一项关于食品中空肠弯曲菌计数方法的研究简

目的 为了了解食品中空肠弯曲菌的数量,探寻一种实用的空肠弯曲菌计数方法.方法 通过不同浓度的染菌实验,对平板计数法、MPN法和Simplate方法进行比较分析.结果 当染菌量在10 CFU/g（mL）时,MPN法中至少有1管出现了阳性,simplate也可以检出且与设定值接近.因此这两种方法的检测限均为≥10 CFU/g（mL）.平板计数法的检测限应为≥30 CFU/g（mL）,在此范围内得到的结果与设定值相差0.9 ～2.4倍,小于10倍.结论 事实上,实验室可以选用不同的方法来评价食品中空肠弯曲菌的污染情况.如果检疫过程中要求结果准确,我们建议使用MPN和Simplate方法来计数加工过的食品.对于猪肉和家禽这类高污染的畜产品,选用平板计数法计数则更便捷.     

空肠弯曲菌hipO基因的Real-time PCR检测研究

目的建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时(Real-time)PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定。空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌,可以导致人类的急性肠炎与食物中毒,并能引发格林-巴利综合征等并发症。为更好地利用分子生物学技术对空肠弯曲菌进行快速、准确的基因检测,本研究从样品增菌液与单菌落中提取细菌DNA,建立了针对空肠弯曲菌特异的hipO(hippuricase,马尿酸酶)基因的Real-time PCR方法,用于空肠弯曲菌的快速筛选检测与可疑菌落快速鉴定。试验结果表明,该方法检测细菌的灵敏度为1~10CFU,人工布菌鸡肉的检测灵敏度为1~10CFU。本研究所建立的空肠弯曲菌荧光实时PCR方法具有准确、可靠、快速的特点。     

空肠弯曲菌保存方法的比较

空肠弯曲菌是近年来在全球范围内被广泛重视的人畜共患病病原菌,该菌培养条件苛刻,菌株不易保存。为了解决保存难这一难题,此实验对七种通常用于空肠弯曲菌保存的方法,进行了详细的比较和研究。结果表明温度在-70℃适合于菌株的长期保存,温度在2℃～8℃保存时间较短,但操作简便,适用于菌株的暂时保存。     

空肠弯曲菌检测与基因分型的研究进展

随着分子生物学技术的迅猛发展,空肠弯曲菌的基因诊断与分型方法因其敏感性、特异性、分型率和分辨力高于传统的检测方法,且操作简便、快速而备受重视。本文对空肠弯曲菌常规生化检测方法、PCR方法、RELP分型、RAPD分型、PCR-RFLP分型、核糖体分型、鞭毛蛋白基因分型、AFLP分型的进展作了综述。     

2006-2008年江苏地区不同宿主感染空肠弯曲菌及其耐药性

目的检测2006-2008年江苏地区鸡、水禽、奶牛、丹顶鹤、猪、实验猴等标本感染空肠弯曲菌及其耐药性。方法采用APICampy System进行生化与分类鉴定,结合弯曲菌多重PCR检测方法对来自江苏地区的禽、牛、猪、猴3 010份标本,检测分离株及其耐药性。结果共检测样本3010份,402份空肠弯曲菌阳性,阳性率13.36%,其中家禽样阳性率15.83%（258/1630）;水禽10.40%（52/500）;奶牛7.65%（39/510）;猪18.75%（30/160）;猴15.00%（15/100）;丹顶鹤12.50%（10/80）;糜鹿0%（0/30）。选择不同宿主来源的108株对10大类27种抗生素高度敏感率的是：氯霉素100%、阿莫西林99.07%、阿米卡星92.59%、头孢噻肟91.67%、阿齐霉素90.74%;高度耐药率的是：头孢哌酮99.07%、复方新诺明99.07%、头孢孟多99.07%、磺胺甲基异噁唑97.22%、头孢拉丁91.67%。结果显示,108株分离株的耐药主要集中在9耐～20耐,占85.19%,猪分离株的多重耐药性较其它宿主来源分离株严重。结论江苏地区空肠弯曲菌的流行和耐药状况呈现多样化和复杂化,不同宿主来源分离株耐药性和多重耐药性存在差异。     

一种快速鉴别牛肉中大肠杆菌O157∶H7检测方法的建立及应用

目的 建立一种快速、准确检测牛肉中大肠杆菌O157∶H7的方法。方法 利用抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体2G5(捕获抗体),酶标单克隆抗体2E3(HRP-2E3,检测抗体),建立可用于检测大肠杆菌O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法,同时对反应条件进行优化并对该方法进行评价。 结果 通过优化得到最佳反应条件,单克隆抗体2G5最佳包被浓度为4.48 μg/mL,HRP-2E3最佳检测浓度为19.9 μg/mL。该方法对纯培养菌液最低检出限为 1×10⁵ CFU/mL,具有良好的敏感性,且特异性良好,与其他大肠杆菌、沙门氏菌、李斯特菌等均无交叉反应。板内及板间变异系数均小于7%,具有较高的精密度。人工污染牛肉样品增菌8 h后,对大肠杆菌O157∶H7的检出限为1 CFU/25 g。结论 建立的双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度、准确度、重复性良好,特异性强,可用于临床实际样品检测。     

空肠弯曲菌选择性增菌培养和分离方法的比较

目的探求较好的空肠弯曲菌培养分离方法。方法采用GB/T4789.9-2003、SN0175-92、ISO10272-1:2006、FDA/BAM:2003、USDA/FSIS:1998,5个标准分离空肠弯曲菌。结果人工布菌量在每份样103CFU/mL时,5种方法都能检出,但在101~102CFU/mL时FDA、USDAI、SO相对灵敏度要高。结论肉样,建议采用USDA方法。而水产品建议采用FDA方法。     

空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备

目的为获得空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体,用于空肠弯曲菌的检测和研究。方法用空肠弯曲菌ATCC29428株灭活全菌作为抗原,免疫BALB/c小鼠,待抗体水平达到1∶51 200时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0进行融合。同时以粗提天然鞭毛蛋白和人工表达重组鞭毛蛋白包板,用间接ELISA方法筛选,多次克隆化培养后获得的单抗用Western blot进行生物学特性鉴定。结果获得3株持续、稳定分泌抗空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G8、1G9和3F2。结论获得的空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体为建立空肠弯曲菌的蛋白检测及后续研究奠定基础。     

PCR法和培养法调查食品和水中空肠弯曲杆菌的比较研究

目的　PCR方法和培养法调查食品和水中空肠弯曲杆菌的比较研究。方法　用空肠弯曲杆菌VS1基因的序列为模板设计一对引物 ,建立一种快速从食品和水中检测空肠弯曲杆菌的PCR方法 ;同时对南京地区的屠宰场、超市和牛奶场等地采取 10 0份鸡肉、10 0份生牛奶及 10 0份井水及自来水进行空肠弯曲杆菌PCR法和培养法双向检查。结果　研究表明该PCR方法只对空肠弯曲杆菌能特异的扩增出 35 8bp片段 ,而其它结肠弯曲杆菌、胎儿弯曲杆菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、沙门氏菌、大肠杆菌等均不能扩增出 ,检测灵敏度达 8CFU/ml,特异性与常规生化检查是一致的 ,发现 30 % (30 / 10 0 )的鸡肉为阳性、30 % (30 / 10 0 )的生牛奶为阳性、14 % (14 / 10 0 )的水为阳性。结论　调查结果表明在市场上销售的鸡肉、牛奶、牛奶制品及井水存在不同程度空肠弯曲杆菌污染 ,如果加工不当或饮食习惯不卫生 ,会对消费者的健康构成潜在威胁。