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袁欣孙巧玲周艳萌秦欢王玉 《中国病原生物学杂志》2022,(8):896-900
目的探讨Rab32(Ras-related proteins in brain 32)在树突状细胞(dendritic cells,DCs)内卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染中的作用。方法通过小鼠DC2.4细胞建立BCG感染模型,通过RNA-Seq技术检测BCG感染后DCs内Rab基因的表达变化;通过生信分析筛选BCG感染后差异表达的Rab蛋白;western blot法检测BCG感染后DC2.4细胞内Rab32蛋白的表达情况;采用慢病毒转染技术制备EYFP-Rab32过表达DC2.4细胞(EYFP-Rab32 DC2.4细胞),采用western blot法和流式细胞术进行转染效率验证;通过细胞载菌量实验检测EYFP-Rab32 DC2.4细胞内BCG的增殖;采用western blot法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B,AKT)通路蛋白的变化。结果DC2.4细胞中存在55种Rab蛋白,BCG感染后10种Rab蛋白的表达水平发生明显变化;Rab32蛋白随着感染时间的增加而增加,感染0 h和48 h时Rab32表达显著增加(P<0.05)。BCG感染EYFP-Rab32 DC2.4细胞48 h时BCG载菌量为(60.16±4.69)×10^(4)CFU/孔,较DC2.4细胞明显增多[(21.09±1.56)×10^(4)CFU/孔](P<0.01);这可能与Rab32过表达导致BCG感染DC2.4细胞后p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT增多(P<0.05),即Rab32激活PI3K/AKT通路相关。结论Rab32可能通过调控PI3K/AKT通路促进DCs内BCG增殖。 相似文献
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【立论依据】 结核分枝杆菌(MTB)是结核病的病原菌,属胞内寄生菌。MTB感染机体后由抗原提呈细胞(APC)将抗原分子提呈给初始T细胞,诱导体内产生以细胞免疫为主的适应性免疫应答。树突状细胞(DC)作为提呈能力最强的APC在机体抗结核免疫中起着重要作用。有研究表明MTB可通过影响DC的功能来调节淋巴细胞的应答。如Palma 等发现MTB的PstS1蛋白可刺激DC诱导记忆性T细胞增殖并分泌更多的IFN-γ 和 IL-22;Byun 等则发现Rv0315(一种新的MTB抗原)可促进DC的成熟进而诱导Th1型免疫应答。而38KD蛋白作为MTB的一种具有强免疫原性的免疫原,其对树突状细胞的影响尚不清楚。本课题通过体外诱导表达MTB-38KD蛋白,刺激小鼠DC,研究其相关分子的变化情况,以明确38KD蛋白对DC的功能影响。 【设计思路】 构建38KD载体,诱导蛋白表达纯化后体外刺激小鼠DC,在不同时间点检测DC相关分子表达情况。 【实验内容】 38KD蛋白基因从MTB提取扩增验证后,将其构建到pET28a质粒上转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达并纯化,以不同浓度38KD蛋白刺激小鼠骨髓源DC,在不同时间点用流式细胞术检测表面CD11c、B7、MHC-Ⅱ等分子表达、ELISA检测培养上清IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ分泌情况。 【材料】 昆明小鼠、MTB菌株、质粒pET28a、BL21(DE3)、DNA纯化试剂盒、质粒提取试剂盒、SDS-PAGE配胶所需试剂、相关细胞因子ELISA检测试剂盒、荧光标记抗体(抗CD11c、B7、MHC-Ⅱ)等。 【可行性】 已有研究表明MTB的抗原成分与DC有关,38KD蛋白作为MTB的主要免疫原,极有可能对DC的功能有一定的影响;项目组已构建38KD蛋白原核表达载体,并参与发表相关科研文章,具有一定的结核研究基础,并可提供相关理论和技术支持。 【创新性】 本课题首次观察MTB-38KD蛋白对小鼠DC的影响,为后续抗MTB感染机制的研究提供理论基础。 相似文献
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52例创伤失血性休克的急救与护理 总被引:2,自引:1,他引:1
失血性休克是指机体受到创伤后大量失血、失液、有效循环不足,微循环灌注不足,使组织和器官缺血、缺氧,产生多器官功能障碍、代谢紊乱等病理变化的综合征[1] .严重者可威胁患者的生命,所以,高效、快速、细心、周到的护理,对于及时发现和掌握病情变化,提高治愈率,降低死亡率具有重要的作用.本文结合近年来急救护理的经验,将创伤失血性休克的急救护理步骤和体会报告如下. 相似文献
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通过对金水六君煎的相关资料进行整理研究,发现该方以二陈汤、贞元饮为基础创制,尤其是在燥湿化痰时,增加熟地、当归温补真阴而治虚寒,突出反映调补元气,温脾固肾的制方思想.该方被张氏应用于19种病证,也被后世医家灵活加减,广泛使用.研究金水六君煎的配伍特点和制方思想,对后世理解张氏和法的含义,研究张氏温补真阴的学术思想,拓宽... 相似文献
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目的进行结核分枝杆菌小分子热休克蛋白MTB Hsp16.3原核表达载体的构建、表达、纯化并初步观察其生物学效应。方法提取临床H37Rv分离株基因组DNA,PCR扩增Hsp16.3基因,将其重组到原核表达载体Pet28a中,构建原核表达载体Pet28a-Hsp16.3,进行双酶切及测序鉴定。将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE检测,同时通过镍柱纯化试剂盒纯化Hsp16.3,测定纯化后蛋白浓度,并进行Western blot法检测。将不同浓度纯化后蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞IL-10和IFN-γ的表达,同时设定空白对照组及阳性对照组。结果成功构建重组质粒Pet28a-Hsp16.3,并在E.coli BL21(DE3)中获得成功表达,通过镍柱纯化系统得到纯化Hsp16.3融合蛋白。qRT-PCR检测结果显示,不同浓度纯化后Hsp16.3蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,可促进IFN-γ的产生而抑制IL-10的产生。结论成功克隆、表达和纯化了MTB Hsp16.3蛋白,Hsp16.3能促进小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-γ,抑制IL-10的产生。 相似文献
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突聋的确切病因和病理机制尚不明确,其病因假说聚焦于微循环障碍、病毒感染或自身免疫性疾病等。2002年初Tran等提出内耳膜迷路积水(EH)与听力下降之间存在一定联系,Nagawama及Nakashima等提出的内耳膜迷路磁共振的3D-FLAIR成像推动了相关研究。本研究纳入单侧突聋患者,进行鼓室内注射钆内耳膜迷路MRI检查(3D-FLAIR序列),运用课题组提出的容积参考评分系统(VR评分)评估膜迷路积水程度,旨在探讨EH在四型单侧突聋中的分布。 相似文献
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目的:观察双柏散外敷治疗急性胆囊炎患者的临床疗效,确定不同剂量对其临床疗效的影响,筛选双柏散外敷的最佳剂量。方法:本研究对符合方案数据分析的250例急性胆囊炎进行前瞻性临床研究,分为对照组34例和双柏散治疗组216例,后者根据不同的外敷剂量又分为50 g组28例、100 g组163例和200 g组25例,观察各组症状总分变化,右上腹痛、腹部压痛缓解时间的变化,以及疗效与不同外敷剂量的关系。结果:治疗组右上腹痛缓解时间、腹部压痛缓解时间均明显少于对照组,差异有显著性意义(P0.05)。随着治疗的时间增加,各不同剂量组症状评分均呈下降趋势,第5天各组症状评分比较,差异有显著性意义(P0.05);其他观察时点比较,差异均无显著意义(P0.05)。各组间右上腹痛缓解、腹部压痛缓解时间比较,差异均有显著性意义(P0.05);组间两两比较,200 g组右上腹痛、腹部压痛缓解时间均明显短于对照组(P0.05);其余各组间两两比较,差异均无显著性意义(P0.05)。结论:加味双柏散外敷治疗急性胆囊炎疗效明确,200 g为合适的外敷剂量。 相似文献
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随着全球化的加速发展,健康问题全球化和健康不平等已成为世界各国共同面临的挑战。传统预防医学专业培养的人才已不能完全满足全球健康实践的需求,亟需全球健康专业人才,但目前全球健康本科教育在全球处于起步阶段,尚无成熟模式。武汉大学公共卫生学院多次组织国内外专家研讨,认为"全球健康"是致力于改善全人类的健康水平,实现人人公平享有健康权的新兴学科,其特点是倡导全球多层面广泛合作,并采用多学科的方法和经验解决健康问题。同时,对我国全球健康本科专业的人才培养方案进行了初步探索,确定的人才培养目标是培养具有多学科知识结构,能够从全球视角识别全球主要健康问题及其影响因素,制定符合国际规则的全球健康治理策略、行动计划和具体措施,具备跨文化、跨国界团队工作精神,善于沟通、协作,致力于改善全人类的健康公平性、提高全人类健康水平的复合型人才。 相似文献