Ⅱ级(层流式)生物安全柜标准(NSF-492002)简介

NSF 49是由NSFInternational———一个独立 的、非赢利性的、非政府组织制定的Ⅱ级(层流 式)生物安全柜的标准号。2002年颁布的是最新 版,同年被美国国家标准化组织指定为美国国家 标准。该标准指出生物安全柜的设计是将从事1 ～4级生物危害因子操作中所产生的危害降至最 低,述及7个方面内容:概述标准使用范围;列出 所有引用的标准;对24个生物性、技术性名词作 定义,其中对生物危害、生物安全级别、生物安全 柜种类作详尽解释;对材料性能结构提出具体要 求;详述生物安全柜的设计制造及性能要求;通过 大量附件和图介绍12种性能测试…     

7种微小RNA检测试剂的多中心评估

目的 评估某品牌7种微小RNA(miRNA)检测试剂盒的检测性能。方法 采用多中心横向联合评价方法,在全国范围内选择10家检测中心在同一时间使用同一批样本,对同一批号试剂进行性能评估。检测项目为miR-21、miR-26a、miR-27a、miR-122、miR-192、miR-223和miR-801,以miR-1228为内参。评估参数包括精密度、符合率、检出限和抗干扰能力。结果 10家检测中心检测8种miRNA的循环阀值(Ct)的批内变异系数(CV)均<5.00%,批间CV均<6.50%。10家检测中心检测20例临床血浆样本的总符合率均为100.00%(20/20),对50拷贝/μL标准参考品的检出率均为100.00%(20/20)。血红蛋白200 g/L、胆红素1 000 μmol/L和三酰甘油100 mmol/L对检测结果无明显干扰。结论 该试剂盒检测7种miRNA的精密度、符合率、检出限和抗干扰能力表现良好,可满足不同地区、不同实验室和不同检测系统的使用需求和预期用途,具有一定的临床应用价值。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的 评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法 基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司Light Cycler仪器和国产达安试剂,PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBAS Amplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果 实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR-ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0．890。结论 应用国产试剂配合Light Cycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR-ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

CRISPR/Cas系统在分子检测中的应用

近年来,成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律短回文重复序列相关蛋白(CRISPR/Cas)系统凭借其简单、高效的基因编辑能力,已被广泛应用于生物、医学等多个研究领域。随着CRISPR技术的快速发展,CRISPR/Cas系统已被开发为一种快速、便携、低成本、高灵敏度的分子检测工具,在病原体检测、耐药性分析、单核苷酸多态性(SNP)分型、肿瘤基因突变检测等方面取得重大突破。文章就不同Cas蛋白在分子检测中的最新研究进展进行综述,并对其应用前景进行展望,以期为从事相关领域的科研工作者提供参考与帮助。     

荧光定量PCR测定HBV DNA测量不确定度评定的探讨

目的探讨利用质控数据评定荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定HBV DNA测量不确定度的可行性。方法用批内不精密度和批间不精密度数据评定A类不确定度;分别用参加卫生部临床检验中心和美国病理学家协会(CAP)的室间质评数据评定B类不确定度;最后评定合成不确定度和扩展不确定度。结果利用卫生部临床检验中心室间质评反馈结果评定的扩展不确定度(k=1.96,n=1)在检测值为104~105和106~107IU/mL时分别为0.521 6和0.529 8;利用CAP能力比对反馈结果评定的扩展不确定度(k=1.96,n=1)在检测值为104~105和106~107IU/mL时分别为0.973 1和0.977 5。结论目前用室间质评数据评定PCR测定HBV DNA的不确定度不能真实反映实验室的不确定度,使用国家标准物质评定不确定度更合适。     

动物血清替代人血清制备乙肝标志物室间质评物的初步研究

目的尝试制备以胎牛血清(FCS)替代人血清为基质的乙型肝炎病毒(HBV)标志物室间质评样本。方法以FCS作为基质稀释人血清HBV标志物高值样本制备室间质评样本,并对制备样本进行基质效应和互换性实验、均匀性和稳定性评估及初步临床应用。结果使用两种检测方法验证制备样本的可互换性,检测值分布于95%可信区间内,相关性很好。雅培i1000全自动免疫分析仪检测HBV 5个项目[乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)]制备物结果的F值均F界值(F界值=3.02),保存于-20℃和4℃时可稳定1个月以上。20家使用化学发光法[ABBOTT i2000全自动免疫分析仪(简称ABBOTT i2000)]和20家使用酶免法(科华试剂)的实验室HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的变异系数(CV)分别为ABBOTT i2000仪器组7.60%、7.79%、6.37%、13.30%、3.61%,科华试剂组11.67%、14.72%、9.11%、12.30%、9.75%。结论通过试验验证以FCS为基质制备的质评样本的互换性、稳定性和均匀性满足室间质评样本要求,初步认为FCS在一定程度上可以作为基质用于HBV标志物室间质评样本的制备。     

乙型肝炎病毒YMDD突变室间质量评价调查品制备及应用

目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室检测HBV YMDD突变的能力。方法筛选HBV DNA5×104 IU/ML的临床样本,经稀释制成含HBV YMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)、高温连接酶反应(LDR)和测序法筛选EQA候选样本,并采用PCR评估样本均匀性和稳定性。2017年2次EQA各制备5份样本,要求参评实验室在规定时间内检测样本并上报检测结果。对回报结果进行分析。结果 2017年2次EQA分别收到12份和10份有效回报结果,66.67%的实验室检测结果完全正确。HBV YIDD、YVDD、YIDD+YVDD和YMDD不同突变样本的检测符合率分别为90.63%、86.36%、77.27%和88.24%。结论制备的调查品均匀、稳定,可用于EQA;部分临床实验室HBV YMDD突变检测能力尚需提高,应加强质量控制以保证检测结果的准确性。     

人乳头瘤病毒16和18型核酸检测用质控品制备及其应用

目的制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品,并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。方法分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系(Siha和Hela)进行培养,收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装,对其均匀性和稳定性进行评价,然后将样本盘发送至参评实验室,对回报结果进行分析评价。结果均匀性评价结果显示质控品间均匀性良好,稳定性评价结果表明质控品检测结果随时间延长无明显趋势变化。参评实验室对高浓度样本的检测符合率较高,低浓度样本的检测符合率较低。对于不分型项目,26%参评实验室由于上报假阴性结果导致出错。对于分型项目,不同检测方法的结果间没有显著差异,样本检测出错主要是因为错检或漏检某一亚型所致。结论制备的核酸检测用质控品的均匀性和稳定性良好,可有效用于临床实验室室间质量评价。质评结果显示上海地区参评实验室HPV核酸检测质量整体较好,个别实验室检测能力尚需提高。     

CYP3 A5基因检测质控品制备及其应用研究

目的通过构建体外质粒DNA作为质控样品开展他克莫司代谢基因——细胞色素P450 3A5(CYP3A5)基因检测室间质量评价计划(简称室间质评),评估参评实验室检测能力及存在的问题,提高临床实验室CYP3A5基因的检测质量。方法利用基因工程技术体外构建含CYP3A5*3(rs776746)位点上、下游序列的重组质粒,筛选CYP3A5*3 AA和GG基因型分别作为野生型和突变型样品,两者等比例混合后作为杂合突变型样品,并制备质控样品盘开展室间质量评价。依据回报结果计算各实验室成绩,汇总不同样品的总体符合率,并分析不同检测方法的符合率和检测错误类型。结果体外构建的重组质粒经Sanger测序验证分别含CYP3A5*3位点野生型和突变型序列。2017年两次室间质评中成绩满分的实验室分别为93.33%(14/15)和100%(17/17)。两次室间质评中,样品检测的总体符合率分别为96%(72/75)和100%(85/85)。荧光分子杂交法检测的样品符合率均为100%; Sanger测序法检测样品符合率为90%(27/30)和100%(40/40)。结论制备的质控样品能够有效监测试剂检测性能,具有良好的适用性。各实验室在CYP3A5*3基因位点检测总体准确率较高,但个别实验室检测能力有待提高。室间质评计划能帮助实验室发现检测中存在的问题,提高检测质量。     

各类慢性乙型肝炎患者HBV前S2抗原与HBV感染血清标志物及HBVDNA的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S2抗原(preS2Ag)与HBV感染5项标志物(HBV-M)、HBV DNA之间的关系及对慢性乙型肝炎分类诊断的临床意义。方法对584例各类慢性乙型肝炎患者血清采用放射免疫法(R IA)检测preS2Ag,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-M(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc),用聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA。结果慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及肝炎后肝硬化患者preS2Ag的检出率分别为45.98%、67.10%、83.87%及92.86%;preS2Ag在HBeAg阳性、HBV DNA>105拷贝/mL患者中检出率明显高于HBeAg阴性、HBV DNA<105拷贝/mL患者,差异有统计学意义(P<0.001)。结论preS2Ag的检出意味着病毒有复制或有传染性;开展preS2Ag的检测有助于慢性乙型肝炎的分类、慢性乙型肝炎急性发作和预后的判断。