三叶糖脂清DPP-4抑制成分筛选及其调控JNK/AKT信号通路改善胰岛素抵抗的机制研究

[目的]筛选三叶糖脂清中二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase-4,DPP-4)的抑制成分,探讨三叶糖脂清及其DPP-4抑制成分对胰岛素抵抗(insulin resistant,IR)细胞的影响和作用机制。[方法]运用课题组前期建立的DPP-4抑制成分筛选方法,从三叶糖脂清中筛选DPP-4抑制成分,并对抑制率大于50%的化合物进行量效考察,通过高浓度胰岛素诱导BNL.CL2小鼠胚胎肝细胞构建IR细胞模型。通过检测葡萄糖消耗量、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平和锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)含量,考察三叶糖脂清总提取物及其DPP-4抑制成分对IR的BNL.CL2细胞的影响。以Western blot检测超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-AKT/PKB)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT/PKB)的蛋白表达。[结果]三叶糖脂清中筛选出6个化合物对DPP-4的抑制率大于50%,且在10～50μmol·L~(-1)浓度范围呈良好的量效关系。三叶糖脂清总提取物及其DPP-4抑制成分隐丹参酮能促进BNL.CL2细胞葡萄糖消耗和Mn-SOD的表达,抑制IL-1β、IL-6的分泌,降低JNK蛋白磷酸化,促进AKT蛋白磷酸化和SOD2蛋白表达。[结论]三叶糖脂清中含有DPP-4抑制作用的成分,三叶糖脂清总提取物及其成分隐丹参酮可能通过降低氧化应激和炎症反应水平来调节JNK/AKT通路,改善IR。     

化学药品口服固体制剂生产场地变更的技术风险考量

药品生产场地变更可能会关联药品处方、原辅料供应商、生产工艺、工艺参数和批量等其他注册管理事项的变更,是所有变更情形中最复杂的。本文探讨化学药品口服固体制剂生产场地变更的技术风险考量点,结合技术审评中的部分案例,阐述了关键质量属性与关键工艺参数或关键控制指标等影响因素的关系,以期为药品生产企业变更生产场地时如何开展研究提供借鉴和启示。