一种新型尿酸氧化酶四聚体提取纯化方法的建立

目的 建立一种简便、快速的尿酸氧化酶四聚体提取纯化的方法,以适应大规模生产需求。方法 首先通过基因工程的方法获得可以稳定发酵生产尿酸氧化酶的大肠埃希菌菌株,再通过一步萃取法从破碎菌体沉淀中获得尿酸氧化酶蛋白混合物,通过硫酸铵沉淀、离子交换和分子筛层析,最终获得纯化的活性尿酸氧化酶四聚体。结果 通过优化发酵及提取条件,每升发酵液可得到尿酸氧化酶四聚体蛋白约400 mg,其纯度>95%,比活>10 U/mg。结论 建立了一种新的尿酸氧化酶四聚体高效提取纯化的方法。     

聚乙二醇化胰高血糖素样肽1类似物生物学活性的报告基因法测定

 目的  建立检测聚乙二醇化胰高血糖素样肽1类似物（polyethylene glycolylated  glucagon like peptide -1 analogue,PEG-GLP-1a）生物活性的报告基因法,并对该方法进行验证。 方法 将人胰高血糖素样肽1受体表达载体和分泌型碱性磷酸酶（secreted alkaline phosphatase, SEAP）报告基因载体瞬时共转染HEK293T细胞,培养后加入PEG-GLP-1a刺激细胞分泌SEAP,使用SEAP报告基因检测试剂盒进行测定,并验证其专属性、准确性、精密度、稳定性等指标。 结果  人胰高血糖素样肽1受体和SEAP双载体瞬时共转染的HEK293T细胞对PEG-GLP-1a具有强反应性。使用该方法测定PEG-GLP-1a具有良好的专属性。加标回收率为97.6%~102.23%,准确性较好。不同测定日期的日内半数效应浓度的变异系数都小于10.22%,不同测定日期的日间半数效应浓度的变异系数都小于13.02%。 结论  报告基因法可以用于PEG-GLP-1a的生物活性检测。     

聚乙二醇化胰高血糖素样肽1类似物生物活性的报告基因法测定

目的:建立检测聚乙二醇化胰高血糖素样肽1类似物(polyethylene glycolylated glucagon-like peptide-1 analogue,PEG-GLP-1a)生物活性的报告基因法,并对该方法进行验证。方法:将人胰高血糖素样肽1受体表达载体和分泌型碱性磷酸酶(secreted alkalin...