猕猴冠状动脉原代内皮细胞分离和培养及其功能验证

目的 建立非人灵长类动物冠状动脉原代内皮细胞的分离和培养方法,为研究人冠状动脉内皮细胞提供细胞模型。方法 无菌分离猕猴冠状动脉,胶原酶短暂消化后采用组织黏附法分离猕猴冠状动脉原代内皮细胞,利用流式细胞术检测并分选CD31阳性细胞,确定内皮细胞纯度;经前列腺素E₂(PGE₂)刺激后,以CCK-8法和高内涵细胞成像法分别检测猕猴冠状动脉原代内皮细胞活力和增殖能力、以Transwell法和Matrigel胶法分别检测猕猴冠状动脉原代内皮细胞迁移能力和体外成管功能。结果 猕猴冠状动脉原代细胞在10～14 d细胞覆盖培养瓶面积的80%左右,细胞呈不规则多边形和铺路石状。流式检测其纯度为31.7%左右,分选后利用流式细胞术再次检测内皮细胞纯度,达95%以上;PGE₂能显著上调猕猴冠状动脉原代内皮细胞的增殖、迁移和成管能力。结论 该研究成功建立猕猴冠状动脉原代内皮细胞分离培养方法,通过功能研究表明猕猴冠状动脉原代内皮细胞可以作为模拟人冠状动脉内皮细胞的体外细胞模型。     

猕猴下丘脑-垂体-肾上腺轴组织结构学特征观察

目的 观察猕猴下丘脑-垂体-肾上腺轴组织结构形态学特征,为模拟人的下丘脑-垂体-肾上腺轴的生理功能、病理反应提供参考。方法 猕猴安乐死后,完整取出下丘脑、垂体、肾上腺组织,经多聚甲醛(PFA)固定,制作石蜡切片及冰冻切片;HE染色观察基本结构及细胞分布状态;免疫组化法检测分泌的激素及受体;比较冰冻切片和石蜡切片染色的效果,对下丘脑组织的部分细胞组成进行鉴定。结果 下丘脑区域呈中空漏斗状,垂体状似豌豆,左右肾上腺位于两侧肝肾之间;HE染色显示下丘脑区域主要分布神经元和小胶质细胞,垂体分神经垂体、腺垂体,肾上腺由皮质和髓质构成;免疫组化检测到下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)并表达糖皮质激素受体(GR),垂体分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)并表达促肾上腺皮质激素释放激素受体1(CRHR1)和GR,肾上腺表达促肾上腺皮质激素受体(ACTHR);冰冻切片免疫荧光的结果更好的显示出下丘脑中包含神经元和小胶质细胞。结论 本研究成功制作了猕猴下丘脑、垂体、肾上腺组织切片,并观察了其相关解剖学、形态学特征,为模拟人类下丘脑-垂体-肾上腺轴生理和病理反应提供参考方法。     

急性双侧小脑中脚缺血性卒中一例

<正>患者女性,87岁。因头晕伴站立不稳3 d,于2014年3月31日入院。患者入院前3 d突发头晕伴站立不稳、行走不能,无头痛或视物旋转。外院急诊头部CT检查显示双侧基底节区、放射冠多发性腔隙,呈增龄性改变,临床诊断为腔隙性梗死。予以醒脑静注射液20 ml/d和丹红注射液20 ml/d静脉滴注,连续治疗3 d后病情无明显改善,遂以"头晕、行走不稳待查"收入我院神经内科。患者既往有明确     

胶原抗体联合LPS建立C57BL/6小鼠关节炎模型

胶原抗体诱导性关节炎(CAIA)是一种新颖的关节炎小鼠模型,与胶原诱导性关节炎(CIA)模型相比,CAIA不需要7周以上才出现关节炎表型,对于CIA模型不敏感的品系也有较好的诱导效果.然而,使用的高剂量诱导剂,一方面给小鼠带来严重的不良反应,甚至出现死亡现象,另一方面也导致5-克隆胶原抗体混合物的不必要浪费.降低5-克隆胶原抗体混合物和脂多糖(LPS)的使用剂量,在避免模型小鼠死亡,节约5-克隆胶原抗体混合物的同时,成功高效诱发C57BL/6小鼠关节炎模型,为类风湿关节炎(RA)发病机制的研究提供了有效方法.     

没药的质量分析与评价

目的建立客观评价没药药材质量的分析方法,对收集的不同批次没药药材的质量进行分析与综合评价,为其质量控制提供参考。方法采用GC-MS法对没药中挥发性成分进行分析与鉴定;采用HPLC-PDA法分析没药中非挥发性成分;并采用相似度软件和SPSS 16.0软件进行相似度评价和主成分分析。结果 GC-MS法分析鉴定了没药中28个化学成分,建立了不同批次没药药材非挥发性成分的HPLC特征图谱;两类指纹图谱相似度分析结果均表明,收集于不同批次的没药药材相似性较差,其中收集于海南和广东的相似度较高;主成分分析结果表明倍半萜烯类成分、有机酸酯类成分和二萜酸类成分对药材品质起到主导作用。综合分析提示,收集于海南药材公司的没药药材质量较佳。结论所建立的质量分析方法为没药质量控制提供了科学依据。     

HPLC测定柔肝胶囊中5种活性成分的含量

目的:建立柔肝胶囊含量测定的质量控制方法。方法:应用HPLC-DAD法测定其中丹酚酸B、姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的含量。采用Apollo C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以4%醋酸水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测波长286,426 nm。应用HPLC-ELSD法测定其中牛磺熊去氧胆酸的含量。采用A-pollo C18柱(4.6 mm×250mm,5μm),以乙腈-乙酸-乙酸铵缓冲液(pH 4.5)为流动相,等度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,ELSD漂移管温度80℃,雾化气体压力35 psi,喷雾器温度36℃。结果:丹酚酸B、姜黄素类成分、牛磺熊去氧胆酸的线性关系良好(r=0.999 3～0.999 9),线性范围分别为0.148 0～1.850,0.125 6～1.570,0.043 2～0.540 0,0.033 6～0.420 0,0.972 0～12.15μg;精密度、重复性、稳定性的RSD都低于3%;加样回收率为97.8%～101.7%。结论:本方法简便快捷、结果准确且重现性好,可用于柔肝胶囊的质量控制。     

猕猴原代肾小球系膜细胞分离提取培养与鉴定

目的 探索一种简单方便、重复性好的非人灵长类动物原代肾小球系膜细胞(GMCs)体外提取、培养及鉴定的方法。方法 在无菌条件下取出猕猴肾脏,利用两种不同孔径的纱网(介于100目到200目之间)分离出肾小球,设置不同浓度(0.1、0.2 mg/ml)Ⅵ型胶原酶消化肾小球,同时在这两个浓度基础上设置不同消化时间(10、15 min),将消化后的肾小球接种到细胞瓶中,观察不同消化条件下GMCs的生长状况。显微镜下观察GMCs的结构,免疫荧光和Western blot法检测GMCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Nephrin蛋白的表达。利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激后观察GMCs生物学特性,CCK-8法和高内涵细胞成像系统法分别检测GMCs活力和增殖情况;Transwell法和细胞划痕实验检测GMCs迁移能力。结果 利用0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min搜集到的肾小球贴壁较多,肾小球细胞生长状态较好。原代培养的肾小球3 d贴壁,7 d开始移出不规则形状或星状的细胞,经21～35 d GMCs逐渐铺满瓶底。GMCs中α-SMA蛋白阳性,Nephrin蛋白阴性。10 ng/m...     

基于主成分分析和相似度分析的乳香药材质量评价研究

目的:对收集的不同批次乳香药材质量进行分析与综合评价。方法:采用GC-MS法对乳香中挥发性成分进行分析鉴定;采用HPLC-PDA法分析乳香中非挥发性成分,并采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》和SPSS16.0软件进行相似度评价和主成分分析。结果:GC-MS分析鉴定了乳香挥发油中的12种挥发性成分,相似度分析表明收集于广东药材公司乳香样品之间的相似度较高(相似系数为0.940);其次为收集于云南药材公司和南京药材公司的乳香样品相似度较高(相似系数为0.934);主成分分析结果表明挥发性成分中二萜烯类成分对乳香质量影响最为显著。乳香非挥发性成分相似度分析表明:收集于云南药材公司和广东药材公司的样品相似度最高(相似系数为0.972);其次为收集于广东药材公司和南京药材公司的样品,相似度也较高(相似系数为0.960);主成分分析表明非挥发性成分中乳香酸类成分对乳香质量影响最为显著。综合评价结果认为:收集于广东的乳香药材质量较其他省区收集的乳香药材为优。结论:研究结果为乳香药材的质量控制评价提供了一定依据和参考。     

没药的质量分析与评价

目的 建立客观评价没药药材质量的分析方法,对收集的不同批次没药药材的质量进行分析与综合评价,为其质量控制提供参考。方法 采用GC-MS法对没药中挥发性成分进行分析与鉴定;采用HPLC-PDA法分析没药中非挥发性成分;并采用相似度软件和SPSS 16.0软件进行相似度评价和主成分分析。结果 GC-MS法分析鉴定了没药中28个化学成分,建立了不同批次没药药材非挥发性成分的HPLC特征图谱;两类指纹图谱相似度分析结果均表明,收集于不同批次的没药药材相似性较差,其中收集于海南和广东的相似度较高;主成分分析结果表明倍半萜烯类成分、有机酸酯类成分和二萜酸类成分对药材品质起到主导作用。综合分析提示,收集于海南药材公司的没药药材质量较佳。结论 所建立的质量分析方法为没药质量控制提供了科学依据。     

胃癌黏膜组织miR-127、PALB2表达与临床特征及预后的相关性研究

目的 探讨胃癌黏膜组织中微小RNA-127(miR-127)、乳腺癌易感基因相关蛋白2(PALB2)的表达与临床特征及预后的相关性.方法 选取2013年3月至2015年7月于该院收治且已确诊为胃癌患者120例作为研究对象.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测研究对象胃癌黏膜组织、癌旁黏膜组织中miR-127和PALB2相对表达水平,对两者与胃癌临床特征的关系进行分析.采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析,以及COX生存回归分析影响胃癌患者预后的因素.结果 癌旁黏膜组织中miR-127相对表达水平高于胃癌黏膜组织,而PALB2相对表达水平则低于胃癌黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);miR-127高表达组生存率为30.00％,miR-127低表达组生存率为10.00％,差异有统计学意义(P<0.05).多因素分析发现,淋巴结转移、TNM分期、浸润程度、PALB2高表达和miR-127低表达均是影响预后的独立危险因素(P<0.05).结论 胃癌黏膜组织miR-127、PALB2表达与临床特征及预后密切相关,可作为胃癌患者早期检测和预后的监测指标.