桂郁金EST资源的SSR信息分析及EST-SSR标记开发

目的:分析桂郁金EST中SSR位点分布规律,开发桂郁金EST-SSR引物,探讨EST-SSR用于桂郁金品种遗传多样性的可行性。方法:从NCBI公共数据库下载姜黄属EST序列(expressed sequence tag,EST)12 678条,利用MISA软件对其进行SSR位点查找,选出符合条件的序列,采用Primer 5.0软件设计EST-SSR引物,利用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳研究这些EST-SSR引物PCR扩增的特点,进一步验证开发结果的合理性与有效性。结果:下载得到的12 678条EST序列中,共有926条序列包含SSR位点,占整个EST数据库的7.30%,其中SSR位点所占比例最大的是二核苷酸重复序列,三核苷酸和四核苷酸次之,分别为623(50.90%)个,388(31.70%)个和125(10.21%)个。根据筛选得到的微卫星序列共设计了165个EST-SSR引物对,选择其中92分以上的24个合成。PCR检测表明,21个引物对(87.50%)可以扩增出稳定清晰的带型;在6份不同种质桂郁金中检测到13对EST-SSR引物有多态性,占设计引物的54.17%。利用13对验证的EST-SSR引物对20个桂郁金品种进行了亲缘关系分析。结论:桂郁金EST-SSR标记开发的效率较高,是桂郁金SSR标记开发的重要措施,对于桂郁金品种鉴定和遗传多样性分析以及育种等方面具有重要的意义。     

广西莪术优良种质资源植株形态和药材性状的对比分析

目的：对比分析品质优良的广西莪术的植株形态、药材性状特征,明确优良种质广西莪术的植株形态和药材性状的特征;为选育高产优质的广西莪术品种以及建立广西莪术种质资源数据库提供依据。方法：测量21份优良种质植株苗期、成熟期的外观形态,分析成熟期采收的各种质药材的性状特征。结果：测得苗期、成熟期各种质植株的株高、叶片数、叶长和宽、叶舌长、叶鞘长、叶鞘宽和叶柄长数据;叶鞘、叶柄颜色呈多样;叶片被毛稀疏植株较多,叶基呈偏斜和楔形以及叶端呈细尾状渐尖和短渐尖形状;各种质材料苗期、成熟期生长外观形态差别较大,有明显的种间差异;比较各种质药材性状特征的异同。结论：广西莪术植株形态与药材性状具有丰富的多样性,其植株形态和药材性状与其产量和挥发油含量无直接关系,但各种质材料的植株形态和药材性状代表各植株的外观特征,在选育良种时可作为形态特征来甄别。     

适用于SSR分析的广西莪术DNA提取方法考察

目的:获取适用于广西莪术简单序列重复(SSR)分析的高质量DNA,为该品种的遗传多样性研究提供参考。方法:选择广西莪术嫩叶为材料,采用经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法提取广西莪术总DNA,考察手工和机器研磨的差异性,采用UV检测DNA浓度和纯度,DNA作为模板进行聚合酶链反应(PCR)扩增,引物选择clest SSR-01,clest SSR-03,clest SSR-06,clest SSR-08,clest SSR-14,clest SSR-15,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA扩增效果。结果:改良CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.8~2.0,蛋白质、多糖、RNA等物质去除较彻底,DNA符合PCR扩增结果要求,使用姜黄属通用引物能扩增出清晰条带。经典CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.50~1.60,含较多杂质,无法用于PCR扩增等分子生物学研究。结论:改良CTAB法提取所得DNA质量较好,可有效去除次生代谢产物对DNA的干扰,适用于广西莪术SSR分子标记和遗传多样性分析。