肝X受体调控脂代谢研究进展

肝X受体(LXR)属于核受体家族成员,通过与类视黄醇X受体结合形成异二聚体,调控靶基因的表达.LXR是胆固醇和脂质代谢的重要调节因子,通过调控其靶蛋白ATP结合盒转运蛋白A1、ATP结合盒转运蛋白G1和细胞色素P4507A1等促进胆固醇逆转运.此外,LXR激动剂能够调控脂质代谢及炎症介质基因的表达,改善糖代谢,从而发挥...     

G蛋白耦联受体二聚体药理学研究进展

G蛋白耦联受体(GPCR)作为几乎遍布人类每一细胞的功能受体,具有多种生理和病理学功能。GPCR通过激活细胞内的不同的G蛋白亚基,从而激活不同的胞内通路,产生不同生物学效应。近年来,越来越多的研究表明这些受体通过二聚体的形式参与调节生理活动,对信号识别及转导有重要作用,进而为生理变化及疾病治疗提供了新的靶点。现随着生物技术和分子生物学的发展,GPCR二聚体研究已取得了很大的进展。就GPCR所形成的同源、异源二聚体对生理及病理重要作用作一简述。     

以ADP受体P2Y12为靶标的中药抗栓活性无标记细胞表型筛选

[目的]建立二磷酸腺苷(ADP)受体P2Y12的无标记方法以高通量、低毒性地筛选中药抗血小板/血栓活性物质。[方法]应用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒p CMV-h P2Y12-C-His转染入HEK293细胞,采用遗传霉素(G418)筛选获得稳定转染的h P2Y12-C-His-HEK293细胞系,以实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)的方法,分别从转录和翻译水平验证P2Y12-His的表达,采用Lable-free Enspire多功能读板机检测激动剂ADP的激动作用,以及抑制剂替卡格雷的抑制作用,以确定筛选体系的可靠性,并利用该体系筛选中药活性组分及单体共30种。[结果]经PEI转染和G418筛选获得了P2Y12-His-HEK293稳转细胞株。q RT-PCR和Western Blot结果表明P2Y12-His m RNA和蛋白表达量均显著性增加。Lable-free Enspire多功能读板机检测实验表明P2Y12受体激动剂ADP,抑制剂替卡格雷,有显著的激动及抑制作用,且具有明显的量效关系。中药组分及单体筛选结果表明,有7种组分或单体对P2Y12受体具有良好的抑制作用。[结论]本实验成功建立了ADP受体P2Y12Lable-free Enspire多功能读板机的无标记高通量筛选。     

一种改良的5-羟色胺转运体活性化合物高内涵筛选方法

[目的]建立一种改良的5-羟色胺转运体(SERT)活性化合物高内涵筛选(HCS)方法,包括构建稳定转染h SERT细胞株和优化SERT活性化合物HCS条件。[方法]应用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒h SERT-pc DNA3转染入HEK293细胞,采用遗传霉素(G418)筛选获得稳定转染细胞系,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)方法分别从转录和翻译水平验证h SERT表达,采用SERT荧光底物4-(4-二甲氨基)苯基-1-甲基吡啶(APP+)在高内涵系统上验证SERT摄取功能并优化其检测条件,应用选择性SERT抑制剂Fluoxetine和SERT增强剂Tianeptine验证SERT HCS方法可靠性。[结果]经PEI转染和G418筛选获得了稳定转染h SERT-HEK293细胞株。与HEK293细胞相比,h SERT-HEK293细胞中h SERT m RNA和蛋白表达量均显著性增加,APP+摄取实验表明h SERT-HEK293细胞摄取APP+显著性增加,并可被Fluoxetine特异性抑制。实验优化了高内涵检测APP+摄取实验中APP+浓度、孵育时间、数据分析方法等条件。Fluoxetine显著地抑制h SERT-HEK293对APP+的摄取,Tianeptine显著地增强h SERT-HEK293对APP+的摄取,证实此HCS方法的可靠性。[结论]本研究首次优化了应用APP+检测SERT活性的HCS条件,显著提高了SERT荧光检测方法灵敏度,并首次证实此HCS方法适用于SERT促进剂筛选,因此,建立了一种改良的SERT活性化合物HCS方法。     

G蛋白耦联受体二聚体药理学研究进展

G蛋白耦联受体(GPCR)作为几乎遍布人类每一细胞的功能受体,具有多种生理和病理学功能。GPCR通过激活细胞内的不同的G蛋白亚基,从而激活不同的胞内通路,产生不同生物学效应。近年来,越来越多的研究表明这些受体通过二聚体的形式参与调节生理活动,对信号识别及转导有重要作用,进而为生理变化及疾病治疗提供了新的靶点。现随着生物技术和分子生物学的发展,GPCR二聚体研究已取得了很大的进展。就GPCR所形成的同源、异源二聚体对生理及病理重要作用作一简述。     

麦门冬汤化学成分及治疗肺纤维化研究进展

肺纤维化是肺功能障碍和呼吸衰竭的主要病理基础。其发病率逐年上升,被列为影响人类健康的重大疾病之一。中医药在肺部疾病防治方面具有不良反应小、改善患者整体病理状态、提高生活质量等优势。麦门冬汤由麦门冬、半夏、人参、甘草、粳米、大枣六味药组成,主要用于治疗肺纤维化,临床研究证明其具有抗炎、抗氧化、抗纤维化等作用。该研究主要从其化学成分、肺纤维化治疗、药理作用及作用机制等几个方面进行论述,以期为临床治疗肺纤维化研究提供理论依据,为后续中医药治疗肺纤维化提供参考及启发。