微量元素对大鼠肝芳烃羟化酶及谷胱甘肽S-转移酶活性的影响

<正> 在城市大气颗粒物、机动车废气、烟草烟雾等环境样品中,化学致癌物如致癌性多环芳烃总是与多种微量元素同时存在的,微量元素可能显著地影响这些环境样品对人群的致癌危险性。致癌性多环芳烃在生物体内经历了代谢活化和灭活过程,本文报告12种微量元素对大鼠芳烃羟化酶及谷胱甘肽 S—转移酶活性影响的体外研究。     

喹烯酮诱导HepG2细胞DNA复制相关基因表达水平的变化

目的：喹烯酮能诱导HepG2细胞S期阻滞,引起DNA和染色体损伤。本研究旨在对喹烯酮致HepG2细胞S期阻滞机制进行筛选和分析。方法：本研究对喹烯酮染毒后HepG2细胞和未染毒HepG2细胞进行了Agilent全基因组的表达谱芯片检测,应用Genespring软件对差异表达的基因进行相关通路分析,并使用荧光定量PCR技术对部分DNA复制相关表达差异基因进行验证。结果：在芯片点样的41000个寡聚核苷酸片段中,喹烯酮染毒HepG2后,差异表达基因共1750个,其中表达上调的基因共446个,表达下调的基因共1304个。差异表达基因通路分析结果表明,与细胞周期、MAPK通路、DNA复制及DNA修复等通路相关的基因表达差异显著。经荧光定量PCR验证,DNA复制相关基因表达变化趋势与芯片检测结果相一致。结论：DNA复制相关基因的下降导致S期DNA复制的不完全性以及DNA损伤后引起的DNA修复,使得HepG2细胞在喹烯酮染毒后引起S期阻滞。基因表达谱芯片检测分析的结果为喹烯酮致HepG2细胞S期阻滞机制的深入研究奠定了基础。     

外源性一氧化氮对大鼠肝脏抗氧化物酶和药物代谢酶活性的影响

用亚硝基铁氰化钠（ＳＮＰ）作为ＮＯ生成前体,以０,１,２,４和８ｍｇ·ｋｇ－１ｉｐ给予大鼠,每日一次,连续５ｄ,来研究外源性ＮＯ对大鼠肝脏细胞色素Ｐ４５０,苯胺羟化酶（ＡＨ）,谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）等药物代谢酶和过氧化氢酶（Ｃａｔ）,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）,超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）等抗氧化物酶活性以及脂质过氧化的体内影响情况．结果表明外源性ＮＯ能明显降低大鼠肝脏ＳＯＤ,Ｃａｔ,ＡＨ的活性和细胞色素Ｐ４５０的含量（Ｐ＜０．０５）,并且高剂量组还能明显促进脂质过氧化发生（Ｐ＜０．０５）,但对ＧＳＨ－Ｐｘ和ＧＳＴ的活性则无明显影响     

呋喃唑酮对Hep G2肝癌细胞增殖和细胞周期的影响

背景与目的：探讨呋喃唑酮（furazolidoze，FZD）对体外培养的人肝癌细胞（HepG2）的毒性机制。材料与方法：分别以不同浓度FZD（0．00、0．78、1．56、3．12、6．25、12．50、25．00、50．00μg／m1）作用HepG2细胞24h，采用噻唑蓝（MTT）比色法测定FZD对细胞增殖的影响；流式细胞术（FCM）检测细胞周期的分布；RT-PCR半定量检测S期关卡相关基因的变化。结果：随着FZD浓度的增加，HepG2细胞的存活率逐渐降低，当浓度超过6．25μg／ml时，细胞存活率下降显著（P〈0．05）；细胞生长曲线显示各染毒浓度组细胞生长速度明显减慢；细胞周期动力学显示FZD在0～3．12μg／ml范围内s期细胞比例明显增加，G-期细胞比例下降；RT-PCR结果显示FZD作用后p2J呈高表达，cyclinE,cyclinA和Cdk2表达量则不同程度下调。结论：FZD对体外培养的HepG2细胞有一定的细胞毒性且诱导s期阻滞，其增殖抑制作用可能是通过激活s期损伤关卡实现的。     

喹乙醇诱导HepG2细胞线粒体的氧化损伤

背景与目的:探讨喹乙醇(olaquindox)对人肝癌细胞(HepG2)线粒体的氧化损伤作用. 材料与方法:用0、200、400和800μg/ml喹乙醇处理HepG2细胞24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法确定喹乙醇对HepG2细胞的IC50分子探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFDA)和双氢溴乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;罗丹明123检测线粒体膜电位(△Ψm)变化;钙离子荧光探针Fluo-3AM检测胞浆游离钙离子浓度并用定量PCR方法检测线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的损伤情况. 结果:随着喹乙醇浓度的增加,HepG2细胞的存活率逐渐降低(P均<0.01),呈时间-剂量-反应关系;不同浓度的喹乙醇作用细胞24 h后,随着喹乙醇浓度的增加细胞内ROS和胞浆游离钙离子浓度显著增加(P<0.05或P<0.01),△Ψm明显降低且呈剂量-反应关系;喹乙醇能引起HepG2细胞mtDNA和nDNA损伤(P均<0.01),且mtDNA损伤程度显著高于nDNA,并呈剂量-反应关系. 结论: 喹乙醇在体外实验中,可诱导HepG2细胞线粒体氧化性损伤.     

p38 MAPK在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究p38 MAPK信号通路在喹乙醇诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/ml)的喹乙醇染毒HepG2细胞24 h和800μg/ml喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)后,采用Westernblot法检测细胞内磷酸化p38蛋白和p38总蛋白的表达情况,以p38 MAPK磷酸化水平反映p38 MAPK信号通路的活性。分别采用0、10、20μmol/L的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HepG2细胞1 h后,再用800μg/ml喹乙醇染毒24 h,采用Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡。结果:随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,HepG2细胞的p38磷酸化蛋白表达量逐步增加,其中800μg/ml喹乙醇染毒细胞24 h的实验组与对照组相比,p38磷酸化蛋白的表达量明显上调(P0.01)。10、20μmol/L的SB203580对喹乙醇诱导细胞凋亡有促进作用,细胞的凋亡率分别为35.4%±2.83%、40.2%±3.98%,较喹乙醇对照组(23.1%±3.59%)明显升高(P0.05)。结论:喹乙醇能激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路的激活参与抑制喹乙醇介导的HepG2细胞凋亡的过程。     

喹乙醇对HepG2细胞抗氧化系统的影响

目的：观察喹乙醇对人肝癌细胞（HepG2）抗氧化系统的影响,探讨喹乙醇诱导HepG2细胞氧化性损伤的机制。方法：分别将0、200、400、800μg/ml的喹乙醇作用于HepG2细胞24h后,检测各组细胞内抗氧化酶/物的变化;另设800μg/ml的喹乙醇作用于HepG2细胞3h后,再用超氧化物歧化酶（SOD）（100μg/ml）、过氧化氢酶（CAT）（100μg/ml）及SOD（100μg/ml）＋CAT（100μg/ml）分别作用细胞3h的各实验组,采用分子探针2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFDA）检测各组处理后细胞内活性氧含量的变化。结果：不同浓度的喹乙醇作用HepG2细胞24h后,细胞总ATPase、Na＋K＋-ATPase及Ca2＋Mg2＋-ATPase和细胞内SOD、谷胱甘肽（GSH）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性随喹乙醇浓度的升高而下降（P〈0.05或P〈0.01）,且具有一定的剂量-效应关系,细胞内CAT活性较对照组下降（P〈0.01）,但无剂量-效应关系,而细胞内丙二醛（MDA）水平随喹乙醇浓度的升高而增加（P〈0.05或P〈0.01）,且呈一定的剂量-效应关系。经喹乙醇（800μg/ml）处理细胞后,再分别用CAT、SOD及SOD＋CAT处理的各组,其ROS含量与单纯喹乙醇（800μg/ml）组相比分别减少80%（P〈0.01）、40%及95%（P〈0.01）。结论：喹乙醇可使体外培养HepG2细胞的抗氧化系统受到一定的破坏,且产生的ROS形式以H2O2为主。     

p53基因对人胚肺成纤维细胞周期影响的研究

背景与目的:研究野生型和179位残基突变型p53基因在HELF细胞周期调控中的作用.探讨p53基因的179位残基突变对细胞生长的影响.材料与方法:用野生型p53(pcDNA3-wtp53)和179位残基突变的突变型p53(pcDNA3-mtp53)转染HELF细胞,观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;用流式细胞仪分析细胞周期;用RT-PCR和Western blotting方法检测p53基因转染后HELF细胞周期相关基因mRNA和蛋白的表达.结果:野生型p53表达的上调使HELF细胞周期阻滞于G1期,细胞体积减小,并下调cyclin D3、cyclin E、Cdk2和Cdk4的表达,同时上调p21的表达.而179位残基突变的突变型p53表达的上调则促进细胞周期从G1期到S期的转换,同时细胞体积增大,上调cyclin A和Cdk4的表达.结论:p53的179位残基突变对于HELF细胞cyclin A和Cdk4的表达有诱导作用,并可能借此促进细胞周期进程.     

多粘菌素E高产菌株的选育

以多粘类芽胞杆菌（Paenibacillus polymyxa）18－3为出发菌株，采用紫外线诱变，并以重金属Cu^2 作为筛选因子，获得一株遗传稳定且多粘菌素E发酵效价比出发菌株提高45％的菌株。对该菌株再采用亚硝基胍（NTG）诱变，以缬氨酸结构类似物α－氨基丁酸作为筛选因子时得到一株产量提高34％的菌株。