细胞周期及其调控基因对问号钩端螺旋体诱导单核-巨噬细胞凋亡的影响

目的 了解不同细胞周期及其调控基因对问号钩端螺旋体(简称钩体)诱导人或鼠单核-巨噬细胞凋亡的影响.方法 采用细胞周期染色试剂盒及流式细胞仪检测问号钩体黄疸出血群赖型赖株感染前后小鼠单核-巨噬样细胞株J774A.1和人单核细胞株THP-1的细胞周期及其变化.采用细胞周期阻滞剂及流式细胞仪建立细胞周期同步化的J774A.1和THP-1细胞并进行鉴定.采用AnnexinV/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测问号钩体赖株感染后细胞周期同步化与非同步化J774A.1和THP-1细胞早期凋亡、晚期凋亡/坏死率.采用实时荧光定量RT-PCR检测问号钩体赖株感染前后J774A.1和THP-1细胞的细胞周期及凋亡基因p21、p27、p53、c-myc和cycA mRNAs水平变化.结果 未感染钩体的正常J774A.1和THP-1细胞均分别处于G1、S和G2/M期,感染后均以G1期细胞为主,但S期THP-1细胞有所增加,J774A.1细胞则否(P＜0.05).J774A.1和THP-1细胞可分别被不同细胞周期阻滞剂阻滞在G1、S、G2/M或M期.G1期J774A.1和THP-1细胞感染后均无明显的早期凋亡现象,M期细胞早期凋亡、晚期凋亡/坏死率均明显升高(P＜0.05),G1期THP-1细胞晚期凋亡/坏死率明显升高(P＜0.05),J774A.1细胞则否.J774A.1和THP-1细胞感染后,p21 mR-NA水平均明显高于未感染细胞(P＜0.05),J774A.1细胞c-myc和p27 mRNAs水平、THP-1细胞cycAmRNA水平也高于未感染细胞(P＜0.05).结论 不同细胞周期及其调控基因对问号钩体诱导人或鼠单核-巨噬细胞凋亡有明显影响,但存在细胞种类差异性.     

分级康复护理对老年脑卒中患者吞咽能力的影响

吞咽困难是脑卒中患者最常见的症状之一,据文献报道约20%～80%的脑卒中患者会发生不同程度的卒中后吞咽困难[1-2]。吞咽困难是脑卒中患者预后差的独立危险因素,如得不到及时有效的护理治疗,可导致患者住院时间延长,卒中预后不良,增加病死率。既往有研究显示脑卒中后吞咽困难的患     

问号钩端螺旋体colA基因产物胶原酶活性及其致病机制研究

目的了解不同问号钩端螺旋体(简称钩体)血清群colA基因分布和序列保守性、表达产物胶原酶活性以及感染细胞时colA基因表达水平变化和产物分泌情况。方法采用PCR及其产物测序法检测我国主要流行的7个问号钩体血清群代表株中colA基因并了解其序列保守性。构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株colA基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提取表达的目的重组蛋白rColA。采用分光光度法检测rColA水解I~IV型天然胶原蛋白及Azocoll和Pz-肽合成底物能力并测定其Km和Kcat值。采用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot分别检测问号钩体赖株感染HUVEC、BEAS-2B、L-02、HEK293细胞时colA-mRNA水平变化及ColA分泌情况。结果不同血清群问号钩体均能扩增出全长colA基因片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性高达99.4%~100%。所构建的colA基因表达系统能有效表达rColA。rColA能不同程度地水解上述6种底物,但水解III型胶原蛋白能力最强(P0.05),其Km和Kcat值分别为2.16mg/mL和35.6h-1。问号钩体赖株感染各靶细胞时colA-mRNA水平显著升高(P0.01),问号钩体-细胞共培养物上清中可检出ColA。结论问号钩体colA基因为序列保守、分布广泛的胶原酶编码基因,感染细胞时该基因产物表达上调并外分泌,从而在问号钩体感染宿主过程中发挥实际作用。     

早期运动联合物理疗法对预防76例脑梗死患者DVT的影响

下肢深静脉血栓形成（DVT）为脑梗死患者常见的并发症，若不加以预防，脑梗死患者约有30％～40％发生 DVT，合并严重偏瘫的患者其发病率高达60％～75％［1］，脑梗死并发DVT的最危险时期是发病后3～10 d［2］，有50％～60％的DVT患者出现肺栓塞（PE），PE为导致脑梗死患者急性期死亡的主要原因。因此，积极预防脑梗死后 DVT的发生，对降低脑梗死的致残率和病死率，改善其预后具有重要意义。DVT的3大致病因素是静脉损伤、血流缓慢和血液高凝状态，其中血流缓慢和血液高凝状态为 DVT 形成的主要因素。DVT多好发于下肢，尤其是瘫痪肢体。有研究认为采用护理干预措施可以有效地促进下肢静脉血流的流动。本文着重探讨早期运动联合物理疗法对预防脑梗死患者 DVT 的作用。现报道如下。     

机械通气护理中存在的问题分析与对策

目的分析机械通气护理中存在的问题,提出改进措施,防范和减少医疗隐患,进一步提高机械通气的护理质量。方法对2006年1月至2009年7月期间重庆市第三人民医院老年呼吸科、呼吸内科、神经科行机械通气的患者护理中存在的问题进行分析、归纳、总结,提出改进措施。结果机械通气护理中存在气管插管前准备不充分,插管后气道湿化不够,无菌技术操作不严,对患者缺乏人性化的关怀等问题。结论只有合理配备人力资源、加强专科护士的培训、完善质控检查才能提高机械通气的护理质量。     

感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制

目的：了解感染人巨噬细胞过程中问号钩端螺旋体（简称钩体）黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白（OMP）抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制。 方法：采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶（HK）基因和结构功能域。采用实时荧光定量RT-PCR检测钩体感染人THP-1巨噬细胞前后钩体主要OMP编码基因mRNA水平的变化。采用HK胞外区多肽抗血清封闭试验及氯氰碘柳胺阻断试验,检测OmpR及其HK对感染过程中问号钩体OMP编码基因mRNA水平变化的影响。 结果：生物信息学分析结果显示,LB015和LB333可能是问号钩体赖株OmpR编码基因,LB014可能是其HK编码基因。问号钩体赖株感染THP-1细胞后,lipL21、lipL32、lipL41基因mRNA水平迅速并持续下降（P<0.01）,groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平瞬时迅速升高（P<0.01）。氯氰碘柳胺或HK抗血清处理可使感染THP-1细胞而显著下降的问号钩体lipL21和lipL48基因mRNA水平明显回升（P<0.01）,氯氰碘柳胺处理可使感染THP-1细胞而显著升高的groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平明显下降（P<0.01）。 结论：问号钩体赖株感染人巨噬细胞后主要OMP抗原表达水平发生明显变化。问号钩体赖株染色体中存在一组编码OmpR及其HK的基因,其主要功能可能是下调感染过程中部分OMP抗原表达水平。     

芯片法筛选钩端螺旋体外膜蛋白抗原表位

目的 通过芯片法筛选钩端螺旋体主要外膜蛋白中抗原表位,为后续研制有广泛交叉保护作用的通用钩体疫苗提供科学依据。方法 采用PCR及测序法检测主要外膜蛋白编码基因在不同血清群钩体中的分布情况及其序列相似性。采用生物信息学软件预测钩体外膜蛋白抗原表位。采用抗体纯化磁珠试剂盒纯化大鼠抗不同血清群钩体抗血清IgG。采用抗原芯片法检测各抗原肽的免疫反应性,确定优势抗原表位。结果 候选抗原蛋白编码基因均广泛存在于不同血清群的致病性钩体中且序列保守。综合生物信息学软件结果预测出30个候选T-B联合抗原表位。合成短肽结合芯片检测方法共筛选出9个优势抗原表位,各抗原肽对不同血清群钩体抗血清IgG反应性基本一致。结论 芯片法可高效筛选钩体外膜蛋白优势表位,为表位肽疫苗的研制提供支持。