Determination of amitriptyline and nortriptyline in human liver microsomes with reversed-phase HPLC in vitro

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细胞色素氧化酶CYP2C9的研究进展

CYP2C9是人类肝脏中含量丰富的一种CYP450酶,它能代谢和／或活化许多种药物、前致癌物、前毒物和致突变剂。CYP2C9基因具有遗传多态性,在人类存在几种等位基因的突变体。本文从基因结构、底物和探针药、影响其活性的因素、遗传多态性的分子机制等方面综述CYP2C9的研究进展。     

CYP2C19基因型和CYP2C9对人肝微粒体中氟西汀N-去甲基代谢的影响(英文)

目的:本实验旨在研究CYP2C19基因型人肝微粒体中氟西汀N-去甲基代谢的酶促动力学特点并鉴定参与此代谢途径的细胞色素P-450酶。方法:测定基因型CYP2C19肝微粒体中去甲氟西汀形成的酶促动力学。鉴定氟西汀N-去甲基酶活性与细胞色素P-450 2C9,2C19,1A2和2D6酶活性的相关性,同时应用各种细胞色素P-450酶的选择性抑制剂和化学探针进行抑制实验,从而确定参与氟西汀N-去甲基代谢的细胞色素P-450酶。结果:去甲氟西汀生成的酶促动力学数据符合单酶模型,并具有Michaelis-Menten动力学特征。当底物浓度为氟西汀25μmol/L和100μmol/L时,去甲氟西汀(N-FLU)的生成率分别与甲磺丁脲3-羟化酶活性显著相关(r_1=0.821,P_1=0.001;r_2=0.668,P_2=0.013),当底物浓度为氟西汀100μmol/L时,N-FLU的生成率与S-美芬妥因4’-羟化酶活性显著相关(r=0.717,P=0.006)。PM肝微粒中磺胺苯吡唑和醋竹桃霉素对氟西汀N-去甲基代谢的抑制作用显著大于EM(73％vs 45％,P<0.01)。结论:在生理底物浓度下,CYP2C9是催化人肝微粒体中氟西汀N-去甲基代谢的主要CYP-450酶;而高底物浓度时,以CYP2C19的作用为主。     

Enzyme kinetic analysis and inhibition of amitriptyline N-demethylation in human liver microsomes in vitro

采用６例人的肝微粒体应用酶促动力学分析和抑制研究阐明参与阿米替林（ＡＴ）Ｎ－去甲基代谢的ＣＹＰ４５０的种类及性质．去甲替林（ＮＴ）生成的酶促动力学数据符合一两酶模型，其中高亲和力酶具有Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ动力学特征，而低亲和力酶则具有底物别构激活的特性．当ＡＴ为２μｍｏｌ·Ｌ－１时Ｓ－美芬妥英和呋喃茶碱均可使ＮＴ生成被抑制达５０％左右；较高浓度的酮康唑也可使ＮＴ生成明显受到抑制，但醋竹桃霉素几乎对此没有影响；而当ＡＴ为１００μｍｏｌ·Ｌ－１时，酮康唑和醋竹桃霉素均是ＮＴ生成的强抑制剂．结果提示：当底物的浓度较低时，ＣＹＰ１Ａ２和ＣＹＰ２Ｃ１９是催化ＡＴ体外人肝微粒体中Ｎ－去甲基代谢的主要ＣＹＰ４５０酶类；当底物浓度较高时，由于底物别构激活的特性，ＣＹＰ３Ａ４逐渐占据主导地位．     

中国人肝微粒体中细胞色素P450酶含量和活性的个体间差异(英文)

目的:比较不同中国人肝微粒体中几种重要细胞色素P450(CYP)的酶含量和活性。方法:运用West-ern斑点分析和光密度扫描,对17个汉族、17个壮族和8个苗族受试者肝微粒体中的细胞色素P4501A2(CYP1A2)、2C9及3A4进行定量;非那西丁、甲磺丁脲、异喹胍和奥美拉唑分别用于体外测量CYP1A2、2C9、2D6及3A4的活性。结果:CYP1A2、2C9及3A4的含量和活性具有很大的个体间变异,另外CYP2D6的活性在各样本间也有很大差异;CYP3A4(32％)是中国人肝微粒体中含量最丰富的CYP,CYP2C9(19％)和CYP1A2(16％)的含量也很可观;除了CYP1A2的含量和活性具有一定的种族和性别差异外,未发现其它CYP具有种族和性别差异;CYP1A2、2C9和3A4的酶蛋白含量分别和它们的活性具有很好的相关性。结论:我们的结果为在中国人中进行药物代谢研究提供了非常有价值的信息。     

反相高压液相色谱法测定体外人肝微粒体孵育液中阿米替林及其代谢 …

AIM: To develop a method for simultaneous determinations of amitriptyline (Ami) and its metabolite nortriptyline (Nor) in human liver microsomes. METHODS: An incubation buffer containing microsomes, NADPH-generating system, and Ami, after termination of enzyme reaction and desipramine (Des) as internal standard (IS), was extracted with diethy ether and separated on a reversed-phase ODS column. Detection was achieved at 242 nm by ultraviolet detector. RESULTS: No potential interfering peaks were found. Ami and Nor gave rapid elution and baseline resolution. The linear curves of both analyses ranged 0.02-10 nmol and the limit of detection was 0.01 nmol. The recovery (94%-101%) had good precision with relative s of < 8.3%. CONCLUSION: This method is rapid, sensitive, and simple for studying the metabolism of Ami and Nor.     

体外中国成人肝微粒体中氯胍活化为氯胍三嗪由CYP2C19和CYP3A4介导(英文)

目的:鉴定中国成人肝微粒体中介导氯胍(PG)活化为氯胍三嗪(CG)的细胞色素P450(CYP450).方法:分析中国成人(n=6)肝微粒体中PG活化为CG的酶促动力学,各种CYP450抑制剂对该代谢的作用及其与S-美芬妥英4′-羟化的关系.结果:6个标本中,除一个外(两酶米氏模型),PG活化为CG的酶促动力学符合米氏一酶模型;CYP3A4和CYP2E1的选择性抑制剂醋竹桃霉素(81.1％)和二乙二硫基苯甲酸(47.23％)可抑制CG生成,其它抑制剂没有明显作用;在低PG浓度时,PG的环化与S-美芬妥英4′-羟化显著相关(r=0.805,P<0.05),高浓度时相关性明显减小.结论:在中国成人肝微粒体中CYP2C19和CYP3A4参与了PG活化为CG.     

体外研究人细胞色素P450在雌二醇代谢中的作用(英文)

目的:研究雌二醇在cDNA表达的P450和人肝微粒体中的代谢机制,为在体内研究细胞色素P450活性与肿瘤发生的关系提供依据。方法:用HPLC-ECD法测定雌二醇的代谢产物。通过雌二醇在不同cDNA表达的P450中代谢,13例人肝微粒体中相关性研究,抑制剂对代谢的影响以及微粒体中17β-羟基脱氢化和2-羟基化代谢的催化动力学的研究来推断雌二醇的代谢机理。结果:在cDNA表达的P450中,催化2-羟基化代谢的P450按活性排列依次为CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9。CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8均具有较高的催化17β-羟基脱氢化活性。抑制CYP1A2与抑制CYP3A4对2-羟基化代谢产物生成的影响相似,可认为CYP1A2和CYP3A4在人肝微粒体中催化2-羟基化代谢的作用相近。雌二醇代谢的途径与底物浓度有关,低浓度时(1,10μmol/L)17β-羟基脱氢化为主要代谢途径;高浓度时(100μmol/L),2-羟基化成为主要代谢途径。结论:高底物浓度时,雌二醇主要由CYP1A2和CYP3A4催化代谢为2-羟基化产物。低底物浓度时,主要由CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8催化生成17β-羟基去氢化产物。     

定量5-羟奥美拉唑和奥美拉唑砜以探测中国人肝微粒体中CYP2C19和CYP3A4的活性(英文)

目的:建立同时定量5-羟奥美拉唑(5-OH-OP)和奥美拉唑砜(OPS)的分析方法,探讨奥美拉唑(OP)在中国人肝微粒体中能否作为细胞色素 P450 2C19(CYP2C19)及3A4(CYP3A4)的活性表型探针药.方法:在中国人肝微粒体中进行OP的体外代谢,以高压液相色谱法(HPLC)检测主要代谢产物5-OH-OP及OPS;抗CYP2C8/9/19及抗CYR3A4的单克隆抗体被用于抑制实验;以Westem斑点法和光密度扫描定量肝微粒体中CYP2C19及CYP3A4的含量.结果:在HPLC分析中5-OH-OP及OPS有很好的洗脱,二者检测限均为0.01nmol,回收率为98％—102％并且变异系数小于9.5％;抗CYP2C8/9/19及抗CYP3A4均对5-OH-OP的生成有显著的抑制作用(P<0.05),二者的抑制作用呈底物浓度依赖,并且抗CYP3A4几乎可单独去除OPS的生成(>87％);在底物浓度为2μmol/L OP时,中国人肝微粒体中OP的5-羟化与美芬妥英的4′-羟化活性之间(r=0.72,P<0.01)、OP的5-羟化活性与CYP2C19含量之间(r=0.82,P<0.01)以及OP的硫代氧化活性与CYP3A4含量之间(r=O.78,P相似文献   

中国人群中CYP2C19活性的个体和种族差异(英文)

本文综述了我国,其中主要在我们实验室,近年来对CYP2C19的研究结果,包括中国人群中多个民族之间CYP2C19的遗传多态性分布及活性比较;中国多个民族中CYP2C19遗传多态性的分子机制;一些非遗传因素对CYP2C19活性的影响;以及CYP2C19在一些重要药物代谢中的作用。