谷胱甘肽产生菌的菌种选育

采用紫外线和亚硝基胍对出发菌株SIPI-G0619进行诱变,同时使用乙硫氨酸、氯化锌和三氮唑三种抗性筛选物为筛选模型,最终筛选得到稳定的谷胱甘肽高产菌株SIPI-Gh435;谷胱甘肽产量为864mg/L,是出发菌株的4.9倍。     

多黏菌素E类似物的纯化和结构鉴定

目的对硫酸多黏菌素中的低含量成分进行纯化和鉴定。方法利用两次反相色谱纯化制备得到单组份,并通过Nα-(2,4-二硝基-5-氟苯基)-L-丙氨酰胺(Nα-(2,4-Dinitro-5-fluorophenyl)-L-alaninamide,FDAA)试剂衍生法研究组分的组成氨基酸及其构型。基于二级质谱和氨基酸组成的结果对化合物进行了结构鉴定。结果多黏菌素E2的氨基酸组成、分子量与文献报道一致;杂质3和杂质9结构中含有L-Leu残基和羟基化的脂肪酸链;杂质6含有L-Val残基。结论杂质3、杂质6和杂质9分别为3-OHE2、Val-E2和3-OH-E1。     

杆菌霉素D (Bacillomycin D) 的分离纯化及结构鉴定

利用大孔吸附树脂和反相色谱从枯草芽孢杆菌SIPI-2014406的发酵液中纯化得到化合物009和018,纯度均为99.6%。抗菌试验结果显示,化合物009抑菌活性微弱,018对革兰阴性菌具有抑制作用。氨基酸组成、质谱、二级质谱和核磁共振谱分析结果表明,化合物009是normal-C14杆菌霉素D(bacillomycin D),化合物018是其同系物。     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的聚乙二醇修饰

为提高纤溶酶的临床适用性，采用4种针对氨基修饰的mPEG试剂——mPEG—SPA5K、mPEG—SMB5K、mPEG—ButyrALD5K和mPEG2-NHS40K修饰蛇毒纤溶酶，以获得高比例的单修饰产物和较高的酶活性保留率。优化修饰反应条件，用Superdex75凝胶过滤色谱法分离纯化修饰产物。最终确定mPEG—SPA5K为最适宜的修饰剂。产物经sDs—PAGE和MALDI-TOF-MS法检测为单修饰，修饰产物酶活性收率为67．3％，修饰产物的热稳定性提高，免疫原性显著下降。     

单甲氧基聚乙二醇修饰L-门冬酰胺酶的研究

用一种单甲氧基聚乙二醇修饰剂修饰L-门冬酰胺酶，初步确定了最佳修饰条件，应用阴离子交换色谱和分子筛色谱分离纯化得到单修饰产物，酶活性回收率在40％以上，修饰产物的稳定性提高，免疫原性显著下降。