基于网络药理学和实验验证探讨香菇多糖抑制三阴乳腺癌的作用机制

目的 基于网络药理学研究香菇多糖抑制三阴乳腺癌（TNBC）的作用机制并采用细胞和动物实验进行验证。方法 通过GeneCards数据库和DisGeNET数据库筛选与TNBC相关基因靶点，利用TCMID、PubChem、SwissTargetPrediction和GeneCards数据库查询香菇多糖相关基因靶点。使用Sangerbox软件进行基因本体论（GO）富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结合STRING数据库与Cytoscape 3.7.0软件将共同靶点进行可视化处理，筛选核心靶点，构建"化合物-靶点-通路"网络。利用Metascape软件进行转录因子及相关调控基因特异富集。体外培养小鼠TNBC细胞4T1和人TNBC细胞MDA-MB-231，磺酰罗丹明B染色法观察香菇多糖（31.25、62.5、125、250、500、1 000μg·mL^-1）对细胞存活率的影响；健康雌性BABLC小鼠sc接种1×10⁶个4T1-Luc细胞构建TNBC模型，通过小动物活体成像系统观察香菇多糖（100、200 mg·kg^-1）对肿瘤生长的影响，实时荧光定量PCR （qRT-PCR）技术检测肿瘤组织信号转导和转录活化因子3（STAT3）和血管内皮生长因子A （VEGFA） mRNA表达。结果 数据库及软件分析得到香菇多糖治疗TNBC关键靶点52个，靶点主要涉及PI3K-Akt、AGE-RAGE、HIF-1、MAPK信号通路和肿瘤蛋白多糖相关通路，PPI分析得到VEGFA、STAT3、MAPK1、IL2、TNF、RELA、AKT1、MAPK3、BCL2L1和HSP90AA1 10个hub基因。与对照组比较，香菇多糖对4T1和MDA-MB-231细胞存活率均有显著抑制作用（P<0.05、0.01），且作用呈浓度相关性；在给药14、21d后，与模型组比较，香菇多糖能够剂量相关性地抑制小鼠TNBC肿瘤的生长，高剂量组差异显著（P<0.05、0.01），21 d抑制率达到（91.9±4.7）%；与对照组比较，香菇多糖给药后能够剂量相关性抑制STAT3和VEGFA的mRNA表达，高剂量组差异显著（P<0.05、0.01）。结论 香菇多糖可通过多靶点、多途径协同作用抑制TNBC的生长。     

双环己铜草酰二腙诱导的脱髓鞘小鼠造模方法的改进

目的 改进双环己铜草酰二腙（cuprizone,CPZ）诱导脱髓鞘小鼠模型的制备方法,为治疗脱髓鞘疾病提供更精准快速的动物模型。方法 取60只18~20 g的C57BL/6小鼠,分成空白对照组,CPZ灌胃组（共4组,300 mg·kg^-1,qd,bid,tid,qid）,CPZ饲喂组（即传统模型组）,每组10只。空白对照组及CPZ灌胃组给予正常饲料,CPZ饲喂组给予0.2% CPZ混合鼠饲料连续饲喂6周构建小鼠脱髓鞘模型,通过免疫组化和髓鞘染色技术LFB检测髓鞘脱失情况,并比较CPZ灌胃模型和传统模型诱导小鼠急性髓鞘脱失的差异。结果 作用3周后,4组CPZ灌胃组的小鼠脑胼胝体区髓鞘碱性蛋白MBP染色与对照组相比均明显减少,而传统模型中小鼠脑胼胝体区MBP在第3周并未显著改变,在第6周明显减少。LFB染色结果表明CPZ灌胃3周后小鼠脑胼胝体区染色显著减少。结论 改进后的模型（小鼠CPZ灌胃模型）小鼠在第3周即能出现脱髓鞘现象,能有效缩短时间,具有显著优越性,且CPZ剂量可控,保证模型的精准性。     

人干扰素α2b ELISA配体结合分析检测方法的建立

目的：建立金黄地鼠血浆和组织重组人干扰素α2b定量ELISA检测法,用于药物研发检测。方法：采用双抗夹心法建立金黄地鼠血浆和组织重组人干扰素α2b含量检测方法,确定其检测范围,验证其选择性、精密度与准确度和稀释线性,并对样本稳定性进行研究。结果：建立的方法检测范围为0.50～16.00 ng/ml。选择性结果显示不同个体来源空白金黄地鼠组血浆和组织匀浆无差异,血浆质控样本准确度为78.62%～104.69%,批内精密度为0.69%～18.21%,批间精密度为6.71%～15.81%,总误差均<30%,稀释线性良好。稳定性样本在3种不同保存条件（冰上放置2 h;-80～-75℃放置4 d;反复冻融3循环）下稳定性较好,回收率均在±20%内。结论：成功建立了基于配体结合的人干扰素α2b ELISA检测法,该方法灵敏度高,重复性好,检测效率高,为新药研发提供了可靠的检测方法。     

二氢叶酸还原酶抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展

二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase,DHFR）是合成DNA的必需前体物胸腺嘧啶脱氧核苷（dTMP）的关键酶,在细胞增殖中起重要作用,是肿瘤治疗的重要靶点。抑制DHFR能够抑制dTMP的生物合成,进而抑制肿瘤细胞的生长或增殖,在临床上显示抗肿瘤的作用。近年来,该类药物的神经毒性极大限制了其临床广泛应用。基于此,本文对DHFR抑制剂药物在肿瘤治疗中的应用进行综述,并介绍药物相应的神经毒副作用（药物剂量限制性不良反应）,探讨DHFR抑制剂药物在肿瘤治疗中的发展现状及为临床合理用药减少神经毒性反应提供指导。     

代入式教学在医药文献阅读与写作课程中的应用

多年的教学实践表明,传统授课法对学生深度掌握药理医药文献阅读与写作精髓的作用有限,而实践性更强的代入式教学法则效果明显。文章分析药理医药文献阅读与写作课程教学现状,对代入式教学的具体内容实施意义、实践成效等方面展开讨论,希望代入式教学模式能够更好地应用于药理医药文献阅读与写作课程,培养综合发展的药学人才。     

以“能力与责任意识培养”为导向的药事管理学教学改革实践

目的 探索以“能力与责任意识培养”为导向的药事管理学教学改革。方法 采用案例教学法、主题探究讨论等多种方式丰富课堂教学形式,将课程思政建设有机融入到课堂教学中,提升药事管理学课堂教学的生动性、实用性和引领性,将教学目标与育人目标有机结合,锻炼学生分析理解药学事件的能力,培养学生对中国药学事业发展的责任感和担当。结果与结论 通过教学改革实践,将药事管理学的知识目标、能力目标与价值观目标相互融合,同时实现教学目标与育人目标。本教学改革实践得到了学生的认可,取得了较好的改革实践效果。     

新型AKT抑制剂Hu7691对胃癌细胞的抗肿瘤活性及机制研究

目的 考察新型AKT抑制剂Hu7691对胃癌细胞的体内外抗肿瘤活性及作用机制。方法 以人胃癌细胞HGC27和BGC823为体外细胞模型,采用SRB法评价不同浓度的Hu7691对胃癌细胞的体外增殖抑制作用;以流式细胞术考察Hu7691对HGC27细胞周期的影响,采用Western blotting考察Hu7691作用后,细胞内相关蛋白的表达变化;采用HGC27裸小鼠移植瘤模型评价Hu7691的体内抗肿瘤活性。结果 Hu7691在HGC27和BGC823细胞模型上能显著抑制肿瘤细胞增殖;引起肿瘤细胞发生细胞周期阻滞,浓度依赖性地下调AKT通路相关蛋白p-PRAS40（T246）、p-GSK3β、p-S6（S235/236）、p-4EBP1（T37/46）及p-4EBP1（S65）的蛋白表达,上调p-AKT （S473）、p-AKT （S308）的表达;下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达;在HGC27裸小鼠移植瘤模型中,Hu7691能显著抑制肿瘤生长,并且对小鼠体质量无显著影响。结论 新型AKT抑制剂Hu7691通过诱导细胞周期阻滞,发挥对胃癌细胞体内外显著的抗肿瘤活性。     

新橙皮苷对大鼠胚胎-胎仔发育的毒性研究

目的 评价新橙皮苷对大鼠胚胎-胎仔发育的毒性。方法 妊娠大鼠根据妊娠第0天（gestation day 0,GD0）和体质量采用分层随机法分成5组：对照（0.5%羧甲基纤维素钠）组,环磷酰胺（12 mg·kg^-1）组,新橙皮苷低、中、高（0.45,0.9,1.8 g·kg^-1）3个剂量组。妊娠鼠于GD6开始给药至GD15。实验期间,每周至少测定2次体质量和1次摄食量。GD20处死妊娠鼠,对黄体、着床腺、胎仔、胎盘等情况进行检查。结果 试验期间,各组动物临床症状观察均未见明显异常。与对照组相比,新橙皮苷各剂量组动物体质量未见明显改变,环磷酰胺组动物增重减缓;新橙皮苷各剂量组黄体、着床、活胎、吸收胎、死胎计数均未见明显改变,环磷酰胺组子宫重量下降;新橙皮苷高剂量组胎仔身长降低,环磷酰胺组身长、尾长、重量及胎盘重均降低;新橙皮苷各剂量组胎仔外观检查未见给药相关改变,环磷酰胺组主要可见全身浮肿、头、耳、面、肢、指趾等改变。胎仔内脏检查中,新橙皮苷各剂量组分别可见1例脑室改变,中、高剂量组分别可见2例和1例食管扩张;环磷酰胺组可见腭、脑室、食管、睾丸附睾等改变。骨骼检查中,新橙皮苷可延缓顶骨、胸骨的骨化,可能影响下颌骨、颈椎、腰椎、耻骨、枕骨和肋骨的骨化。环磷酰胺12 mg·kg^-1对颅骨、脊椎骨、肋骨、胸骨、掌骨等的骨化均有所影响。结论 新橙皮苷给药后,对母体未产生明显毒性反应,未观察到临床不良反应的剂量水平（NOAEL）为1.8 g·kg^-1;对胚胎-胎仔的发育毒性主要表现为延缓骨骼如顶骨、胸骨等的骨化外,还可能影响脑部和食管的发育,NOAEL<0.45 g·kg^-1。     

以能力与素养为目标的创新联动药学研究生课程体系

“健康中国”是重要的国家战略,亟须汇聚大量药学创新人才,对国内高校在相关专业的研究生培养方面提出了更高的要求。基于此,浙江大学药学院搭建融通交叉药学各学科的联动课程体系,从课程群顶层设计、教学手段、课程设置、建设成效等多个方面展开探讨,探索进一步提升药学研究生创新能力和专业素养的教育模式新思路和新方法。     

吡哆醇缓解顺铂诱导急性肾毒性的作用及机制

目的 探究吡哆醇是否能够缓解顺铂诱导的急性肾损伤并分析其具体作用机制。方法 建立顺铂诱导的HK-2细胞损伤的体外模型后,给予不同浓度的吡哆醇,利用SRB检测细胞存活率,Western blotting检测细胞凋亡和抗氧化蛋白表达,试剂盒检测活性氧分子(reactive oxygen species,ROS)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量。进一步建立顺铂诱导的体内肾损伤小鼠模型,给予40 mg·kg–1吡哆醇治疗后检测血清尿素氮水平,分析肾组织的苏木素-伊红染色结果,通过Western blotting检测NRF2的表达。结果 吡哆醇在HK-2细胞和小鼠体内均具有保护顺铂诱导的急性肾损伤的作用,在HK-2细胞中吡哆醇下调了ROS水平、上调了SOD酶活力、促进了NRF2及其下游抗氧化相关基因HO-1的表达;在肾损伤小鼠体内,吡哆醇显著降低血清尿素氮水平、修复肾脏组织损伤、上调NRF2表达。结论 吡哆醇通过抗氧化应激作用保护了顺铂诱导的急性肾损伤。