CRISPR/Cas9介导下UPS系统-E3泛素连接酶ITCH基因敲除细胞株的初步构建

目的：构建CRISPR/Cas9介导下泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin proteasome system,UPS）-E3泛素连接酶（atrophin 1interacting protein 4,ITCH）基因敲除细胞株。方法：在人ITCH基因的PAS结构域内设计3个sgRNA,构建3个分别同时表达ITCH-sgRNA、Cas9和eGFP的三合一质粒。经测序序列正确的重组质粒用lipofectamine 3000转染HeLa细胞,24h后荧光倒置显微镜观察转染情况。结果：3个ITCHsgRNA寡核苷酸单链成功退火成为双链,经测序发现,设计的3个ITCH-sgRNA全部重组到了CRISPR/Cas9载体上。荧光检测发现在同时表达ITCH-sgRNA、Cas9和eGFP的三合一质粒转染的HeLa细胞内有绿色荧光。结论：成功构建了同时表达ITCH-sgRNA、Cas9和eGFP的三合一质粒,并将三合一重组质粒成功转入细胞中,为实现在HeLa细胞中完全敲除ITCH基因,从而为构建ITCH基因敲除稳定株奠定了基础。     

多模态心血管影像技术对于糖尿病心肌病诊断效能的研究

目的 探讨不同心血管影像技术对于糖尿病心肌病患者心室容积及心功能的检测效能。方法 收集我院诊断为糖尿病心肌病的患者120例,分别使用超声心动图、心脏CT成像(cardiac computed tomography, CCT)以及心脏磁共振(cardiac magnetic resonance, CMR)对患者进行检测,分别测量患者的左心室和右心室舒张末期容积(end diastolic volume, EDV)和收缩末期容积(end systolic volume, ESV),每搏输出量(stroke volume, SV)和射血分数(ejection fractions, EF)。通过统计学分析检测3种检测手段所得结果的差别。结果 通过对比患者心功能参数发现,超声心动图检测的DCM患者的心室容积在左心室差异无统计学意义,但右心室的ESV要显著小于CMR的检测结果(P<0.05)。针对所有患者,超声心动图检测的EF要普遍高于CMR的检测结果(P<0.05)。当患者EF>50%时,超声心动图的检测结果与CMR的检测结果无明显差异,而患者EF<50%时,超声心动图的...     

影响2型糖尿病患者动脉硬化的多因素分析

目的　探讨2型糖尿病（T2DM）患者动脉硬化的危险因素。方法　选取T2DM住院患者164例,通过流式细胞术检测血浆内皮细胞微粒（EMP）水平及超声测定颈动脉内膜中膜厚度（IMT）,收集相关临床指标,采用多因素LR　Logistic回归分析2型糖尿病患者动脉硬化的危险因素。结果　根据超声测定IMT值分两组,T2DM伴颈动脉硬化（CAS）组（120例）,T2DM无CAS组（44例）。与T2DM无CAS组比较,T2DM伴CAS组年龄较大,糖尿病病程较长（P<0.01）,EMP、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、体质指数（BMI）水平升高（P<0.05）。多因素LR　Logistic回归分析显示EMP、LDLC、BMI是CAS独立危险因素（EMP　OR＝1.382,P＝0.023;LDLC　OR＝5.992,P＝0.050;BMI　OR＝1.837,P＝0.017）。结论　2型糖尿病患者的EMP、LDLC、BMI与IMT增厚有关,为动脉硬化的独立危险因素,可用于预测、评估其大血管病变风险。     

糖尿病视网膜病变患者血清VEGF、ES、TKLK、TSP、sICAM-1水平的变化及意义

目的:探讨血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮抑素(ES)、血小板反应蛋白(TSP)、组织激肽释放酶(TKLK)及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平在糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中的变化及其临床意义.方法:选取我院2014-01/2016-12收集的无眼底病变的糖尿病患者60例(DM组)、非增殖性糖尿病视网膜病变患者60例(NPDR组)、增殖性糖尿病视网膜病变患者60例(PDR组)和同期健康体检对象60例(对照组),检测四组患者血清VEGF、ES、TSP、TKLK、sICAM-1水平并进行比较分析.结果:PDR组患者的血清VEGF、TKLK、sICAM-1水平均显著高于NPDR组、DM组、对照组(P<0.05);PDR组患者的血清ES水平均显著低于NPDR组、DM组、对照组(P<0.05).NPDR组患者的血清VEGF、TKLK、ES水平均显著高于DM组和对照组(P<0.05).NPDR组患者的血清VEGF与ES、TKLK、sICAM-1水平均呈显著的正相关关系(P<0.05).PDR组患者的血清VEGF与TKLK、sICAM-1水平均呈显著的正相关关系(P<0.05),PDR组患者的血清VEGF与ES、TSP相关性不显著(P>0.05).结论:DR患者血清ES、TSP、TKLK、sICAM-1水平均发生显著改变,通过调节VEGF水平影响DR进程.     

环状RNA ITCH对高糖诱导的心脏成纤维细胞活化的影响与机制研究

目的 探讨环状RNA ITCH(Circ-ITCH)对高糖诱导的心脏成纤维细胞(CF)活化的影响及其机制。方法 体外培养人CF(HCF),按照处理方法的不同分为对照组、高糖组、过表达载体阴性对照(OV-NC)组、Circ-ITCH过表达载体(OV-Circ-ITCH)组；模拟物阴性对照[微小RNA(miR)-NC]组、miR-212-3p模拟物(miR-212-3p mimics)组、抑制物阴性对照(inhibitor-NC)组、miR-212-3p抑制物(miR-212-3p inhibitor)组；Circ-ITCH过表达载体+模拟物阴性对照(OV-Circ-ITCH+miR-NC)组、Circ-ITCH过表达载体+miR-212-3p模拟物(OV-Circ-ITCH+miR-212-3p mimics)组、Circ-ITCH过表达载体+小分子干扰RNA阴性对照(OV-Circ-ITCH+si-NC)组和Circ-ITCH过表达载体+Samd同源物7小分子干扰RNA(OV-Circ-ITCH+si-Smad7)组，除对照组外，其余各组转染12 h后采用30 mmol/L D-葡萄糖...     

甲状腺功能减退症患者的左甲状腺素钠替代治疗剂量研究

目的探讨甲状腺功能减退症患者左甲状腺素钠替代治疗的合适剂量。方法甲状腺功能减退症患者1 368例,按照入选患者首次确诊时甲状腺激素测定结果进行分组:A组:单纯TSH升高(亚临床甲减);B组:TSH升高伴T4和(或)FT4降低;C组:TSH升高伴T3和(或)FT3降低;D组:TSH升高伴T4、T3、FT3、FT4降低。分析各组左甲状腺素钠替代治疗的剂量差别。结果 A、B、C、D组左甲状腺素钠替代治疗的合适剂量分别为(38±8.5)、(62±9.2)、(88±7.9)、(114±9.4)μg,各组间比较P均<0.05。结论对于甲状腺功能减退症患者可以根据治疗前的甲状腺激素测定结果,大致推断替代治疗的合适剂量,从小剂量开始逐渐增加剂量直到合适剂量,维持6周以上再测定甲状腺激素水平,从而减少甲状腺激素测定的次数,并能够使甲状腺功能减退症患者的甲状腺功能尽快恢复正常。