h通气比控制在0.5VVM,20h后通气比控制在1.25VVM,最佳移种时机为35~40h。 相似文献