氨茶碱调节大鼠支气管平滑肌L型钙通道的活动性

目的 探讨氨茶碱对大鼠支气管平滑肌细胞L型钙通道(L-L_(Ca))的作用。方法 将20只大鼠随机分为2组,A组为正常对照组(n=10),B组为氨茶碱组(n=10),观测大鼠支气管平滑肌细胞L-L_(Ca)在正常时及给予氨茶碱治疗后的变化。结果 氨茶碱治疗后大鼠的L-L_(Ca)与正常对照组大鼠通道开放概率相比差异有显著性(P<0.05)。氨茶碱组通道开放时间常数(τ_(O1)和τ_(O2))不变,关闭时间常数(T_(c1)和T_(c2))延长,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)。大鼠L-钙通道的活动经氨茶碱治疗后活动减弱,表现为通道开放时间常数不变,关闭时间常数延长。结论 氨茶碱通过缩短L-L_(Ca)的开放时间来抑制支气管平滑肌细胞的收缩,可显著抑制大鼠L-L_(Ca)的活动,促进大鼠支气管平滑肌细胞的舒张。     

左氧氟沙星联合万古霉素缩小金黄色葡萄球菌耐药突变选择窗的初步研究

目的:在体外初步探讨联合用药可缩小单药对细菌的耐药突变选择窗(MSW),为临床合理使用现有抗菌药物,防止细菌耐药产生提供理论依据。方法:应用肉汤法富集1010CFU/mL细菌,琼脂平板二倍稀释法测定左氧氟沙星、万古霉素单药和两药联用对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最低药物浓度(MPC)和MSW。结果:左氧氟沙星、万古霉素单药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MSW分别为16和64。万古霉素和左氧氟沙星联合用药(1MIC 8MIC,2MIC 4MIC)使左氧氟沙星单药对ATCC29213的MSW缩小2～4倍。左氧氟沙星联合万古霉素用药(1MIC 16MIC,2MIC 8MIC)使万古霉素对ATCC29213的MSW缩小4～8倍。结论:万古霉素和左氧氟沙星联合用药可缩小各自单药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MSW。     

几种抗菌药物在不同浓度时对金黄色葡萄球菌耐药突变株选择的影响

目的：了解左氧氟沙星、万古霉素、利福平、氯霉素、妥布霉素、阿齐霉素在不同浓度时对金黄色葡萄球菌ATCC29213耐药突变株选择的影响。将它们对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）、防耐药变异浓度（MPC）、突变选择窗（MSW）与药代动力学参数结合，为制定新的抗菌药物用药策略提供依据：方法：应用肉汤富集细菌法测定左氧氟沙星、万古霉素、利福平、氯霉素、妥布霉素、阿齐霉素对金黄色葡萄球菌ATCC29213的防MPC；琼脂平板二倍稀释法测定MIC；将金黄色葡萄球菌ATCC29213接种于不同药物浓度的琼脂平板上，计数平板上恢复生长的菌落数，描记细菌恢复生长曲线。结果：左氧氟沙星、万古霉素、利福平、阿奇霉素、氯霉素和妥布霉素对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC分别为0．125、1．0、0．002、0．5、3．0、0．5μg／mL；MPC分别为1．4、51．2、〉1024、4．8、16、16μg／mL；6种抗菌药物-金黄色葡萄球菌ATCC29213组合的MSW差异很大，以利福平的MSW最宽（SI：〉512000），氯霉素的MSW最窄（SI：5．3）：不同抗菌药物-金黄色葡萄球菌的菌落恢复生长曲线各不相同。结论：药物浓度对金黄色葡萄球菌恢复生长的耐药突变株菌落数有明显影响。在临床上，可以通过将MPC结合药代动力学参数，来选择药物浓度和用药方式，从而达到减少细菌耐药的目的：     

氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌及其耐药突变体的耐药性研究

目的:研究5种氟喹诺酮类药物(FQ)对金黄色葡萄球菌ATCC29213及其同源耐药突变体的最低抑菌浓度(MIC)、防细菌耐药突变体选择浓度(MPC)和突变选择窗(MSW),比较其防耐药变异能力,了解细菌对FQ耐药的发生发展过程。方法:肉汤法富集1010CFU.ml-1金黄色葡萄球菌ATCC29213,采用平板稀释法测定莫西沙星、加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌ATCC29213及筛选的耐药突变体的MIC、暂定MPC(MPCpr)和MPC。结果:莫西沙星、加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC分别为0.2、0.3、0.3、1.4、3.2μg.ml-1。选择指数(MPC/MIC)分别为6.5、4.8、9.7、11.2、12.8。5种氟喹诺酮类药物筛选的第一步突变体对筛选药物的MIC较ATCC29213升高2~8倍。左氧氟沙星筛选的第二步突变体的MIC较第一步突变体又升高8~16倍。所有突变体的MSW边界都较其源菌株明显升高。结论:莫西沙星、加替沙星限制金黄色葡萄球菌耐药突变菌体选择的能力强于司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星。金黄色葡萄球菌对FQ药物产生耐药是逐步发生的。第一步耐药突变体的产生,使筛选出下一步耐药突变体的几率明显增大,从而导致耐药菌的富集和扩散。     

溴化异丙托品对哮喘豚鼠气管平滑肌细胞钾通道的作用

 目的研究异丙托溴铵和沙丁胺醇对哮喘豚鼠气管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道［large conductance calcium activated potassium (BK_Ca) channel］的作用。方法建立哮喘豚鼠模型。急性分离单个的豚鼠气管平滑肌细胞，以膜片钳技术的内面向外式记录单通道电流。结果哮喘组豚鼠通道开放概率(P0)降低，和对照组相比差异有显著性(P＜0.01)。哮喘组通道开放时间常数(τ₀₁和τ₀₂)缩短，关闭时间常数(τ_c1和τ_c2)延长，与对照组相比差异有显著性(P＜0.01)。异丙托溴铵或沙丁胺醇对哮喘BK_Ca通道的增强作用主要表现为延长通道开放时间常数，缩短关闭时间常数。τ₀₁，τ₀₂，τ_c1和τ_c2与哮喘组相比差异有显著性(P＜0.01)。结论哮喘豚鼠BK_Ca通道的活动显著降低。BK_Ca通道活动的减弱表现为，通道开放时间常数缩短，关闭时间常数延长。异丙托溴铵与沙丁胺醇可逆转哮喘对BK_Ca通道的作用，提示它们对哮喘支气管平滑肌的舒张作用可能部分是通过激活BK_Ca通道而实现的。     

乙酰胆碱对平滑肌细胞离子通道的作用及其信号转导机制

乙酰胆碱作用于气管平滑肌细胞上的毒蕈碱受体引起离子通道的改变,通过第二信使的调节引起生理作用。本文总结了近几年来有关Ach对AMSC的K+、Ca2+、Cl-通道的作用,以及第二信使的调节过程。     

异丙托溴铵对慢性缺氧大鼠气管平滑肌细胞钙激活钾通道的作用

目的　研究异丙托溴铵 (商品名 :溴化异丙托品 )对慢性缺氧大鼠气管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道 (BKCa)的作用。方法　 60只大鼠随机建立慢性大鼠缺氧模型组和正常组。急性分离单个大鼠气管平滑肌细胞。以膜片钳技术的内面向外式记录单通道电流。结果　 (1 )采用内面向外式记录电流 ,慢性缺氧组通道开放概率 (P0 ,0 1 7± 0 0 7)与正常对照组 (0 35± 0 1 0 )比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1 )。正常对照组快开放时间 (τO1 )为 (1 49± 0 41 )ms ,慢性缺氧组为 (0 53± 0 2 3)ms,正常对照组慢开放时间 (τO2 )为 (1 1 9± 3 2 )ms,慢性缺氧组为 (3 8± 1 4)ms,正常对照组快关闭时间(τc1 )为 (2 7± 0 9)ms,慢性缺氧组为 (5 7± 1 5)ms;正常对照组慢关闭时间 (τc2 )为 (1 2 1± 2 3)ms,慢性缺氧组为 (1 9 4± 2 9)ms ,两组快、慢、开、关闭时间比较差异有显著性 (P <0 0 1 )。异丙托溴铵与沙丁胺醇可逆转慢性缺氧对BKCa通道的抑制作用。通道的P0 慢性缺氧组为 0 1 5± 0 0 4、对照组为0 2 8± 0 0 9、沙丁胺醇组为 0 30± 0 0 8,三组间P0 比较差异有显著性 (P <0 0 1 )。慢性缺氧组τO1 、τO2 、τc1 和τc2 分别为 (0 55± 0 2 4 )ms、(3 6± 1 4)ms、(6 1± 1 6)ms、     

大鼠气管平滑肌细胞的分离及L-钙通道的记录

目的建立一种大鼠气管平滑肌细胞急性酶分离法并在分离的细胞上研究其L型钙通道(L-Ca)特性。方法采用链酶蛋白酶分离大鼠气管平滑肌细胞,用膜片钳单通道记录法记录L-Ca通道电流。结果该方法分离过程简单,所获细胞数量多,形态正常,在这些细胞上容易记录到正常的L-Ca通道电流。结论应用本方法易得到单个活性正常的、形态完整的大鼠支气管平滑肌细胞。     

大鼠气管平滑肌细胞的分离及L-钙通道的记录

目的 建立一种大鼠气管平滑肌细胞急性酶分离法并在分离的细胞上研究其L型钙通道(L-Ca)特性。方法 采用链酶蛋白酶分离大鼠气管平滑肌细胞，用膜片钳单通道记录法记录L-Ca通道电流。结果 该方法分离过程简单，所获细胞数量多，形态正常，在这些细胞上容易记录到正常的L-Ca通道电流。结论 应用本方法易得到单个活性正常的、形态完整的大鼠支气管平滑肌细胞。     

HPLC柱前衍生化测定组织液中妥布霉素的含量

目的:建立HPLC柱前衍生化法测定组织液中妥布霉素的含量。方法:使用含异硫氰酸-1-奈酯(NITC)的吡啶溶液在70℃衍生化,然后使用甲胺/乙腈溶液消除过度衍生化。HPLC使用AgilentHypersilODS色谱柱,流动相为乙腈:水(60:40),流速0.9mL/min,检测波长:230nm。结果:较好的检测出了组织液中妥布霉素的含量,检测范围为0.9μg/mL～20.0μg/mL,检测限为0.75μg/mL(信:噪=3,注射10μL),日内变异率小于2.0%(n=6),日间变异率小于5.3%,相对回收率大于99%。结论:NITC柱前衍生化HPLC分离测定注射用硫酸妥布霉素的含量方法简单,衍生化稳定可靠,使用高效液相可进行大规模样本测试。