不同培养基和胰蛋白酶对Vero细胞培养及消化效果的比较

目的 比较不同公司生产的无血清培养基对病毒性疫苗生产用Vero细胞培养效果,及基因工程胰蛋白酶的细胞消化效果,以判断是否适用。方法 实验组用VirusPro Vero-A培养基进行Vero细胞的培养,用Trpzyme消化细胞。对照组用VP-SFM培养基进行细胞培养,用TrypLE Select消化细胞。两组Vero细胞以相同密度接种在T175培养瓶中,以相同的培养条件和传代方法在T175瓶和细胞工厂中各培养3代。培养期间观察细胞的上清液、形态以及汇合度,消化后检测细胞活率并计算细胞收获量。采用配对t检验比较两组消化液的pH值、总消化时长、37 ℃消化孵育时长、细胞活率以及细胞收获量。结果 两组细胞生长状态均良好。配对t检验显示,实验组消化液的pH值（6.99）、总消化时长（17.28 min）和37 ℃消化孵育时长（6.93 min）均值均大于对照组消化液的（分别为6.75、12.34 min、3.30 min）,细胞活率（94.79%）及细胞收获量（T175瓶：3.91×10⁷个;细胞工厂：1.90×10⁹个）均值均高于对照组的（分别为90.20%、3.33×10⁷个、1.26×10⁹个）,且差异有统计学意义（t值分别为9.17、3.46、2.98、2.31和4.38,P值均<0.05）。结论 实验组无血清培养基培养效果较好,基因工程胰蛋白酶细胞消化液温和、细胞损伤小,均适用于Vero细胞。     

国产与进口牛血清促进Vero细胞生长的比较

 目的  通过对国产与进口牛血清促进Vero细胞生长的比较,筛选可替代进口血清用于轮状病毒疫苗生产中Vero细胞培养的国产牛血清。方法  以国产的3批胎牛血清和1批新生牛血清为待评血清,以进口胎牛血清为对照血清,制备细胞培养液。在T175细胞培养瓶（T瓶）和2层细胞工厂中连续传代培养Vero细胞各3代,观察每一代次的培养上清液、细胞形态和细胞汇合度,计算细胞收获量和与对照血清相比较的相对增长率。采用单样本t检验对细胞收获量与生产要求的细胞产量（T瓶：>1.50×10⁷ 个/ml;细胞工厂：>3.00×10⁸ 个/ml）进行比较。根据细胞相对增长率判断国产血清与进口对照血清促细胞生长活性的相近程度。结果  国产血清培养的Vero细胞生长状态均良好。T瓶培养时,国产血清组的细胞收获量为（1.56～9.30）×10⁷ 个/ml,与生产要求细胞产量的差异有统计学意义（t=2.44～3.76,P<0.05）,且t值均>0,说明符合生产要求。细胞相对增长率接近或超过100%。细胞工厂培养时,国产血清组的细胞收获量为（1.80～4.92）×10⁸ 个/ml,与生产要求产量的差异无统计学意义（t=－0.23～1.16,P>0.05）,但是只有1批胎牛血清和新生牛血清的细胞收获量均值>3.00×10⁸ 个/ml,且细胞相对增长率>90%。 结论  经与进口牛血清比较,国产的1批胎牛血清和1批新生牛血清可替代进口血清,用于轮状病毒疫苗生产中的Vero细胞培养。     

测定六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度的荧光灶试验的验证

目的  验证荧光灶试验（fluorescence focus assay,FFA）作为测定六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度方法的可行性。方法  采用FFA法测定轮状病毒G1、G2、G3、G4、G8、G9型滴度,并验证该法的专属性、精密度、线性、准确性、范围和耐用性。 结果  各型病毒均可与对应的单克隆抗体（单抗）发生特异性荧光灶反应,不与抗异型病毒单抗发生交叉反应。试验内和试验间测定结果的相对标准偏差均小于5%。各型轮状病毒实测滴度与理论滴度间的线性相关系数均≥0.99。不同稀释度各型病毒的回收率为90%~120%。改变病毒培养时间对检测结果没有影响。该法的定量限为：G1、G2、G3、G4、G8、G9型滴度分别>2.8、>4.2 、>3.7、>3.6、>4.1和>4.2 lg荧光灶单位/ml,均符合六价轮状病毒疫苗的质控要求。结论  该法测定不同型轮状病毒滴度具有较好的专属性、精密度、线性和准确性,可用于六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度的测定。