离子交换层析在人血白蛋白生产中的应用研究

目的 研究离子交换层析在人血白蛋白生产中的应用.方法 将采用低温乙醇分离工艺分离的组分Ⅳ上清液超滤脱醇后,采用离子交换层析进行纯化.筛选层析用凝胶并优化离子交换层析的样品pH、电导率和上样量.同时采用高效液相色谱检测人血白蛋白中间品和成品的纯度.结果 选用Capto DEAE凝胶作为层析用介质,最适层析条件为:样品pH值6.9、电导率5.0 mS/cm、上样量≤1.2g蛋白/ml凝胶.高效液相色谱检测显示,优化低温乙醇工艺制备的人血白蛋白中间品纯度可达99.44％～100.00％,而且优化低温乙醇工艺制备的人血白蛋白成品纯度(97.77％)高于传统低温乙醇工艺(93.82％).结论 该离子交换层析工艺可在人血白蛋白生产中应用.     

HER2阳性乳腺癌重组免疫毒素的开发

目的 制备一种人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌的高活力重组免疫毒素TP25。方法 利用基因工程技术将曲妥珠单抗可变区与绿脓杆菌细胞毒素片段进行重组,经原核表达获得具有完整结构的高活性融合蛋白TP25,采用免疫荧光法与流式细胞技术检测TP25与不同乳腺癌细胞系的结合能力,通过³H-Thymidin掺入法检测其对肿瘤细胞的杀伤活力,通过测定单链DNA的产生研究TP25诱发肿瘤细胞发生凋亡。结果 经酶切与PCR验证成功构建融合蛋白TP25重组表达质粒,经原核包涵体表达制备出分子量为52 kDa的TP25制品,经验证TP25能与HER2高表达的乳腺癌细胞结合,具有活性空间构象,细胞增殖试验显示TP25的细胞毒性强弱与用量呈正相关,能引发HER2阳性乳腺癌细胞发生凋亡。结论 制备了HER2阳性乳腺癌靶向免疫毒素TP25。     

折射仪法测定氯化钙注射液含量

目的：建立快速测定氯化钙注射液含量的折射仪法。方法：采用全自动折射仪，光束值589 nm，样品池20℃，以折光率（x）为横坐标，相应钙离子浓度（y）为纵坐标建立线性回归方程，验证了该方法的线性范围，重复性、稳定性、准确度。结果：在本实验条件下，氯化钙浓度在12～60 mmol·L-1时，线性方程为：y = 0.000 026x + 1.332 960，R2 = 0.999 875，重复性RSD为0.34%，4d的含量检测稳定性良好；平均回收率为100.58% ± 0.61%，RSD为0.60%；以折射仪法测定氯化钙注射液的含量与药典EDTA滴定法数据不存在差异，同一制品6个平行样测定相对标准偏差分别0.34%、1.2%。结论：本法可用于氯化钙注射液含量的测定。     

人凝血酶原复合物临床应用研究进展

<正>凝血酶原复合物(PCC)的制备工艺目前国内外基本相同,都是以新鲜冰冻血浆(FFP)为起始原料,经DEAE A-50凝胶批式吸附(1次或者2次),超滤配制,冷冻干燥,并在制备过程中采用有机溶剂/去污剂(Solvent/Detergent,S/D)灭活脂包膜病毒(如HIV等)〔1〕,干热灭活法(如100℃/30 min,蒸汽60℃/10h)灭活非脂包膜病毒(如PPV,HCV等)〔2〕。成品为冻干粉针剂,运输、贮存、用药方便,病毒安全性高。随着血浆分离技术的不断提高,单     

首批重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品的研制

目的 研制一种重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品,用于重组人血白蛋白等产品的蛋白质含量测定。方法 选取重组人血白蛋白产品作为原料,经质量浓度9 g·L^-1 NaCl溶液稀释后除菌过滤分装。在8家实验室按经确认和验证的方法进行协作标定并开展稳定性监测。结果 8家实验室采用包括高效液相色谱法(HPLC)、福林酚法(Lowry)、紫外测定法(UV)、2,2′-联喹啉-4,4′-二羧酸法(BCA)等测定本批标准品,蛋白质含量实验室间均值为1 961(Min 1 904,Max 2 063)μg·mL^-1,95%置信区间(1 917,2 016)μg·mL^-1;实验室间标定结果均值标准差52.89,标准误18.70,相对标准偏差(RSD)为2.70%。2~8 ℃持续对该标准品进行稳定性监测19个月,蛋白质含量未发生趋势性变化,建议本品按2~8 ℃保存和运输。结论 重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品符合相关规定,可以发放用于重组人血白蛋白相关的质量控制。     

山东和广西地区献浆者的血浆白蛋白和 Ig G相对含量的初步分析

目的：分析山东和广西地区献浆者的血浆白蛋白和 IgG 含量的差异，以提高血浆利用率。方法将3600份血浆样品按地区、性别、年龄段（18～29、30～40和41～55岁）进行分组，每组100份样品。用 AU5400型全自动生化分析仪检测血浆总蛋白、白蛋白和 IgG 含量，并用单因素方差分析对检测结果进行统计分析。结果单因素方差分析显示，山东与广西地区献浆者间的白蛋白／IgG 比值差异具有统计学意义：18～29、30～40和41～55岁男性献浆者 F 值分别为138．994、186．262和139．056，P值均为0．000；18～29、30～40和41～55岁女性献浆者 F 值分别为209．670、174．120和155．081，P 值均为0．000。山东与广西地区献浆者间的 IgG 含量差异具有统计学意义：18～29、30～40和41～55岁男性献浆者 F值分别为146．756、186．262和195．263，P 值均为0．000；18～29、30～40和41～55岁女性献浆者 F值分别为186．133、190．365和206．300，P值均为0．000。结论山东和广西地区献浆者的血浆白蛋白和 IgG 含量存在差异。