基于中效方程的黄芩苷与小檗碱抗炎协同作用研究

黄芩苷和小檗碱分别是清热解毒药黄芩和黄连及其复方口服后主要的入血成分[1],二者体内外实验均表现出良好的抗炎活性[2,3],但联合应用的合理性研究还未见报道。本实验研究黄芩苷和小檗碱联合对经典炎症通路关键节点的影响,评价二者合用相关机制。     

基于中效方程的黄芩苷与汉黄芩苷调控NF-κB信号通路的协同作用

目的:利用中效原理定量分析黄芩苷与汉黄芩苷合用的抗炎协同药效学机理。方法:通过脂多糖(LPS100μg·L~(-1)刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型;实验设置正常组,模型组,穿心莲内酯组(10μmol·L~(-1)),黄芩苷组(2.06,4.13,8.25,16.5,33,66,132μmol·L~(-1)),汉黄芩苷组(2.94,5.88,11.75,23.5,47,94,188μmol·L~(-1))和黄芩苷-汉黄芩苷联合组[(2.06+2.94)(4.13+5.88)(8.25+11.75)(16.5+23.5)(33+47)(66+94)(132+188)μmol·L~(-1)];采用酶联免疫吸附测定(ELISA)分别检测药物干预50 min和4 h后细胞培养上清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;采用硝酸盐还原酶(Griess)法检测药物干预24 h后细胞培养上清中一氧化氮(NO)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测药物干预2,12 h后细胞中磷酸化核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活化水平;绘制作用率/非作用率(fa/fu)与剂量的关系表。结果:与正常组比较,模型组RAW264.7细胞中p-NF-кB p65蛋白和iNOS蛋白表达均明显增加(P0.05,P0.01),细胞因子TNF-α,IL-6和NO的表达均显著增加(P0.01);与模型组比较,各给药组高剂量可抑制p-NF-κB p65蛋白的表达(P0.05),汉黄芩苷组和联合组可浓度依赖性下调iNOS蛋白的表达(P0.01),黄芩苷组无明显差异。各给药组高剂量均可显著抑制NO的生成(P0.05),对IL-6生成无明显抑制作用。汉黄芩苷组和联合组可显著抑制TNF-α的生成(P0.05),黄芩苷组无明显差异;在实验剂量下,fa/fu与剂量关系表显示,联合组p-NF-кB p65活化和IL-6生成的fa/fu小于黄芩苷组和汉黄芩苷组,联合组iNOS,TNF-α和NO生成的fa/fu在高剂量时大于黄芩苷组和汉黄芩苷组。结论:黄芩苷和汉黄芩苷对NF-κB通路中不同靶标作用强度差异较大,汉黄芩苷是二者合用的主体药效物质,二者合用对不同靶点表现为不同程度的协同或拮抗作用。     

藏药四味姜黄方对STZ诱导糖尿病肾病大鼠模型的剂量配比关系的初步研究

目的开展藏药四味姜黄方的剂量配比关系研究,探索其处方剂量配比关系对糖尿病肾病(DN)大鼠的保护作用及其机制。方法除正常组外,其余大鼠均使用60 mg/kg体质量的链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔内注射法复制糖尿病模型,待DN模型成功后将其分为模型组、二甲双胍阳性组、四味姜黄方8个不同剂量配比组(采用均匀设计法),按给药剂量表每天灌胃给予相应药物1次,连续给药4周。使用血糖仪测空腹血糖(FBG),化学法检测血清尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、肌酐(Scr)和总蛋白(TP)浓度,ELISA试剂盒检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平,电镜下观察肾脏病理形态学变化及测定肾小球基底膜厚度。采用主成分分析(PCA)、多元逐步回归分析(MSRA)等多元分析方法,对配比剂量-药效学结果进行剂量配比关系分析。结果各给药组的各项药效学指标均有不同程度的改善。MSRA结果表明BUN、肾指数、FBG、肾小球基底膜厚度、VEGF、Scr和UA 7项指标水平与剂量配比存在多元一次线性关系或多元二次非线性关系,其回归方程有显著性意义(P0.05);TGF-β1和TP水平与剂量配比间无明显线性或非线性关系,其回归方程无显著性意义(P0.05);在均匀设计取值范围内的全局寻优比较,大鼠模型的优化配比剂量为姜黄∶小檗皮∶余甘子∶蒺藜=1∶2∶1∶2。结论四味姜黄方各剂量配比对DN的各项指标均有不同程度的改善,这可能与其降低BUN、肾指数、FBG、肾小球基底膜厚度、VEGF、Scr和UA等指标的水平有关。