实时定量RT-PCR检测博尔纳病病毒方法的建立

目的 建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法.方法 设计BDV-p40基因特异性引物和探针,优化反应条件;并以已知的BDV-p40基因扩增产物的克隆为标准品,建立标准曲线;然后对已知BDV RNA进行实时定量RT-PCR的特异性和敏感性检测.结果 建立了特异检测BDV RNA的实时定量RT-PCR技术,并且可以检测到感染细胞中1个拷贝以上BDV RNA.结论 本技术可以直接用于BDV感染的检测和定量分析.     

学导式教学在医学微生物学实验教学中的应用

学导式教学法是在教师指导下学生自学教材、讨论交流、练习巩固,达到牢固掌握知识技能、培养自学能力和自学习惯的教学模式。从医学微生物学实验教学特点和七年制学生的实际出发,概括了医学微生物学实验学导式教学法的实际应用,培养和提高了学生自学能力和综合分析能力。     

医学微生物学实验教学的改革与探索

医学微生物学实验教学是理论教学的有益补充,也是教学中不可或缺的组成部分,对于学生消化吸收理论课内容、培养学生动手能力有着重要的作用.为了更好地提高医学微生物学实验教学效果,将实际教学工作中的一些改革办法作一总结.     

阿是止泻胶囊对甲亢性腹泻大鼠十二指肠黏膜肥大细胞的影响

目的探讨阿是止泻胶囊对甲状腺功能亢进（甲亢）性腹泻大鼠十二指肠黏膜肥大细胞（MC）的影响。方法制备甲亢性腹泻大鼠模型。运用阿是止泻胶囊低、中、高剂量及黄连素对其干预,采用免疫组化技术测定对照组、模型组、黄连素组、阿是止泻胶囊低、中、高剂量组大鼠十二指肠黏膜Mc数量、脱颗粒比率、面积、周长、等效直径及圆形度。结果①与对照组比较,模型组十二指肠黏膜Mc数目、面积、周长、等效直径增大,圆形度变小（P〈0．01或P〈0．05）;②与模型组比较,黄连素组、高剂量组十二指肠黏膜Mc数目、面积、周长、等效直径变小,圆形度增大（P〈0．01或P〈0．05）。结论阿是止泻胶囊能降低十二指肠黏膜Mc数目,可能是其治疗甲亢腹泻的机制之一。     

长链非编码RNA与乙型肝炎病毒相关肝细胞癌的研究进展

许多人类肿瘤是由致瘤病毒引起的,除病毒编码蛋白外,大量证据表明,由致瘤病毒诱导宿主转录的非编码 RNA（non-coding RNA, ncRNA）也是促进肿瘤产生的重要辅佐因子。在早期,由于ncRNA不能编码蛋白质,因而被研究者认为是无用的RNA,但随着科学技术的发展,人们逐渐了解其在多种生物学过程中的重要性。肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）在原发性肝癌中的占比大,其患者死亡率在所有癌症中排名第三,常见于亚洲、非洲和欧洲南部,乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）的慢性持续性感染是其主要产生原因。大于200个核苷酸识别的ncRNA被称为长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA）。目前人们对lncRNA在HBV相关HCC中的机制仍不清楚,但越来越多的证据表明lncRNA在HBV相关HCC过程中发挥了关键性作用,使得lncRNA成为HCC治疗的关键要素。本文主要就HBV感染导致的HCC与lncRNA之间的关系作一综述。     

阿是止泻胶囊对甲状腺功能亢进性腹泻大鼠胃窦、结肠黏膜肥大细胞的影响

目的探讨阿是止泻胶囊对甲状腺功能亢进（简称甲亢）性腹泻大鼠胃窦、结肠黏膜肥大细胞（MC）的影响。方法制备甲亢性腹泻大鼠模型。运用阿是止泻胶囊低、中、高剂量及黄连素对其干预．采用免疫组化技术测定对照组、模型组、黄连素组、阿是止泻胶囊低、中、高剂量组大鼠胃窦、结肠黏膜MC数量、面积、周长、等效直径及圆形度：结果①与对照组比较，模型组胃窦黏膜ME数目（P=0．003）、脱颗粒比率（P=0．029）、面积（P=0．000）、周长（P=0．000）、等效直径（P：0．000）增大，网形度变小（P=0．000）、：②与模型组比较，黄连素组、高剂量组胃窦黏膜MC数目（P=0．003，P=0．003）、面积（P=0．000，P=0．000）、周长（P=0．000，P=0．000）、等效直径（P=0．000，P：0．000）变小，圆形度增大（P=0．000，P=0．000）。③胃窦黏膜各组间MC数目（F=3．462，P=0．014）、面积（F=37．632，P=0．000）、周长（F=47．993，P=0．000）、等效直径（F=60．970，P=0．000）、圆形度（F=15．642，P=0．000）比较，差异均有统计学意义。④结肠黏膜各组间MC数目差异无统计学意义（F=0．82，P=0．546）。结论阿是止泻胶囊能显著降低胃窦黏膜MC数目，可能是其治疗甲亢性腹泻的机制。     

全人单克隆抗核抗体的制备和鉴定

目的 本研究旨在从系统性红斑狼疮(systemmic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞中获得自身抗体,并从中鉴定筛选出抗核抗体.方法 利用人B细胞杂交瘤技术制备SLE患者来源的全人单克隆自身抗体,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbenk assay,ELISA)方法测定阳性杂交瘤细胞上清抗体浓度,并以HEp-2细胞为底物,采用间接免疫荧光法鉴定筛选出抗核抗体.结果 共获得48株稳定分泌IgG型全人单克隆自身抗体的杂交瘤细胞株,其中12种细胞上清抗体浓度大于1 500 ng/mL,占25％,通过免疫荧光鉴定从中筛选出3种抗核抗体,荧光核型分别为周边型、斑点型和核仁型.结论 全人单克隆自身抗体的制备及抗核抗体的筛选鉴定,为开发新型单克隆抗体药物以及研究SLE的致病机制奠定了良好的实验基础.     

博尔纳病病毒p40基因重组质粒的构建及鉴定

目的 构建博尔纳病病毒p40基因重组表达质粒.方法 通过PCR方法扩增获得博尔纳病病毒p40基因的完整序列,将此片段定向克隆到pEGFP-N1载体多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用PCR方法和核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性.结果 成功构建博尔纳病病毒p40基因重组表达质粒.结论 本文构建的重组质粒将为研究博尔纳病病毒p40基因在真核细胞中的功能和作用提供实验依据.     

SLE患者血清中病原体相关噬菌体7肽的检测

目的用噬菌体7肽库筛选系统性红斑狼疮（SLE）患者血清特异性抗体,测序分析其实际意义。方法先用30例正常人混合血清与噬菌体7肽库反应,未与正常人白清结合的7肽再与30例SLE患者混合血清结合,获得SLE血清特异性结合的噬菌体克隆。用患者混合血清进行Dot—ELISA实验鉴定获得的噬菌体克隆,进一步用SLE患者及正常人血清各12例筛选阳性噬菌体的混合克隆,确定阳性噬菌体克隆与个体血清之间的结合情况,并对最终鉴定的噬菌体克隆进行测序与比对分析。结果混合的阳性噬菌体克隆与SLE患者个体血清反应阳性率明显高于其与正常人血清的反应率;序列分析显示阳性噬菌体克隆的抗原表位与杆菌、球菌、弧菌等微生物有同源性,与裂殖酵母属、链球菌属、立克次（氏）体属等有100％同源性,与人类抗原表位无关。结论SLE患者血清中存在与病原体抗原表位结合的抗体成分,提示SLE可能与病原体感染有关。     

噬菌体7肽文库筛查类风湿关节炎相关抗体及分析

目的筛选和鉴定与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义。方法采用30例正常人混合血清和30例RA患者混合血清作为筛选配基对噬菌体随机7肽库进行亲和筛选、扩增,获得RA血清特异性结合的噬菌体克隆。用患者混合血清进行Dot-ELISA实验鉴定获得的噬菌体克隆,进一步用RA患者及正常人血清各12例筛选阳性噬菌体的混合克隆。对鉴定的噬菌体克隆进行测序,并分析其同源性。结果获得17个与RA患者混合血清特异性结合的阳性克隆。阳性噬菌体混合克隆与RA患者个体血清反应阳性率明显高于其与正常人血清的反应率。序列分析显示阳性噬菌体克隆的抗原表位之间无共有序列,但与杆菌、球菌等有一定的同源性。结论 RA患者血清中存在与病原体抗原表位结合的抗体成分,提示RA的发病可能与病原体感染有关。