基于混合测序策略的两品种当归中类黄酮调控基因差异分析

目的 比较2个不同茎叶色当归品种岷归1号与岷归2号转录水平差异。方法 以2种颜色当归的新鲜叶片（带叶柄）和上端茎为材料,采用混合测序策略,应用全长转录组技术构建当归无参全长转录本文库,利用RNA-seq技术对两品种进行差异基因表达分析,再利用公共数据库对差异基因的生物学功能进行注释和精细分类,筛选调控当归茎叶色差异的主要候选基因。结果 当归转录本的测序结果良好,测序数据质量较高,当归全长转录本的34 528条序列在非冗余蛋白（NR）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）、SwissProt及KOG数据库中分别注释到33 947、33 241、29 150和22 601条。对两品种当归差异表达基因（DEGs）进行精细分类,具有生物学功能和分子功能的705个DGEs可分为11类,主要富集在初级代谢（17.87%）、逆境响应（14.47%）、次级代谢（11.49%）等功能上,与颜色有关的差异表达基因主要集中在类黄酮生物合成途径上。结论 两品种当归茎叶颜色差异的主要原因可能与调控类黄酮的生物合成基因的表达差异有关,可为后续进行功能验证,进一步明确与当归主要药效成分之间的联系奠定基础。     

白屈菜-元胡药对抗雌激素受体阳性乳腺癌药效物质及作用机制

目的 分析白屈菜-元胡药对（CHCR）的主要成分,预测其抗雌激素受体（ER）阳性乳腺癌的药效物质、潜在作用靶点及通路并进行验证。方法 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术对CHCR乙醇提取物的成分进行分析;对所得成分进行网络药理学分析,构建CHCR“活性成分-靶点-通路”网络,并对富集通路进行体外细胞实验验证。结果共鉴定出58个化学成分,含生物碱57个、有机酸1个。网络药理学共筛选出活性成分38个,“成分-疾病”交集靶点的蛋白质-蛋白质互作网络中有核心靶点38个;得基因本体条目258个,京都基因与基因组百科全书通路137条,主要包括雌激素信号通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路等。验证实验结果显示,CHCR作用于MCF-7细胞的半数抑制浓度为693μg/mL;150、300、600μg/mL的CHCR可显著降低磷酸化PI3K、磷酸化Akt、ERα蛋白和ESR1 mRNA的表达水平（P<0.01）。结论 CHCR抗ER阳性乳腺癌的作用可能与调控ER、PI3K/Akt通路有关,具有多成分、多靶点的作用特点。     

枳实化学成分与治疗功能性消化不良关联性分析及实验验证

目的 研究枳实治疗功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）的药效物质基础。方法 运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术对10批枳实水煎液进行分析,确定共有成分;采用不规则喂养和夹尾刺激建立FD大鼠模型,以小肠碳末推进率、胃排空率及血清中胃动素、胃泌素水平为药效指标,采用灰色关联度分析法和Pearson双变量相关性分析建立色谱图中共有峰峰面积与药效指标的相关性,筛选出枳实治疗FD的药效物质,并通过斑马鱼肠蠕动模型进行药效验证。结果 10批枳实水煎液中共指认35个共有成分,通过灰色关联度和Pearson双变量相关性分析,筛选出辛弗林、马尔敏、黄柏酮、N-甲基酪胺、圣草次苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷共8个成分为枳实治疗FD的潜在药效物质。选择药效相关性较强、易得、可测的圣草次苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林进行实验验证,发现这5个成分均显著促进斑马鱼肠道蠕动（P＜0.01）。结论 圣草次苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林为枳实治疗FD的药效物质。     

CT引导下人工腹水结合三维可视化系统辅助射频消治疗难消融复发性肝癌

【摘要】 目的 评价CT引导下人工腹水结合三维可视化系统（3DVAPS）辅助射频消融治疗难消融的复发性肝癌的临床疗效和安全性。方法 回顾性分析中山大学肿瘤防治中心2015年3月至2020年12月177例复发性肝细胞癌患者的CT引导下射频消融的资料,其中257个病灶位于有挑战性的消融困难部位。肿瘤预后包括消融相关并发症、人工腹水技术成功率、完全消融技术成功率。 结果 177例患者的腹腔注入0.9%氯化钠溶液100~3 000 mL,平均853.71 mL,其中169例（95.48%）成功诱导人工腹水。术后复查腹部CT可见腹腔注水全部消失,其中仅有94例（53.11%）术中出现轻微并发症,均未出现严重并发症。术后162例患者消融边缘充分,增强扫描示消融区无强化。CT引导下人工腹水结合3DVAPS辅助射频消融手术的完全消融技术成功率为91.53%（162/177）。 结论 CT引导下人工腹水结合3DVAPS辅助射频消融治疗难消融复发性肝癌是一种安全、有效的治疗方法。     

基于叶绿体DNA序列和ISSR分子标记的菘蓝不同种质遗传变异分析

目的 对47个菘蓝种质进行序列变异和遗传多样性分析，开展其遗传分化和遗传结构研究。方法 采用试剂盒提取法提取菘蓝基因组DNA，用2条叶绿体DNA（cp DNA）序列和5条简单重复序列（ISSR）引物进行扩增并测序，通过软件Chromas、Mega 7.0、DanSP5、GenALEx对得到的序列进行校正、拼接及序列特征分析，利用软件PERMUT、PopGen1.31进行遗传多样性参数和遗传结构分析，最后利用NTSYS软件得到47个菘蓝种质的非加权组平均法（UPGMA）聚类树状图。结果 菘蓝47个种质的129个样本被成功扩增和测序，2个cp DNA序列经拼接后长度为1 412 bp，共有377个多态性变异位点，单倍型数为36个，Fu and Li''s D*检验在P<0.01水平上显著；基于cp DNA的核苷酸多样性（Pi）、平均遗传多样性（H_S）和总遗传多样性（H_T）分别为0.119 89、0.787和0.891，遗传分化系数遗传分化系数（Gst）、核苷酸分化系数（Nst）和群体间遗传分化指数（Fst）分别为0.117、0.468和0.488，基因流（Nm）值为0.615；基于ISSR的多态位点百分率（PPB）、香农（Shannon）信息多样性指数(I)、Nei''s基因遗传多样度指数(H)和Gst平均值为78.85%、0.334 8、0.218 6和0.754 4，Nm值为0.162 8。结论 菘蓝在物种水平上遗传多样性较高，具有丰富的单倍型类型，不同种质居群间遗传分化较明显，且基因交流不频繁，遗传变异主要存在于居群间，种群近期积累了较多的低频基因突变，推测其历史上曾经历了显著的区域扩张。     

基于cp DNA的当归野生与栽培种质鉴定与遗传变异分析

目的 基于叶绿体基因（cp DNA）对甘肃省11个当归栽培品种（系）及7个野生当归居群进行了遗传变异分析，为当归的种质鉴定和新品种的选育提供参考。方法 利用3对cp DNA 引物对当归样品进行聚合酶链式反应（PCR）扩增并测序，利用MegaX软件对序列特征进行统计，并计算当归居群间平均遗传距离，利用NTSYS 2.10e软件构建遗传距离非加权组平均法（UPGMA）聚类图。利用DanSP v6软件计算当归序列多态性及Tajima中性检验；利用PERMUT软件计算当归居群结构；利用Arlequin v3.5软件进行分子变异分析；最后利用PopART 1.7软件构建TCS单倍型网络图。结果 3对cp DNA 引物扩增、测序、比对、合并后的序列长度为1 759 bp，野生当归检测到1个变异位点，栽培当归检测到480个变异位点，其中单一突变位点97个，简约信息位点383个，插入-缺失位点152个。在野生组和栽培组当归cp DNA 的matK、psbA-trnH和rbcL 3个区域中，多态性最高的区域均为matK。全部当归联合序列的Tajima中性检验均为不显著负值，但在栽培当归中psbA-trnH和rbcL基因中呈显著负值，说明当归整体上遵循中性进化，而psbA-trnH和rbcL基因经历过选择。野生居群间的遗传分化程度（Fst=0）低于栽培当归居群间的分化程度（Fst=0.114 19，P<0.05），且二者之间遗传分化程度较高（Fst=0.942 55，P<0.01）。栽培当归居群中变异主要来源于居群内部（89%）。遗传距离UPGMA聚类树显示野生当归和栽培当归各自聚为一支，亲缘关系较远，栽培当归中居群3距离其他栽培当归居群较远。TCS单倍型网络图由15个单倍型和4个未知单倍型构成，分为3部分，各部分间变异次数较多，共享单倍型仅分布于野生或栽培组之内，组间不存在共享单倍型。结论 当归在物种水平上遗传多样性偏低，野生当归居群多样性低于栽培当归，野生与栽培当归组间的遗传分化程度高，而野生当归居群内和栽培当归居群内的分化程度均较低，栽培当归中遗传变异主要存在于居群内。     

白屈菜-元胡药对逆转乳腺癌阿霉素耐药药效物质研究

目的 基于体外耐药细胞模型,研究白屈菜-元胡药对（Chelidonii Herba-Corydalis Rhizoma drug pair,CMCR）逆转乳腺癌阿霉素（adriamycin,ADR）耐药药效物质。方法 运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF-MS）对CMCR不同配伍比例（1∶1、2∶1）95%、80%、70%、60%、50%乙醇提取部位的化学成分进行表征,确定共有成分;以人乳腺癌阿霉素耐药细胞（MCF-7/ADR）为研究对象,采用CCK-8法检测ADR联合CMCR各提取部位对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,计算耐药倍数;利用灰色关联度、Pearson相关性分析和偏最小二乘回归分析建立表征图谱中共有成分峰面积与逆转耐药倍数的相关性,筛选出CMCR最佳逆转耐药活性部位及相关药效物质。采用荧光显微镜观察白屈菜碱联合延胡索乙素作用细胞后罗丹明123累积量的影响;Western blotting和qRT-PCR法检测P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）、乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistant protein,BCRP）、肺耐药蛋白（lung resistance protein,LRP）蛋白和基因表达。结果 CMCR 10个提取部位分析得到30个共有成分。CMCR（1∶1）95%乙醇提取部位对ADR的逆转耐药活性最强,其逆转耐药倍数为11.08。根据相关性分析结果初步确定白屈菜碱、延胡索乙素、小檗碱、二氢血根碱和白屈菜红碱为CMCR逆转乳腺癌ADR耐药的潜在药效物质。选择药效相关性最高的白屈菜碱和延胡索乙素联合进行实验验证,发现白屈菜碱-延胡索乙素能够增加细胞内罗丹明123累积,显著下调MCF-7/ADR细胞P-gp、BCRP和LRP蛋白和基因表达（P＜0.01、0.001）。结论 阐明了CMCR逆转乳腺癌阿霉素耐药的药效物质,为其临床应用及后续抗肿瘤辅助用药开发奠定了基础。     

当归AP2/ERF转录因子家族鉴定及干旱胁迫下的表达分析

目的 对当归Angelica sinensis中的AP2/ERF转录因子基因进行鉴定以及生物信息学分析,并分析其在干旱胁迫下的表达差异,以期筛选出与响应干旱胁迫相关的AsAP2/ERF基因,为后续深入研究2品种当归抗逆性差异及抗性育种提供参考依据。方法 基于全长转录组测序数据,利用生物信息学方法对AsAP2/ERF转录因子家族成员进行鉴定,并分析该家族特征。基于干旱胁迫转录组数据分析AsAP2/ERF基因的表达模式,并利用qRT-PCR技术进行验证。结果 从当归中共鉴定到53个AP2/ERF转录因子,包括28个ERF、18个DREB、5个RAV、2个AP2亚家族成员。AsAP2/ERF转录因子的氨基酸数量是142～440 aa,均为亲水性蛋白,亚细胞定位预测结果显示多数成员定位于细胞核。基因表达模式的分析结果表明,在响应干旱胁迫条件下,“岷归2号”（M2）中表达上调的基因数量多于“岷归1号”（M1）,其中8个基因在2品种当归D2组表达差异显著,这可能与2品种当归的抗旱性相关。qRT-PCR分析结果表明,6个基因与干旱胁迫转录组数据基本一致。结论 鉴定了当归中的AP2/ERF转录因子家族,探究了不同基因在干旱胁迫下的表达模式,最终获得了6个响应干旱胁迫的AsAP2/ERF候选基因,为后期开展当归抗旱功能基因的研究奠定基础。     

轻轻松松十分钟保护心血管

早上起床是不是觉得很困难呢?赖床的时间,如果能闭目养神在床上慢慢做10分钟小动作,就能对心血管健康起到很大作用.     

肝血管内皮瘤带瘤成活8年1例

上皮样血管内皮瘤(epithelioid hemangioendothelioma,EHE)由Weiss和Enzinger 1982年首次命名, 是一种少见的血管源性肿瘤,多发生在软组织以肺、骨、脑和小肠等脏器,原发于肝脏者甚少.现将本院1例肝血管内皮瘤带瘤成活8年的患者报道如下.