温敏型壳聚糖载体中体外诱导的神经元样细胞生长的观察

目的:为验证温敏型可注射性水凝胶壳聚糖-甘油磷酸钠(chitosan/glycerophosphate,C/GP)作为神经支架的可行性,将体外诱导的神经元样细胞与温敏型C/GP凝胶共培养,观察其生物相容性。方法:实验于2006-03/12在白求恩国际和平医院实验室完成。①实验材料:壳聚糖由浙江金壳生物化学有限公司提供,β-甘油磷酸钠由FlukaAG公司提供。②实验方法:脱乙酰度91%的壳聚糖200mg溶于9mLHCl溶液中,甘油磷酸钠560mg溶于1mL去离子水中,消毒后室温下按2∶体积比将甘油磷酸钠溶液加入壳聚糖溶液中制备温敏型水凝胶3C/GP。实验分为3组:由骨髓基质细胞诱导分化的神经元样细胞与C/GP复合物共培养者为实验组;神经元样细胞与完全培养基共培养者为细胞对照组;C/GP复合物加完全培养基共培养者为C/GP对照组。③观察指标:光镜下观察各组细胞形态变化,各组在培养24h后MTT法酶标仪测吸光度(A值),连续观察7d绘制生长曲线。结果:神经元样细胞在C/GP凝胶呈三维分布,胞体变大,逐渐伸出突起,呈单极、双极或多极,部分相邻细胞的突起连接。神经元样细胞的生长曲线为"S"型,第1,2天为潜伏期,第3～5天为对数生长期,6d后细胞数量开始减少,实验组的A值较细胞对照组略低,两组在7d后A值均有所降低,但各个时间点差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:神经元样细胞与C/GP凝胶有良好的生物相容性,温敏型可注射性C/GP凝胶能作为神经工程的载体材料。     

骨髓基质细胞向神经样细胞的分化

目的:有研究表明,在诱导剂β-巯基乙醇或二甲基亚砜与丁羟茴醚的作用下,80%骨髓基质细胞可诱导分化成神经样细胞,并表达神经元特异性蛋白,一些神经营养因子也能诱导骨髓基质细胞分化为神经样细胞.实验拟以三磷酸胞苷二钠为诱导剂,验证其诱导骨髓基质细胞分化为神经样细胞的可行性.方法:实验于2006-03/12在白求恩国际和平医院实验室完成.[1]实验材料:SD大鼠,体质量50～60g,雌雄不限,由河北医科大学实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.[2]实验方法:分离大鼠骨髓基质细胞进行体外培养,传代至第3代时实验组加入三磷酸胞苷二钠诱导剂诱导,对照组不加诱导剂.[3]实验评估:观察细胞分化为神经样细胞的形态变化,并进行免疫组织化学染色鉴定,计算阳性细胞百分比.结果:刚分离的骨髓基质细胞呈圆形,胞体透亮.接种24h后,少量细胞贴壁,72h后大部分细胞贴壁,形态为梭形、圆形、多角形,8～10d细胞达到90%融合,细胞呈长梭形排列呈栅栏状,传代后的细胞约24h完全贴壁,3～7d基本铺满瓶底.诱导后的骨髓基质细胞胞体变圆,突起逐渐伸长,并互相连接成网状,10d后免疫组织化学染色鉴定实验组表达神经元特异性烯醇化酶、神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞百分比明显高于对照组.结论:三磷酸胞苷二钠在体外可诱导骨髓基质细胞分化为神经样细胞.     

大鼠骨髓基质细胞在温敏型壳聚糖水凝胶中的生长

目的:观察体外分离培养的骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)与温敏型水凝胶壳聚糖,甘油磷酸钠(chitosan/glycerophosphate,C/GP)的生物相容性.方法:实验于2006-03/12在白求恩国际和平医院实验室完成.SD大鼠MSCs经过体外培养传代后,与制备温敏型水凝胶C/GP在培养板内共培养7 d,同时设立细胞对照组(仅加入细胞培养基).采用形态学观察、MTT法检测MSCs在C/GP的生长情况,并绘制生长曲线.结果:①MSCs接种于C/GP复合物24 h后见细胞成球状,未见明显梭形及多角形细胞,48 h内生长速度较慢,72 h后可见梭形、多角形细胞,细胞数量明显增多.②绘制MSCs生长曲线为"S"形,第1个24h为细胞潜伏适应期,第2-3个24h为对数生长期,4 d后细胞增殖减慢,5 d后细胞基本停止生长.细胞对照组的细胞潜伏适应期为第1～2个24 h,对数生长期推后至3-5个24 h,1周后细胞基本停止生长.结论:MSCs在C/GP凝胶中可良好存活、增殖,MSCs与C/GP凝胶有良好的生物相容性.     

西米替丁对脑出血后应激性溃疡出血的预防观察

目的观察西米替丁对脑出血后应激性溃疡出血的预防作用。方法经头颅CT证实的脑出血患者69例随机分为两组，基础治疗相同。治疗组35例，加用西米替丁400mg、静脉注射、2次／d，持续14d。对照组34例，未用西米替丁治疗。结果治疗组35例中1例发生应激性溃疡出血，对照组34例中6例发生应激性溃疡出血。统计学处理差异有统计学意义（X^2=4．14，P〈0．05）。结论西米替丁对脑出血后应激性溃疡出血有较好的预防作用。     

3种三联方案根除幽门螺旋杆菌感染的效价及依从性分析

目的对比3种三联方案对幽门螺旋杆菌（HP）阳性的十二指肠球部溃疡（DU）及糜烂性胃炎的治疗效果、用药成本及对治疗的依从性。方法108例DU和糜烂性胃炎伴HP感染的患者随机分成3组，分别选用呋喃唑酮、甲硝唑、克拉霉素参与的3种三联方案治疗，结果进行分析。结果DU及糜烂性胃炎的愈合率及HP根除率各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。不良反应发生率及成本一效果比各组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 3种方案治疗效果相当，但呋喃唑酮参与的三联方案与其他两组比较性价比更高、依从性更好，值得临床推广应用。