人血清载脂蛋白A-I的分离、纯化及其测定

用超离心法制备人血清高密度脂蛋白(HDL);甲醇/氯仿脱脂;经Sephadex G-150层析及DEAE-纤维素(DE-52)离子交换得纯化载脂蛋白A-I(Apo A-I),免疫新西兰兔,获得效价为1:32的特异性抗人Apo A-I抗血清。用本室建立的单向火箭免疫电泳法测定了158名健康中年人与9名老人的血清Apo A—I含量,结果发现:β-脂蛋白<5g/L,总胆固醇<2mmol/L的人血清Apo A-I含量男女分别为2.06±0.16g/L和2.07±0.15g/L;而β脂蛋白≥5g/L,总胆固醇≥2mmol/L的人血清Apo A-I含量男女分别为1.75±0.15g/L和1.82±0.1g/L,由此可见,血脂正常的男性和女性的Apo A—I含量均显著高于血脂高的男性和女性。80岁以上老年人的血清Apo A-I含量为2.1±0.1g/L,也在正常范围。与文献报道比较,我国人的血清Apo A-I含量高于外国人,这与我国人HDL水平较外国人高一致。     

神经鞘磷脂致动脉粥样硬化危险因子

1 临床资料 2004-06/2005-08就诊于河南大学第一附属医院血脂异常的患者,根据血脂异常的类型不同分为:总胆固醇(TC)升高组110(男53,女57)例,平均年龄57岁;甘油三酯(TG)升高组70(男31,女39)例,平均年龄54岁;低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高组90(男40,女50)例,平均年龄57岁;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)偏低组39(男19,女20)例,平均年龄53岁.     

血脂异常患者血清神经鞘磷脂的测定及其意义

目的:评价血脂异常患者血清神经鞘磷脂(SM)水平。方法:将血脂异常的患者分为总胆固醇(TC)升高组、三酯酰甘油(TG)升高组、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高组和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低组,与对照组SM水平比较。酶法测定SM、TC、TG、LDL-C、HDL-C。用单因素方差分析,Dunnett检验处理数据。结果:血脂异常患者SM水平与对照组比较有显著性差异(P<0.05);TC、LDL-C升高组SM水平与对照组比较有显著性差异(P<0.05),TG升高组、HDL-C降低组SM水平与对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。结论:血清SM水平和已知的致动脉粥样硬化危险因子密切相关,提示SM可能是导致动脉粥样硬化发生的重要因素。     

四氧嘧啶性糖尿病大鼠体内高密度脂蛋白和胆固醇的代谢

四氧嘧啶性糖尿病大鼠,血清总胆固醇(TC)、胆固醇酯(CE)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)较对照均显著上升,但极低密度脂蛋白-胆固醇(VLDL-C)和HDL-C/LDL-C则没有差别。影响血清高密度脂蛋白(HDL)水平的几个因素测定结果为脂蛋白脂酶(LPL)和肝内皮细胞脂酶(HEL)及肝细胞对~(125)I-HDL的吸收和分解能力显著低于对照;卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性和肝灌流液中HDL-C水平显著上升。 可见糖尿病大鼠由于体内胰岛素绝对缺乏可通过以下几个方面影响HDL和胆固醇代谢:降低肝细胞对HDL的吸收和分解;促进肝脏分泌HDL;抑制HEL和LPL的活性;升高LCAT活性;升高血清TC、CE、HDL-C和LDL-C水平,而对VLDL-C及HDD-C/LDL-C没有影响。     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的简易测定法

用两酶(胆固醇氧化酶和辣根过氧物酶)系统测定血清在37℃保温40min后游离胆固醇的减少量,以表示卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性(胆固醇酯化量每小时nmol/ml血清)。操作简便、准确、重复性好(CV<3％)。我们应用此法测定了四氧嘧啶性糖尿病大鼠和正常大鼠血清LCAT的活性分别为82.72±6.3和52.80±3.3(±SE),前者显著高于后者(p<0.001),与文献报道一致。     

溶血血小板活化因子乙酰基转移酶(LPAFAT)活性检测方法的比较

目的 通过3种方法检测溶血血小板活化因子（platelet activating factor,PAF）乙酰基转移酶（Lyso-PAF acetyl transferase,LPAFAT）的活性并测定抑制剂对酶活性的抑制作用,比较这些方法的优劣。方法 分别采用LC/MS/MS检测产物PAF,巯基反应探针结合分光光度法检测产物CoA-SH,TLC检测荧光标记产物法鉴定阳性和假阳性两种不同化合物对LPAFAT酶活性的抑制作用。结果 LC/MS/MS方法通过检测天然产物PAF的含量测定酶活性,抑制剂筛选结果准确可靠。巯基反应探针结合分光光度法虽然可以监测产物CoA-SH的含量,但反应体系中产生了大量干扰性的CoA-SH,因此并不能真实反映LPAFAT酶活性,亦不适于抑制剂活性筛选。TLC检测荧光标记产物法因底物NBD-Lyso PC结构已被修饰,不能代表天然底物的真实反应情况,可能存在错筛和漏筛。结论 LC/MS/MS检测产物PAF测定LPAFAT活性以及筛选抑制剂,方法灵敏,数据结果可靠,但成本较高。监测产物CoA-SH的含量不适合于测定LPAFAT酶活性。TLC检测荧光标记产物,操作简便,灵敏度高,但筛选抑制剂时存在假阳性的可能,只适用于抑制剂活性的初筛。     

过表达磷脂转运蛋白对小鼠脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸含量的影响

 目的：探讨血浆脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸（S1P）和磷脂转运蛋白（PLTP）的相互作用及机制。方法：检测雄性10周龄PLTP转基因（PLTP-Tg）及野生型（WT）小鼠血浆S1P和脂蛋白上S1P含量,转运实验检测PLTP对S1P的转运作用,免疫印迹检测S1P载体载脂蛋白M（apoM）含量。结果：PLTP-Tg小鼠血浆S1P含量较WT小鼠下降21.1%(P＜0.01),高密度脂蛋白（HDL）组分上S1P含量下降约35.1%,而低密度脂蛋白（LDL）组分上S1P比例则增加了127.4%。转运实验表明,在37 ℃时D-Hanks 缓冲液中PLTP能够促进S1P从红细胞转运至重组脂质体。PLTP-Tg小鼠血浆中apoM含量与WT小鼠比较无变化。结论：生理水平PLTP对保持HDL上S1P含量有重要意义,过表达PLTP可显著降低HDL上S1P,同时升高LDL上S1P,其机制可能与PLTP介导S1P转运有关。     

胰岛素与高密度脂蛋白的代谢

已知高胰岛素水平是致动脉粥样硬化的因素,而高密度脂蛋白(HDL)则是抗动脉粥样硬化的因素。许多动物实验证明,体内胰岛素水平过高,产生主动脉壁的损伤,阻止实验性动脉粥样硬化的消退。HDL水平下降。体内胰岛素水平过低,实验性动脉粥样硬化的发生率下降,但胰岛素用药后,则动脉粥样硬化的发生率又增加了。同时HDL水平上升。胰岛素究竟是如何影响HDL水平的呢?     

利用细胞培养基或动物血浆中的荧光标记产物测定鞘磷脂合酶活性

鞘磷脂合酶（SMS）催化神经酰胺（ceramide,Cer．）转变为鞘磷脂（sphingomyelin,SM）。近来的研究表明神经酰胺和鞘磷脂参与了代谢综合征的过程,因而鞘磷脂合酶被认为是开发抗代谢综合征药物的潜在靶点。鞘磷脂合酶有两个同工酶,分别称为鞘磷脂合酶1（SMS1）和鞘磷脂合酶2（SMS2）。这两种同工酶的亚细胞定位不同,在不同组织中的表达水平也有差异。到目前为止,已发表有多种方法测定组织和细胞匀浆中的总SMS活性,这些方法通过分析总反应体系或细胞内的酶促反应产物来衡量SMS活性。本文介绍一种测定SMS活性或筛选SMS抑制剂的新方法。我们将荧光标记的神经酰胺（NBD-Cer．）作为底物与细胞孵育,或者将该底物注射到小鼠体内,然后监测在细胞培养基或小鼠血浆中出现的荧光标记的鞘磷脂（NBD-SM）的含量。采用这种办法可有效检测出D609（一种鞘磷脂合酶抑制剂）对细胞和小鼠整体SMs活性的抑制作用。我们进一步采用该方法检测了SMS1基因敲除小鼠和sMs2基因敲除小鼠的SMS活性,结果发现注射底物后,SMS2基因敲除小鼠（而不是SMS1基因敲除小鼠）血浆中NBD-SM的堆积被明显阻断。因而该方法可用于检测生理或药理条件下在体或离体组织的SMS活性、筛选SMS抑制剂、甚至筛选SMS2特异性抑制剂。