高糖对豚鼠膀胱ICCs细胞电生理的影响

目的观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICCs）内钙离子荧光的改变,探讨糖尿病膀胱（diabetic cystopathy,DCP）的发病机制。方法采用酶消化法原代培养,激光共聚焦技术观察5、10、15mmol/L葡萄糖浓度下培养24、72h的ICCs,扫描记录每个时间点胞内的钙离子荧光强度值。结果糖浓度增高培养时间延长,ICCs内钙离子荧光值升高（P=0.00）,只有15mmol/L的24h组降低（P=0.00）。结论高糖环境对豚鼠膀胱ICCs电生理学造成显著影响,这种改变可能是造成DCP发病的重要原因之一。     

豚鼠膀胱二聚体cajal样细胞形态及其功能的结构基础

目的观察豚鼠膀胱组织中二聚体cajal样细胞形态学特点,探讨二聚体cajal样细胞在膀胱组织中发挥功能的结构基础。方法 15只豚鼠膀胱组织经手术取材后制成冷冻切片和电镜切片,分别经免疫荧光染色后行激光共聚焦显微镜和电镜观察。采用酶消化法原代培养,电镜观察培养24h的ICCs超微结构。结果激光共聚焦显微镜下见豚鼠膀胱组织中cajal样细胞有双极和二聚体两种类型,cajal样细胞二聚体紧密连结形成相通荧光缺陷通道,两类cajal样细胞存在网络联系。电镜下cajal样细胞与平滑肌细胞和神经纤维之间存在广泛的缝隙连结。培养后cajal样细胞间可见桥样结构。结论豚鼠膀胱组织中存在双极和二聚体两种不同类型的cajal样细胞,二聚体cajal样细胞形成的相通荧光通道样结构可能是其发挥起博功能的结构基础,在膀胱中主要起起博功能,二聚体cajal样细胞与双极cajal样细胞构成的广泛网络联系,以及与平滑肌细胞和神经纤维之间形成的大量缝隙连结,是该类cajal样细胞具备信息传递的结构基础,在膀胱组织中主要起信息传递功能。     

高糖环境下豚鼠膀胱ICCs细胞形态的改变

目的观察高糖环境下豚鼠膀胱ICCs细胞长度的改变,探讨糖尿病膀胱（DCP）是否与逼尿肌中ICCs细胞形态异常有关。方法胶原酶V消化豚鼠膀胱,分别在5、10、15mmol/L糖浓度下分别培养24、72h,激光共聚焦技术记录Fluo-4AM负载的ICCs细胞,观察在不同浓度、不同培养时间后其细胞长度的变化。结果非高糖组细胞无明显变化,高糖组遂培养时间延长及糖浓度增高细胞明显变小变短。结论高糖环境使ICCs细胞长度缩短,体积变小,导致其结构异常,起搏及传导功能下降,最终导致逼尿肌功能障碍发生DCP。     

高糖中膀胱ICCs的变化

目的观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)内钙离子荧光及其超微结构的改变,探讨糖尿病膀胱(DCP)的发病机制。方法采用原代培养,激光共聚焦、透射电镜观察5、10、15mmol/L葡萄糖浓度培养24、72h的ICCs,扫描记录胞内荧光强度值,观察其超微结构。结果糖浓度增高培养时间延长,ICCs内钙离子荧光值升高,胞内线粒体大小不等、数量减少、空泡样变甚至溶解,胞质广泛溶解,突起消失。结论高糖环境对豚鼠膀胱ICCs电生理学、超微结构造成显著影响,这种改变可能是造成DCP发病的重要原因之一。     

豚鼠膀胱Cajal样间质细胞类型及其与钙离子振荡特性的关系

目的 探讨豚鼠膀胱组织中Cajal样间质细胞(ICC)形态学类型特点及其与钙离子振荡特征的关系.方法 取豚鼠膀胱制作冰冻切片,体外培养膀胱ICC.免疫荧光染色激光共聚焦显微镜下观察ICC形态学特点,根据细胞不同形态类型及添加2-氨基乙氧基双苯萘酯(2-APB)干预剂将体外培养膀胱ICC分4组:二聚体ICC组(n=10)、单体ICC组(n=20)、2-APB抑制二聚体ICC组(n=10)、2-APB抑制单体ICC组(n=20).应用Fluo-4AM标记细胞内钙离子浓度含量及在2-APB抑制二聚体ICC组、2-APB抑制单体ICC组加入2-APB,共聚焦显微镜下观察记录钙离子振荡功能.结果 二聚体ICC组钙振荡频率(13.4±0.8)次/min及振幅38.5±8.7明显高于单体ICC组钙振荡频率(7.5±0.6)次/min及振幅10.5±3.9(P＜0.05),加入高浓度2-APB后,2-APB抑制二聚体ICC组钙振荡频率(8.7±1.5)次/min及幅度15.5±8.2明显低于二聚体ICC组(P＜0.05),而2-APB抑制单体ICC组钙振荡频率(8.5±0.5)次/min及幅度9.2±4.6与单体ICC组差异无统计学意义(P＞0.05).结果 豚鼠膀胱中存在单体和二聚体2种不同形态类型的ICC,单体ICC自发性钙振荡波较低,二聚体ICC自发性钙振荡波具有高兴奋性,二聚体ICC的特有结构可能是ICC高兴奋性钙波形成的结构基础.     

豚鼠糖尿病性膀胱病逼尿肌中c-kit mRNA和蛋白的表达变化及意义

目的: 检测豚鼠糖尿病性膀胱病(DCP)逼尿肌中酪氨酸蛋白激酶生长因子受体(c-kit)mRNA和蛋白的表达水平,探讨c-kit表达与DCP的关系及其发病机制。方法: 60只豚鼠随机分成对照组20只,实验组40只,实验组采用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病豚鼠模型,2组豚鼠饲养10周后运用尿动力学检测并将实验组筛选出DCP组和糖尿病性非膀胱病(NDCP)组,应用RT-PCR、激光共聚焦显微镜技术分别检测各组膀胱组织c-kit mRNA和蛋白的表达。结果: DCP组c-kit mRNA表达显著低于对照组(P<0.01)及NDCP组(P<0.05),相对平均吸光度值分别为4.65±0.47、5.66±0.54、5.54±1.28。糖尿病性膀胱病组c-kit蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)与NDCP组(P<0.01),c-kit蛋白荧光值分别为548.69±48.51、844.67±59.24、856.52±53.03。结论: 豚鼠DCP逼尿肌中c-kit mRNA、c-kit蛋白表达减少,导致c-kit信号通路异常,从而使Cajal样细胞在膀胱中的功能减弱而导致逼尿肌功能障碍发生DCP,因此c-kit表达异常可能是DCP的发病机制之一。     

体外Cajal样细胞c-kit基因mRNA在高糖环境下表达变化及意义

目的：观察体外高糖环境下Cajal样细胞（interstitial cells of Cajal-like,ICCs）c-kit mRNA表达变化。方法：胶原酶消化法原代分离培养豚鼠膀胱ICCs,加入含葡萄糖浓度分别为5mmol/L、15mmol/L、30mmol/L培养基培养24h、48h、72h后,应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测高糖环境下c-kit基因mRNA表达水平的变化。结果：RT-PCR电泳经分析显示15mmol/L、30mmol/L组ICCs c-kit mRNA表达较5mmol/L组降低（P〈0.01）,72h组较24h组、48h组表达降低。结论：高糖环境造成ICCs c-kit基因mRNA表达水平降低,可导致ICCs的SCF/c-kit信号通路异常,ICCs功能及结构障碍,可能是糖尿病膀胱病变的发病机制之一。     

高糖中膀胱ICCs超微结构的变化

目的观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞超微结构的改变,探讨糖尿病膀胱(DCP)的发病机制。方法采用酶消化法原代培养,透射电镜观察不同葡萄糖浓度下培养的ICCs超微结构。结果随糖浓度增高和培养时间延长,ICCs内细胞器明显减少,线粒体大小不等、数量减少、肿胀、空泡样变甚至溶解,内质网扩张、空泡样变,胞质广泛溶解,突起消失。结论高糖环境对豚鼠膀胱ICCs超微结构造成显著影响,这种结构破坏可能是造成DCP发病的重要原因之一。