双酚A与苯并[α]芘联合作用对三种乳腺上皮细胞的DNA损伤效应

[目的]观察双酚A(BPA)与苯并[α]芘(BaP)联合作用对三种乳腺上皮细胞DNA损伤的影响. [方法]采用对DNA双链断裂标志pH2AX免疫荧光检测的方法,观察环境相关剂量水平(10-9,10-7 mol/L)BPA、10-9 mol/L17-β-雌二醇(雌激素对照)及其与10-6 mol/L BaP联合作用对人乳腺上皮细胞(HMEC)、人永生化乳腺上皮细胞MCF-10A(CRL-10317)和人乳腺上皮肿瘤细胞MCF-7三种乳腺上皮细胞的DNA损伤效应(以二甲基亚砜作为溶剂对照),并应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测三种细胞雌激素受体α和雌激素受体β的基因ESR1、ESR2mRNA水平的相对表达量.[结果] BPA对三种类型乳腺上皮细胞pH2AX阳性率均无明显影响.BaP可明显增加HMEC和MCF-7两种乳腺上皮细胞pH2AX阳性率:单独染毒时两种细胞pH2AX阳性率分别由(34.7±2.2)％和(3.1±0.3)％增至(63.6±1.2)％和(13.3±0.4)％;与10-7 mol/LBPA、10-9 mol/L 17-β-雌二醇分别联合作用可使MCF-7的pH2AX阳性率增至(15.1±0.2)％、(17.5±1.0)％,与单独染毒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).三种细胞内ESR1、ESR2基因表达有差异,其中ESRI基因表达差异明显,在MCF-7中的表达水平最高,为HMEC的1 080倍、MCF-10A的5222倍. [结论]BPA与BaP联合作用与BaP单独作用相比,可引起MCF-7的DNA双链断裂损伤加剧,该作用可能与雌激素受体表达水平相关.     

大豆异黄酮对未成年小鼠卵巢发育的影响

目的 研究大豆异黄酮(SIF)对未成年雌性小鼠卵巢发育的影响.方法 将21日龄雌性小鼠进行SIF灌胃染毒(0、50、100和200mg/kg·BW),连续染毒14 d,观察体重变化及阴道开放,染毒结束时称量小鼠卵巢,并对卵巢行病理学检查.结果 高剂量组卵巢/体重、阴道开放率、发育卵泡数目均＞对照组,可见闭锁卵泡、成熟...     

双酚A对小鼠胚胎干细胞分化潜能的影响

目的探讨双酚A(BPA)对胚胎干细胞(ESC)分化潜能的影响,为合理评价BPA的安全性提供实验基础。方法制备及培养的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和小鼠ESC,用BPA 0.1,1,10,100和1000μmol·L-1持续培养8 d,CCK-8法检测MEF和ESC细胞存活率并计算IC50;通过实时荧光定量PCR检测ESC中α肌球蛋白重链m RNA表达并计算其半数最大分化抑制浓度(ID50)。悬滴悬浮法培养的拟胚体,用BPA 0.001,0.01,0.1和1μmol·L-1持续培养10 d,实时荧光定量PCR检测拟胚体各胚层标志基因表达的变化。结果 BPA对小鼠ESC的IC50为5.22×10-4mol·L-1,对MEF的IC50为6.25×10-4mol·L-1,对小鼠ESC体外心肌细胞定向分化的ID50为7.0×10-7mol·L-1。BPA 0.001和0.01μmol·L-1可以上调拟胚体的中胚层标志基因胎肝激酶1和球蛋白转录因子1的表达。结论 BPA属于强胚胎毒性化合物。低浓度BPA对小鼠ESC分化为中胚层细胞有促进分化的作用。     

正己烷亚急性吸入染毒致大鼠肝肾毒性的机制

[背景]国内外正己烷的毒理学主要研究方向在神经系统毒性,对肝肾毒性研究较少.正己烷的主要代谢器官是肝脏,主要排泄器官是肾脏.正己烷暴露是否影响肝肾功能以及可能的机制,是值得探究的问题.[目的]观察正己烷亚急性吸入染毒致雌性大鼠的肝肾毒性,初步探讨其可能机制.[方法]将40只雌性SD大鼠随机分为4组,设1个对照组和3个染...     

大鼠卵巢镉暴露对ＤＮＡ 甲基转移酶表达的实验研究

摘要：目的　研究新出生卵巢组织体外镉暴露后,ＤＮＡ 甲基转移酶类（ＤＮＭＴｓ） 基因转录和蛋白表达的 情况,了解ＤＮＭＴｓ的变化在镉致卵巢毒性中的作用。方法　４ 日龄雌性ＳＤ 大鼠卵巢取出置于ＤＭＥＭ／ Ｆ１２与α ＭＥＭ 混合培养体系进行体外染毒,镉剂量分别为０、０．５、１０、５０μｍｏｌ／Ｌ,连续染毒４ｄ。分别 采用ＲｅａｌＴｉｍｅ ＰＣＲ 和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测ＤＮＭＴｓｍＲＮＡ 及其蛋白表达水平。应用单因素方差进行分 析比较,犘＜０．０５为差异有统计学意义。结果　各剂量组ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３α、ＤＮＭＴ３βｍＲＮＡ 与对照组 比较,差异均有统计学意义（犉＝１３．５７９、１２．９２６、１０．６２０,犘＝０．００９、０．０１２、０．０３１）,其中ＤＮＭＴｓ在 ０．５、１０μｍｏｌ／Ｌ 组表达上调,５０μｍｏｌ／Ｌ 组表达下调;各剂量组ＤＮＭＴ１蛋白表达与对照组比较,差异有 统计学意义（犉＝５６．３１１,犘＜０．０１）,其中在０．５μｍｏｌ／Ｌ 和５０μｍｏｌ／Ｌ 组降低,１０μｍｏｌ／Ｌ 组表达升高; ＤＮＭＴ３α蛋白表达在１０μｍｏｌ／Ｌ 组升高,５０μｍｏｌ／Ｌ 组降低, 与对照组比较差异有统计学意义（犉＝ ２８．５３３,犘＜０．０１）; 各剂量组ＤＮＭＴ３β 蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义（犉＝２．０４７,犘＝ ０．１８６）。结论　在本次实验条件下,镉暴露后卵巢组织ＤＮＭＴｓ表达发生改变,这可能参与镉致卵巢毒性 过程。 关键词：镉;ＤＮＡ 甲基转移酶;卵巢 中图分类号：Ｒ１１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１６）０６ ０４０１ ０４     

２，５ 己二酮抑制大鼠卵巢颗粒细胞干细胞因子的表达

摘要：目的　研究２,５ 己二酮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及干细胞因子（ＳＣＦ） 表达的影响。方法　２１ 日 龄清洁级雌性ＳＤ 大鼠１０只,提取卵巢颗粒细胞混合后,均匀接种到六孔板培养,设立１个对照组和３个 实验组,培养２４ｈ后分别加入浓度为０、２０、４０、６０ｍｍｏｌ／Ｌ 的２,５ 己二酮染毒２４ｈ,Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧 光染色计算细胞凋亡率,实时荧光定量ＰＣＲ 检测ＳＣＦ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ ２ 基因ｍＲＮＡ 相对表达量。结果　各染 毒剂量组卵巢颗粒细胞凋亡率增高,差异有统计学意义（犉＝２２１．２３,犘＜０．０５）。ＳＣＦ 基因ｍＲＮＡ 的相对 表达量在４０、６０ｍｍｏｌ／Ｌ 剂量组呈下降趋势,与对照组比较差异有统计学意义（犘＜０．０５）。Ｂｃｌ ２ 基因 ｍＲＮＡ 的相对表达量随染毒剂量增加呈下降趋势,各剂量组与对照组比较差异有统计学意义（犘＜０．０５）。 Ｂａｘ基因ｍＲＮＡ 的表达量和Ｂａｘ／Ｂｃｌ ２比值随着染毒剂量增加呈上升趋势,各剂量组与对照组相比差异有 统计学意义（犘＜０．０５）。结论　２,５ 己二酮染毒可致卵巢颗粒细胞凋亡率增高, 抑制ＳＣＦ 基因表达, ＳＣＦ／ｃ Ｋｉｔ信号通路可能参与此过程。 关键词：２,５ 己二酮;卵巢颗粒细胞;凋亡;干细胞因子;基因表达 中图分类号：Ｒ１１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１８）０４ ０２７２ ０４     

应用胚胎干细胞试验(EST)评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性

目的利用小鼠胚胎干细胞试验(EST)模型,初步评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性。方法采用悬滴悬浮法培养小鼠胚胎干细胞(m ESCs),观察受试物对m ESCs分化能力的影响,结合CCK-8法判断受试物对m ESCs及小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的细胞毒性结果,预测受试物的胚胎毒性。用已知强胚胎毒性化合物5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、无胚胎毒性化合物青霉素-G(P-G)对模型进行有效性验证,并将经过验证的EST模型用于评价受试物DEHP的胚胎毒性。结果利用建立的EST模型对5-FU、P-G胚胎毒性进行评价,结果表明5-FU为强胚胎毒性,P-G为无胚胎毒性,与文献报道一致;DEHP对m ESCs和3T3的半数抑制浓度分别为IC50m ESCs=315μmol/L(126μg/ml),IC503T3=307μmol/L(122.8μg/ml),m ESCs的半数抑制分化浓度为ID50m ESCs=323μmol/L(129.2μg/ml),经EST模型判断公式计算得出该化合物为弱胚胎毒性化合物。结论建立的EST模型的有效性验证结果与ECVAM的结论一致,可用于胚胎毒性的筛选和评价;经EST模型评价DEHP的胚胎毒性为弱胚胎毒性。