与内皮抑制素相互作用的蛋白及其抑制血管生成作用的分子机制

目的:探讨与内皮抑制素相互作用的蛋白,阐明其抑制血管生成作用的分子机制。方法:实验于2002-01/2004-12在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成。应用酵母双杂交系统3,以内皮抑制素为诱饵,筛选人肝cDNA文库,寻找与之相互作用的蛋白。再利用一对一酵母回复性杂交、β-GAL实验和生物信息学分析技术筛除假阳性克隆。结果:成功构建稳定表达内皮抑制素基因的载体;酵母双杂交共获得281个克隆,经验证,6个为阳性克隆,测序发现其中一个克隆为未知序列;FASTCAT试验发现阳性克隆中4个克隆可明显的与内皮抑制素相互作用。结论:6个阳性克隆表达的蛋白可能能与内皮抑制素相互作用,并不同程度的参与了内皮抑制素调节的血管生成过程。     

细胞因子信号转导负调控蛋白

目前已知的SOCS家族共有8个成员,细胞因子信号通路能调节该家族蛋白的表达,而SOCS蛋白通过直接结合活化的JAK激酶或磷酸化的受体抑制JAK/STAT信号转导通路的活性。现利用该家族保守域又得到一系列蛋白,但功能尚不详。     

细胞因子信号转导负调控蛋白——SOCS家族研究进展

目前已知的SOCS家族共有 8个成员 ,细胞因子信号通路能调节该家族蛋白的表达 ,而SOCS蛋白通过直接结合活化的JAK激酶或磷酸化的受体抑制JAK/STAT信号转导通路的活性。现利用该家族保守域又得到一系列蛋白 ,但功能尚不详。     

运动对大鼠下丘脑GnRH和β-EP含量的影响

为探讨运动诱发月经周期紊乱乃至闭经的发生机制 ,设计了运动性闭经大鼠模型 ,利用免疫组织化学方法及图象分析系统 ,观察不同动情周期、不同训练强度时雌性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素 (GnRH)和β -内啡呔 (β -EP)免疫反应阳性细胞的定量变化。结果提示 :急性运动时 ,下丘脑 β -EP含量降低 ,并在其他因素参与下 ,促使GnRH从下丘脑释放增多。长期力竭运动 ,下丘脑GnRH和 β -EP仍进行释放 ,但相互作用机制仍需探讨。     

皂苷提取物宫血宁缩宫作用与细胞外钙内流关系的研究

目的探讨皂苷类提取物宫血宁引起的大鼠离体子宫收缩作用与细胞外钙内流的关系。方法应用离体子宫张力测定法,观察不同Ca2+浓度及Ca2+通道阻滞剂对宫血宁引起的大鼠离体子宫收缩作用的影响。结果无钙的台氏平衡液中,宫血宁的浓度从25μg/ml增至200μg/ml都不能引起大鼠离体子宫节律性收缩;在半钙和全钙的台氏平衡液中宫血宁能引起大鼠离体子宫节律性收缩,并与宫血宁的剂量呈显著正相关;Ca2+通道阻滞剂能明显抑制宫血宁和缩宫素引起的子宫收缩,但同缩宫素相比,宫血宁引起的子宫收缩对Ca2+通道阻滞剂更敏感。结论皂苷类提取物宫血宁的缩宫作用依赖于细胞外钙的存在,其作用机制可能是通过促进平滑肌细胞外钙内流来实现的。     

细胞因子信号转导负调控蛋白—SOCS家族研究进展

目前已知的SOCS家族共有8个成员、细胞因子信号通路能调节该家族蛋白折表达，而SOCS蛋白通过直接结合活化的JAK激酶或磷酸化的受体抑制AK／STAT信号转导通路的活性，现利用该家族保守域又得到一系列蛋白，但功能尚不详。     

mpl/G-CSFR融合受体缺失体与突变体的构建

目的：构建mpl／G-CSF融合受体胞内区不同功能域缺失体以及酪氨酸点突变体，并获取稳定转染细胞株，用以研究受体不同区域以及不同酪氨酸的功能。方法：用普通PCR法扩增融合受体短截体，用重叠延伸PCR法和QickChange定点突变法获得融合受体酪氨酸点突变体，并将mpl／G-CSFR全长融合受体转染BaF3细胞。结果与结论：获得mpl／G-CSF融合受体3个短截体和4个点突变体，并筛选到全长融合受体的稳定转染细胞株，为深入研究受体的功能奠定了基础。     

与内皮抑制素相互作用的蛋白及其抑制血管生成作用的分子机制

目的：探讨与内皮抑制素相互作用的蛋白，阐明其抑制血管生成作用的分子机制。方法：实验于2002-01／2004-12在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成。应用酵母双杂交系统3，以内皮抑制素为诱饵，筛选人肝cDNA文库，寻找与之相互作用的蛋白。再利用一对一酵母回复性杂交、β-GAL实验和生物信息学分析技术筛除假阳性克隆。结果：成功构建稳定表达内皮抑制素基因的载体；酵母双杂交共获得281个克隆，经验证，6个为阳性克隆，测序发现其中一个克隆为未知序列；FASTCAT试验发现阳性克隆中4个克隆可明显的与内皮抑制素相互作用。结论：6个阳性克隆表达的蛋白可能能与内皮抑制素相互作用，并不同程度的参与了内皮抑制素调节的血管生成过程。     

宫血宁对大鼠离体子宫的节律收缩作用

目的　探讨宫血宁治疗妇科出血的药理作用机制 ,为临床用药提供理论依据。方法　大鼠离体子宫张力实验法。结果　发现大鼠离体子宫给药前没有明显的收缩。加入宫血宁至终浓度为 2 5 μg·ml-1 时 ,可引起离体子宫的节律性收缩 ,随着宫血宁给药剂量的增加 ,离体子宫收缩幅度增大、频率加快。宫血宁 2 0 0 μg·ml-1 时的收缩强度可接近 0 .0 0 1u/ml缩宫素的作用。宫血宁给药后 4 0min内 ,子宫收缩幅度下降不明显 ,而收缩频率略有下降。其作用同缩宫素相似 ,而优于米索前列醇。结论　宫血宁能引起大鼠离体子宫的收缩作用 ,并具有明显的剂量效应。     

KGF基因在COS7细胞中的表达及其活性检测

目的：利用COS7细胞表达角质细胞生长因子(KGF)并检测其活性。方法：利用脂质体把KGF基因转入COS7细胞中，再用Western印迹和ELISA方法检测KGF蛋白的表达，然后用MTT法检测其活性。结果：KGF基因在COS7中得到了表达，并对小鼠肠上皮细胞(IEC-6)具有刺激增殖作用。结论：KGF有望成为肠型放射病治疗的新型药物。