Graves病相关的易感基因的研究进展

自身免疫性甲状腺病（autoimune thyroid disease,AITD）属器官特异性自身免疫病，主要包括Graves病（Graves disease，GD）和桥本甲状腺炎（Hashimoto＇s thyroiditis,HT）。GD表现为与免疫功能紊乱有关的伴有弥漫性甲状腺肿的甲状腺机能亢进。在全世界范围内，GD的发病率接近0．5％。是最为常见的一种自身免性疾病。在GD患者中，男女比例为1：9。GD病人体内存在着多种针对甲状腺抗原的自身抗体，如促甲状腺激素受体抗体（TSH receptor antibodies,，TRAb）、甲状腺过氧化物酶抗体（thyriod peroxidase antibodies,TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（thyroglobulin antibodies,TGAb）和抗钠／碘同向转运体（Na＋／I—symporter，NIS）等。     

重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体

背景与目的:构建UGRP1基因启动子的定点突变表达载体.材料与方法:以插入UGRP1基因正常启动子的质粒pGL3-UGRP1(-112G)为模板,用重叠延伸PCR定点诱变技术,对-112位点的碱基进行定点突变,并构建定点突变表达载体.结果:DNA测序表明,UGRP1基因启动子-112处的碱基已由G突变为A,成功实现定点诱变.结论:重叠延伸PCR定点诱变技术高效、简便.pGL3-UGRP(-112A)的成功构建,为进一步研究-112G/A多态性对该基因转录活性的影响奠定了基础.     

婴幼儿自身免疫性中性粒细胞减少症

要幼儿自身免疫性中性粒细胞减少症(ANI)是一种良性疾病。近来由于确定该病可靠的检测粒细胞抗体的技术更加有效,该病的发现也不断增加。在1986年。Lalezar 等报告在121例 ANI 中,有119例抗粒细胞抗体为阳性。一些学者认为从临床和血清学两方面看,以前所说的慢性良性粒细胞减少症可能相当于 ANI。从1986年1月到1991年2月,作者在苏格兰的 Lothian 地区,调查了96000名0～10岁的儿童,     

肝酶和透明质酸变化作为供肝缺血/再灌注损伤的敏感指标研究

为了探讨肝移植术中,患者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸脱氢酶(GLD)和透明质酸(hyaluronic acid, HA)的变化规律及此变化与供肝缺血保存/再灌注损伤的关系,对20例行原位肝移植术的病人进行手术期ALT、AST、GLD、HA的连续监测,即从门静脉阻断至术毕每半小时一次连续测定ALT、AST、GLD、HA的浓度.其中8例供肝植入前常规进行组织病理学检查提示供肝植入前病理有轻度器官保存性损伤.血清HA在门静脉阻断后呈明显的上升,无肝期结束前达最高峰(945±455μg/L),当供肝血流开放后,立即逐步下降;受体血清肝酶(ALT、AST、GLD)浓度在无肝期结束前都无明显的变化,直至供肝植入血流开放后出现明显上升.血清HA的水平与肝酶的水平呈负相关.肝移植术中,在供肝植入后,患者血清肝酶的上升反映了供肝细胞的缺血/再灌注损伤程度,而HA下降的变化反映了供肝窦状内皮细胞冷缺血/再灌注损伤的程度.     

EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定

目的：构建EB病毒基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达。分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法：采用基因工程技术，以B95—8细胞（美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系）培养上清为模板，用PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片段。PCR产物经Hind Ⅲ和XhoⅠ双酶切，插入原核表达载体pGEX-5T中，构建pGEX5T-85N重组表达质粒，并在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白用Westernblot鉴定，并免疫BALB／c小鼠。结果：序列分析表明，插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致。重组表达的蛋白的相对分子质量（Mr）约为45000，同预期的大小相符。以纯化的可溶性重组蛋白免疫BALB／c小鼠，经ELISA检测获得了高效价的抗血清，且抗gp85单克隆抗体（mAb）可识别所表达的gp85N抗原。Westernblot显示，该抗原可与小鼠免疫血清起特异性反应。结论：表达并纯化的EB病毒截短的gp85N重组蛋白具有良好的抗原性，为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供了条件。     

斑马鱼:一种造血系统的遗传学研究模型动物

斑马鱼是研究脊椎动物器官发育和人类疾病的重要遗传学模型动物之一。它具有独特的生理特征:如体积小、生殖周期短、生殖能力强、体外受精且胚胎发育透明等特点,适宜于作大规模的突变筛选。斑马鱼已成为造血系统研究的重要的模式生物体。     

纤维蛋白原的生物化学及检测方法进展

纤维蛋白原(Fib)与消耗性凝血病、心血管疾病、糖尿病及恶性肿瘤等密切相关;Fib的遗传变异所致的出血或血栓性疾病及反复自发流产也屡见报道,Fib测定在临床上越来越受到重视.本文就纤维蛋白原的生物化学特性、遗传性缺陷及检测方法进展作一简要综述.     

病毒白细胞介素-10的基因克隆与原核表达

目的:构建病毒白细胞介素IL-10(vIL-10)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒BCRF1基因。PCR产物经EcoRI和XhoI双酶切后,克隆至原核表达载体pET-28a中,以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下表达目的蛋白。结果:以终浓度为100μmol/L的IPTG于30℃诱导6h后,重组菌可高效表达相对分子质量(Mr)约为24000的His-vIL-10融合蛋白。结论:成功地克隆vIL-10的编码基因并在大肠杆菌中高效表达,为制备抗vIL-10单克隆抗体(mAb)、分析vIL-10结构与功能的关系提供了条件。