Wistar大鼠脑和脊髓微血管周细胞的分离、培养、鉴定及其功能差异的比较

探讨Wistar大鼠脑微血管周细胞（brain microvascular pericyte,BMP）和脊髓微血管周细胞（spinal cord microvascular pericyte,SCMP）之间的差异。运用超高速离心法获取脑和脊髓微血管,再用周细胞培养基培养,使周细胞爬出,然后用NG2和PDGFRβ鉴定周细胞,用鬼笔环肽着染F-actin,用流式细胞仪测定细胞周期,用免疫印记分析实验测定周细胞功能蛋白。结果表明：两种周细胞的形态有明显差异,BMP表达的F-actin显著多于SCMP,两种周细胞的细胞周期无显著差异,BMP相比于SCMP表达更多量的α-SMA、NG2和PDGFRβ。更多的了解两种周细胞的异同点,为研究其在中枢神经系统生理和病理状态下的作用奠定基础。     

杨梅素诱导人肝癌HepG2凋亡机制研究

目的对杨梅素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制进行研究。方法采用MTT法测定细胞死亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用琼脂糖电泳观察DNA片段化。用Western印迹法分析相关蛋白的变化。结果杨梅素明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞调亡。Caspase-3,caspase-9抑制剂可明显抑制100μg/ml杨梅素诱导的凋亡。Western印迹结果显示100μg／ml杨梅素作用于细胞后,细胞色素c水平明显升高。结论杨梅素（100μg／ml）通过激活线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

荧光显微镜观察封闭式脊髓窗内的大鼠脊髓微循环

目的 探讨应用荧光显微镜通过改进的封闭式脊髓窗,观察大鼠脊髓背侧软脊膜微循环状态的可行性及效果.方法 用8周龄雄性SD大鼠,暴露T9至T11棘突,咬除T10棘突和椎板,暴露硬脊膜；在T9和T11棘突上安装固定器辅助物.用牙科丙烯酸树脂和玻璃片为原料在T10节段安装改进的封闭脊髓窗.采血并离心(2 000 ×g)收集红细胞,将100 μL压积的红细胞用Dil荧光染料(5 mg/L)体外孵育,静脉注射人体内；用罗丹明6G(0.3 g/L)静脉注射,体内标记白细胞.大鼠脊柱用微循环观测椎体固定器进行固定.用动物活体荧光成像显微系统进行观测和记录.结果 通过该系统可以观测大鼠软脊膜上微血管的形态和分布特点、血管密度；可以观测到Dil标记的红细胞在血管内的黏附和流速,观察和记录罗丹明6G标记的白细胞在血管壁的黏附滚动.结论 改进式的封闭脊髓窗和微循环观测椎体固定器,可用于对大鼠软脊膜上微血管进行观察和检测.     

短链脂肪酸改善脊髓损伤引起的肝脏功能异常

目的 探讨短链脂肪酸(SCFAs)对脊髓损伤(SCI)小鼠模型肝脏炎症和脂质代谢异常的作用。方法 将30只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术(Sham)组、脊髓损伤(SCI)组和SCFAs干预(SCI+SCFAs)组,每组10只。采用挫伤性损伤法或椎板切除术处理小鼠胸10节段(T₁₀)制备小鼠模型。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肝脏巨噬细胞(CD68)、炎症因子[白细胞介素(IL)-1α、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNFα)]水平,以及脂质代谢相关基因[固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、乙酰辅酶A羧酸化酶(ACC)、肝X受体α(LXRα)和过氧化物酶体增殖激活物受体α(PPARα)]的表达情况,采用全自动生化分析检测血清甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。结果 与SCI组比较,SCI+SCFAs组CD68和TNFα mRNA水平显著降低(P<0.05),而3组IL-1α和IL-1β mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。与Sham组相比,SCI组体重、肝脏比重和血清TG水平均显著降低(...     

小鼠脊髓微血管周细胞的体外培养及鉴定

目的应用周细胞培养基(PCM)分离筛选小鼠脊髓微血管周细胞(SCMP),对其生物学功能进行评价。方法10只3周龄C57小鼠,无菌条件下取脊髓去除软脊膜,剪碎成大约1 mm×1 mm×1 mm。两次酶消化后用含20%牛血清白蛋白的DMEM离心获得微血管。用内皮细胞培养基(ECM)培养,传代2次后改用PCM培养。倒置显微镜观察细胞增殖状况。免疫细胞化学法检测血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)、神经元-胶质抗原2(NG2)、von Willebrand因子(v WF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。流式检测CD140b、CD31、CD11b和GFAP的表达。将PCM换为10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基,检测细胞α-SMA表达的变化。通过周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测细胞成管能力。结果接种48 h细胞爬出,7~9 d汇合,周细胞和内皮细胞伴随状增殖。改用PCM培养后内皮细胞减少,周细胞呈优势生长。免疫细胞化学表明PDGFRβ和NG2阳性,v WF和GFAP阴性;流式结果表明细胞PDGFRβ的阳性率为95.52%±2.55%,GFAP为0.63%±0.26%,CD31为0.80%±0.26%,CD11b为1.02%±0.35%。10%胎牛血清的DMEM促进细胞分化,α-SMA表达升高。成管实验周细胞与内皮细胞共同形成管腔样结构。结论通过PCM筛选法能够成功获得纯度较高的SCMP,所获得的细胞具备明显的周细胞的形态和功能特征。     

宾达利对脂多糖诱导的BV-2细胞炎症因子释放和吞噬作用的影响

目的 探讨单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）抑制药宾达利对脂多糖（LPS）诱导的小鼠BV-2小胶质细胞炎症因子表达及吞噬作用的影响。方法 将BV-2细胞分为5组,空白组不给予药物处理,正常培养36 h;模型组正常培养12 h后,加入500 ng·mL^-1 LPS继续作用24 h;低、中、高剂量实验组分别给予20,40,80μg·mL^-1宾达利处理12 h后,加入500 ng·mL^-1 LPS继续作用24 h。用CCK-8法检测各组BV-2细胞存活率,用激光共聚焦显微镜观察BV-2细胞对荧光微球的吞噬能力的改变,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和白细胞介素-6（IL-6）mRNA的表达水平。结果 低、高剂量实验组和模型组、空白组的细胞存活率分别为（104.90±1.90）%,（100.30±4.71）%,（105.30±3.56）%和（100.00±9.44）%,各组间的细胞存活率比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。低、高剂量实验组和模型组、空白组的BV-2细胞所吞噬的荧光微球数...