狐臭柴茎挥发油体外抗炎活性及基于NF-κB和MAPKs信号通路作用机制的研究

目的:探究狐臭柴茎挥发油的体外抗炎活性及其作用机制。方法:通过水蒸气蒸馏法制备狐臭柴茎挥发油,采用GC-MS对其化学成分进行分析。通过Griess法和ELISA法测定挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的影响;qRT-PCR检测iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达;Western blot测定挥发油对iNOS、COX-2、NF-κB和MAPKs信号通路蛋白的影响。结果:从挥发油中共鉴定出74种化学成分,其中主要的化学成分是茅术醇(13.50%)。挥发油显著抑制NO、TNF-α和IL-6的分泌(P＜0.01),同时降低了促炎因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)和促炎酶(iNOS和COX-2)的mRNA表达水平(P＜0.01)。Western blot研究表明挥发油能下调NF-κB信号通路细胞核p65蛋白表达、p65和IκBα磷酸化(P＜0.05或P＜0.01)。此外,还降低了MAPKs信号通路p38、JNK和ERK蛋白的磷酸化(P＜0.01)。结论:狐臭柴茎挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型具有较好的抗炎效果,其内在的分子机制与下调NF-κB和MAPKs信号通路有关。     

地果化学成分及抗肿瘤活性研究

目的:研究地果化学成分及抗肿瘤活性。方法:采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20、小孔树脂等色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。运用MTT法测定化合物对人癌细胞株A549、PC-3、K562的抑制作用。结果:从地果中分离纯化并鉴定了10个化合物,分别为:佛手柑内酯(1)、齐墩果酸(2)、棕榈酸(3)、β-香树脂醇棕榈酸酯(4)、熊果酸(5)、二十九烷(6)、日耳曼醇乙酸酯(7)、三十烷酸(8)、亚油酸(9)、豆甾烷-3β,5α,6β-三醇(10)。体外抗肿瘤活性筛选表明:化合物5对人前列腺癌细胞株(PC-3)、人白血病细胞株(K562)、人胃癌细胞株(A549)3种癌细胞株都有较强的抑制的活性,化合物2、3对PC-3和K562有一定的抑制作用,化合物1只对PC-3有抑制作用。结论:其中,化合物4～10为首次从该植物中分离得到,地果中化学成分有一定的抗肿瘤活性。     

何首乌产地加工炮制一体化技术研究

目的:比较何首乌传统产地加工及炮制技术与一体化技术的化学等量性及初步的生物等效性,探讨一体化技术的合理性及可行性。方法:通过正交试验对一体化技术中干燥温度、干燥时间和切片厚度3个影响因素进行考察,以何首乌中醇溶性浸出物、二苯乙烯苷及游离蒽醌含量作为考察指标,利用综合评分法优选何首乌产地加工炮制一体化技术。采用乙酰苯肼和环磷酰胺结合的方法建立血虚模型,比较2种技术加工所得饮片的补血作用及对SD大鼠肝毒性的影响。结果:何首乌一体化技术的最佳干燥温度70℃、干燥时间24 h、切片厚度8～12 mm。传统技术与一体化技术炮制何首乌中醇浸出物、二苯乙烯苷及游离蒽醌含量相当;2种技术加工所得饮片均具有一定的补血和降低肝毒性作用,且无显著性差别。结论:何首乌产地加工炮制一体化技术具有一定的合理性和可行性。     

球姜酮对照品的制备

目的制备球姜酮对照品。方法水蒸气蒸馏法提取红球姜挥发油,GC?MS检测其中球姜酮含量,重结晶分离纯化该成分,MS、¹H?NMR、¹³C?NMR对其进行结构鉴定,TLC、HPLC法检测纯度,通过温度、湿度、光照试验考察稳定性,HPLC法研究色谱条件。结果挥发油中球姜酮含量为77.8%,纯度大于99%,在室温(25℃)、高湿(90%)、强光照(4500 lx)下外观性状无明显变化,含量稳定。最佳分析条件为Wonda Cract ODS?2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈?水(80∶20);体积流量1 mL/min;柱温25℃;检测波长280 nm。结论该方法制得的球姜酮符合对照品要求,可用于含该成分药材(如红球姜等)及相关制剂的质量评价和药效物质基础研究。     

绣球化学成分及抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

目的:研究绣球的化学成分及抑制α-葡萄糖苷酶活性。方法:采取硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析和重结晶等方法进行纯化分离,通过理化性质及质谱、核磁共振等波谱数据进行结构鉴定。运用96微孔板测定化合物的体外抑制α-葡萄糖苷酶活性。结果:从绣球中分离鉴定了12个化合物,分别为:β-谷甾醇(1)、α-生育酚(2)、绣球内酯(3)、伞形花内酯(4)、异香草酸(5)、异山柑子萜醇(6)、茜草乔木醇B(7)、芦丁(8)、肌醇(9)、岩藻甾醇(10)、原儿茶酸(11)、莽草酸(12)。体外抑制α-葡萄糖苷酶活性表明:化合物3对α-葡萄糖苷酶有较强抑制活性,与阿卡波糖相当,化合物6、7、11、12对α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用。结论:其中,化合物1、2、6、9～12为首次从该属植物中分离得到,绣球中的化学成分对α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用。     

蘘荷根茎乙醇提取物对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响北大核心CSCD

目的:探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎活性及作用机制。方法:以70%乙醇为溶剂对蘘荷根茎回流提取制得提取物,测定其总酚酸和总黄酮含量,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS)鉴定其化学成分;MTT法测定蘘荷根茎乙醇提取物对RAW264.7细胞和L929细胞存活率的影响;用脂多糖(LPS)对RAW264.7细胞进行诱导建立体外炎症模型,通过NO检测试剂盒、ROS检测试剂盒、ELISA、免疫印迹法检测其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路中一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放量、活性氧(ROS)水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎作用及可能的作用机理。结果:蘘荷根茎乙醇提取物富含酚类成分[(15.07±0.13)mg GAE/g],鉴定出酚类化合物为L-酪氨酸、原儿茶酸、原儿茶醛、4-甲基水杨酸、对羟基安息香醛、咖啡酸、香兰素、对羟基肉桂酸、白果新酸;蘘荷根茎乙醇提取物在31.3、62.5、125、250μg/mL时对RAW264.7和L929细胞的存活率无显著影响;与空白对照组比较,模型对照组NO、IL-6、TNF-α和ROS含量显著升高(P<0.01),iNOS表达、P38、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达明显上调(P<0.05或P<0.01),IκBα和细胞质NF-κB p65的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,蘘荷根茎乙醇提取物31.3、62.5、125、250μg/mL组NO、IL-6的释放量明显降低(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物62.5、125、250μg/mL组ROS水平显著降低,iNOS表达、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达显著下调,细胞质NF-κB p65表达显著上调(P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物125、250μg/mL组IκBα表达明显上调(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物250μg/mL组TNF-α的释放量明显降低和P38的磷酸化表达明显下调(P<0.05)。结论:蘘荷根茎乙醇提取物具有良好的抗炎作用,其抗炎机制可能与抑制LPS诱导的MAPK和NF-κB通路的活化有关。