利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R在大肠埃希菌中的表达与优化

目的 建立利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R基因工程表达体系,为推进利拉鲁肽生物类似药的产业化开发奠定基础.方法 优化密码子并通过重叠PCR扩增获得GLP-1(7-37)K34R编码基因(glp1a),构建glp1a与GST、Ub、SUMO 3种标签蛋白在大肠埃希菌中融合表达,分别从诱导时机、诱导温度、诱导时...     

人肽脱甲酰基酶基因pdf与肿瘤细胞生长的相关性

目的:研究人肽脱甲酰基酶(HsPDF)基因pdf在不同肿瘤细胞系中的表达情况并探讨该基因与肿瘤细胞生长的相关性。方法:体外培养肿瘤细胞,采用半定量RT-PCR方法检测不同肿瘤细胞系中pdfmRNA的水平;用HsPDF抑制剂Actinonin处理细胞并通过细胞形态学、MTT法、RT-PCR及凝胶电泳等技术检测pdf基因与肿瘤细胞生长的相关性。结果:RT-PCR结果表明,该基因在13种不同来源的人肿瘤细胞系和正常组织中的表达具有显著差异。其中,在Hela、MDA-MB-231、K562等肿瘤细胞系中高表达,而在人正常肺组织中低表达(P<0.001)。体外试验显示,Actinonin可显著地抑制肿瘤细胞的生长,使细胞中pdf基因表达量相应的下降,且呈明显的浓度依赖性;同时,光镜观察结果显示Actinonin对肿瘤细胞有诱导凋亡的作用。结论:pdf是一种广泛分布于不同组织的基因,它与肿瘤细胞的生长增殖间存在着显著的相关性。     

CAR-T制备工艺中PD-1表达的动力学研究

目的 研究嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)制备工艺中抗CD3/CD28磁珠和慢病毒对T细胞中程序性死亡因子1(PD-1)蛋白表达的影响,为改善其体内抗肿瘤活性研究提供理论依据.方法 筛选高表达PD-1细胞系,添加CAR-T制备工艺中抗CD3/CD28磁珠和慢病毒(CAR-GFP、CAR-CD19、CAR-CD30),流...     

尤曼桉叶总黄酮的测定方法和品质鉴别研究

目的研究尤曼桉叶总黄酮的测定方法和品质鉴别方法。方法用紫外分光光度法、三氯化铝比色法、硝酸铝比色法对四川引种的尤曼桉叶总黄酮进行测定并和高效液相色谱法测定结果进行比较。结果引种的尤曼桉存在叶片甲醇提取液A259/A364≈1.71和A259/A364≈2.34的两种品质不同的植株,经液相色谱分析其芦丁含量和化学成分有明显区别。A259/A364≈1.71的植株4种方法测定结果差异不大,而A259/A364≈2.34的植株硝酸铝比色法的测定结果分别高出高效液相色谱法和三氯化铝法46.4%,39.9%。结论A259/A364≈2.34植株可能含有干扰硝酸铝比色法的成分。三氯化铝比色法测定尤曼桉叶总黄酮优于紫外分光光度法和硝酸铝法;采用热水提取、紫外分光法和高效液相色谱能很容易地将两类植株的叶片鉴别。     

药物制剂工程课堂教学体会

药物制剂工程是药剂学和工程学交叉之后产生的一门新兴学科。根据该课程内容特点,对在课堂教学过程中应采用的适宜教学方法和教学手段进行阐述和讨论。     

制药工程专业建设和发展的总结

从历史沿革、学科支撑、课程设置、人才培养方案和实践教学体系等方面总结天津科技大学生物工程学院在制药工程专业建设中彰显生物制药特色、突出创新和实践能力培养的情况。提出专业建设发展中要紧密结合区域产业、不断优化和完善课程体系、加强实践和创新能力训练、构建科学的教学管理体系的研究思路,为今后制药工程专业的发展奠定良好基础。     

人SMYD3基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

构建人SMYD3基因原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。通过PCR方法从重组质粒pcD-NA-SMYD3中扩增得到SMYD3基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体。将重组质粒转化入E.coli Rosetta(DE3)中,以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定。酶切鉴定和测序结果证明成功构建了重组表达载体pGEX-SMYD3。SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明人SMYD3基因在大肠杆菌中获得了良好的表达。实验成功地构建了SMYD3基因原核表达载体并在大肠杆菌中获得良好表达,为进一步研究SMYD3蛋白功能奠定了基础。     

抗菌肽研究进展

文章归纳并讨论了抗菌肽的来源及分类、作用及其分子机制、应用领域、基因表达策略和应用前景等。     

人多药耐药基因1在CHO细胞中的表达及功能研究

目的:构建人多药耐药基因(MDR1)的真核表达载体,转染CHO细胞,研究MDR1基因在真核细胞中的表达及功能。方法:将MDR1全长基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),利用阳离子脂质体转染CHO细胞,RT-PCR检测MDR1转染阳性细胞,并用G418筛选稳定表达MDR1基因的细胞,通过测定细胞对Rh123的外排作用以及对阿霉素的耐受性确定MDR1基因在正常细胞中的功能。结果:酶切鉴定和测序结果证明构建的重组表达载体pcDNA-MDR1序列正确。RT-PCR分析以及荧光显微镜观察结果表明:该重组表达载体已在CHO细胞中有效转录并稳定表达。Rh123外排和MTT药敏实验结果显示:转染pcDNA-MDR1的CHO细胞对Rh123外排作用显著高于未转染的CHO细胞,并且转染后的CHO细胞对阿霉素的耐药性也有显著提高。结论:成功构建了稳定表达MDR1并具有多药耐药功能的细胞株,有望成为多药耐药性药物研究的细胞模型。     

共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19/CCL21的第4代anti-CD19 CAR-T细胞的开发与应用

目的初步探讨共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的anti-CD19 CAR-T细胞的功能特性及其在体外对人CD19⁺急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的杀伤效果,旨在优化CAR-T细胞各项功能,增强其对血液瘤、实体瘤的治疗效果。方法通过亚克隆技术获得重组慢病毒质粒,慢病毒包装,转导原代T细胞获得2种第4代anti-CD19CAR-T细胞,分别命名为7×19 CAR-T细胞、7×21 CAR-T细胞。借助流式细胞仪和相关试剂盒检测了细胞CAR分子的转导效率、CAR-T细胞的趋化能力、增殖及凋亡情况等;钙黄绿素释放法检测CAR-T细胞的杀伤作用;共培养法检测CAR-T细胞因子的释放情况;2种第4代anti-CD19 CAR-T细胞组皆于原代T细胞、常规anti-CD19 CAR-T细胞作比较。结果 7×19 CAR-T、7×21 CAR-T细胞的功能特性皆有显著提高,主要表现在细胞增殖速度加快、细胞凋亡速率明显变慢、炎症因子IFN-γ、肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量皆有所增加;且体外杀伤实验表明阳性率约40%的7×19 CAR-T、7×21 CAR-...