胰岛素样生长因子结合蛋白、内毒素与肝纤维化

目前胰岛素样生长因子结合蛋白（insulin—like growth—factor—binding protein，IGFBPs）及其超家族功能的研究是国际上的热点。有研究表明IGFBPs与肝纤维化的发生有关，而临床检测和动物实验表明肠源性内毒素血症与肝纤维化的发生发展有着密切关系，同时有研究显示内毒素可诱导循环中某些IGFBPs和其肝脏基因的表达发生变化。     

GRP78在肝硬化大鼠肠源性内毒素血症引发心脏病变中的作用

目的: 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在肝硬化大鼠肠源性内毒素血症引发心脏病变中的作用。方法: 51只Wistar雄性大鼠随机分为肝硬化模型4周组、6周组、8周组和同期正常对照组。于第8周检测大鼠心功能;检测各组心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和丙二醛(MDA)水平;甲苯胺蓝染色和van Giesan染色分别观察心肌细胞数量的变化和计算心肌胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测心肌组织GRP78和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达情况。结果: 随肝硬化病程进展:(1)肝硬化8周组大鼠左室舒张末期压(LVEDP)及左室内压最大上升和下降速率(±LV dp/dt_max)均较对照组降低(P<0.05);(2)心肌组织中TNF-α、MDA、CVF、GRP78蛋白和HIF-1α蛋白水平均逐渐升高并显著高于正常对照组(P<0.05);(3)甲苯胺蓝染色显示模型各组心肌细胞数量逐渐减少并显著低于正常对照组(P<0.05);(4)血浆中内毒素水平分别与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、同型半胱氨酸(Hcy)、TNF-α、GRP78和MDA呈显著正相关(P<0.05);(5)GRP78蛋白分别与HIF-1α、Hcy、MDA、ALT和CVF呈显著正相关(P<0.05)。结论: 肝硬化大鼠伴发的肠源性内毒素血症通过直接或间接作用引起内质网应激和GRP78表达增加,后者可能是引起心肌重构、导致心脏功能变化的关键分子。     

肝硬化患者血浆胰岛素样生长因子结合蛋白1、3的变化及其意义

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)1、3在肝硬化患者中的变化及其意义。方法收集33例肝硬化患者和6名健康人的外周静脉血,采用双抗体夹心ELISA法检测血浆中IGFBP1、3和TGF-β1的水平;同时采用鲎试验三肽基质显色法测定血浆内毒素的水平;采用全自动生化分析仪常规方法测定肝脏生化指标。结果肝硬化患者血浆IGF-BP1、TGF-β1和内毒素水平与健康人相比明显增高[肝硬化患者与健康人分别为(10985.37±8374.01)ng/mlvs(3360.63±829.13)ng/ml,P<0.05;(11.87±9.90)ng/mlvs(3.30±1.08)ng/ml,P<0.05;(0.69±0.35)Eu/mlvs(0.06±0.01)Eu/ml,P<0.05];而血浆IGFBP3的水平则明显降低[(440.20±421.19)ng/mlvs(3287.97±1158.02)ng/ml,P<0.001]。血浆IGFBP3与TGF-β1呈负相关(r=-0.468,P<0.01);血浆IGFBP3与内毒素的水平也呈负相关(r=-0.355,P<0.05)。肝硬化患者血清ALT的水平明显增高[(39.30±20.46)U/Lvs(18.25±6.39)U/L,P<0.05],而血清AST、GLDH的水平与健康人比较差异无统计学意义[(47.14±30.22)U/Lvs(19.33±8.50)U/L,P>0.05;(8.62±9.29)U/Lvs(5.30±1.00)U/L,P>0.05]。结论IGFBP1、3在肝硬化的发生发展中可能起重要作用。肝硬化患者血浆IGFBP3水平的降低可能与TGF-β1、内毒素水平增高有关。     

肝肺综合征大鼠模型肺组织巨噬细胞表型变化

目的　探讨复合因素诱导大鼠肝肺综合征（hepatopulmonary syndrome,HPS）发病过程中巨噬细胞的表型变化特点。 方法　制备肝硬化合并HPS大鼠模型,随机设立4周组、6周组、8周组3个时点,同期设置正常对照组。采用HE染色观察肝、肺组织病理变化;VG染色法对肝纤维化进行观察;免疫荧光法对巨噬细胞标志物CD68进行观察,RT-PCR检测肺组织标本中M1、M2巨噬细胞表型标记物CD86及CD206,Elisa检测iNOS、TNF-α、Arg-1及IL10。 结果　随病程进展,模型组大鼠CD86、iNOS及TNF-α在肺组织中表达逐渐增高,CD86及iNOS至6周达到高峰后有所回落,但仍明显高于正常对照组;CD206、Arg-1及IL-10的表达于第6周开始明显增加,第8周CD206及Arg-1亦有回落。上述指标在各时点的表达均有显著差异;其中,模型组大鼠肺组织iNOS与CD86呈正相关;Arg-1与CD206呈正相关;IL-10与CD206呈正相关。 结论　HPS的发病过程中,肺组织巨噬细胞经历了一系列的表型变化,6周前以M1为主,第8周以M2为主。     

肝纤维化肝硬化患者肝组织中IGFBP 2，6，7的表达及意义

目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)在肝纤维化和肝硬化患者肝组织中的表达、分布和意义.方法 对18例肝纤维化、18例肝硬化患者肝组织和6例对照组(为手术切除的肝血管瘤外的正常肝组织)标本分别进行HE染色、VG染色,以及TGF-β1、TGFRI、胶原纤维、IGFBP-2,-6,-7及CD14的免疫组织化学染色,并将其通过图像分析系统进行半定量分析和相关分析.结果 对照组正常肝组织IGFBP-2,-6,-7的表达表现为极少数肝细胞、中央静脉和胆管上皮细胞有阳性染色,在肝纤维化组和肝硬化组的表达主要见于肝窦内和纤维间隔.并且IGFBP-2,-6,-7在对照组正常肝组织、肝纤维化组和肝硬化组肝组织的表达逐渐增高,组间差异有统计学意义(P＜0.05).定量分析肝组织IGFBP-2,-6,-7的表达分别与肝组织胶原纤维、TGF-β1、TGFRI、CD14的表达呈正相关.结论 IGFBP-2,-6,-7在人肝纤维化的发生发展中可能起重要作用.     

氧化应激在复合致病因素法诱导大鼠肝硬化中的作用

目的:探讨肠源性内毒素血症(IETM)、高同型半胱氨酸血症以及氧化应激在复合致病因素法诱导的大鼠肝硬化形成过程中的作用.方法:将61只大鼠随机分为正常对照组、肝硬化模型2周组、4周组、6周组及8周组.摘取肝脏称重,计算肝系数;腹主动脉取血,测定血浆内毒素、同型半胱氨酸(HCY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和总胆红素(TBil)水平;测定肝组织匀浆中肿瘤坏死因子(TNF-α),Ⅲ型前胶原(PⅢP )和总抗氧化能力(T-AOC)水平.结果:模型各组血浆内毒素、ALT活力和TBiL水平均高于对照组(P<0.05);同型半胱氨酸(HCY)随病程进展逐渐升高(P<0.05).模型各组肝组织匀浆TNF-α、PⅢP水平明显升高,T-AOC明显降低 (P<0.05).结论:肠源性内毒素血症(IETM)、高同型半胱氨酸血症、氧化/抗氧化失平衡是肝硬化发生的重要机制.     

肝硬化大鼠TGF-α和TGF-β1变化及丹参素的作用

目的：探讨复合致病因素诱导的肝硬化大鼠TGF-α和TGF-β1改变及丹参素的保护作用。方法：取24只健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组（8只）、肝硬化组（8只）、丹参素干预组（8只）。采用复合致病因素法复制大鼠肝硬化模型,丹参素干预组采用丹参素进行干预[0.05 g/（kg·w）,每日灌胃]。于实验第8周末取材;检测血浆谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和内毒素水平;检测血浆和肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-α（TGF-α）和转化生长因子-β1（TGF-β1）水平;肝组织切片行HE染色,观察病理学变化。结果：与正常对照组相比,肝硬化组脂肪变性明显,有典型的假小叶形成;血浆ALT、AST和内毒素水平显著升高（P〈0.05）;血浆和肝组织匀浆TNF-α和TGF-β1水平也显著升高（P〈0.05）,而TGF-α水平无明显变化。与肝硬化组相比,丹参素干预组大鼠肝纤维化程度明显减轻;血浆ALT、AST和内毒素水平显著降低（P〈0.05）;血浆和肝组织匀浆TNF-α和TGF-β1水平也显著降低（P〈0.05）,而TGF-α水平显著增高（P〈0.05）。结论：在持续的肠源性内毒素作用下,TNF-α大量产生,TGF-α和TGF-β1之间失平衡,可能是复合致病因素诱导的大鼠肝硬化发病的重要机制,丹参素可以通过某种机制降低内毒素水平,减少TNF-α的产生,在一定程度上维持TGF-α和TGF-β1之间的平衡,对肝脏发挥促再生和保护作用。     

复合致病因素诱导大鼠肝硬化各脏器纤维化改变及机制

目的：观察复合致病因素诱导的大鼠肝硬化形成过程中肺脏、肾脏、心脏的纤维化改变并探讨其发生机制。方法：将51只大鼠随机分为正常对照组、肝硬化模型4周组、6周组及8周组。采用复合致病因素法诱导大鼠肝硬化,分别摘取肝脏、肺脏、肾脏、心脏称重,计算各脏器系数;HE和VG染色分别观察各脏器损伤和纤维化情况;腹主动脉取血,测定血浆内毒素、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBil）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;分别测定肝、肺、肾、心肌组织匀浆中TNF-α和丙二醛（MDA）水平。结果：模型各组血浆ALT活力、TBiL和TNF-α水平均高于对照组（P〈0.05）;血浆内毒素水平随病程进展逐渐升高,模型6周组及8周组明显高于对照组（P〈0.05）。模型各组肝、肺、肾、心组织匀浆TNF-α、MDA水平随病程进展均逐渐升高并显著高于正常对照组（P〈0.05）。各脏器组织纤维化指数均逐渐升高并显著高于正常对照组（P〈0.05）。结论：肝硬化发病过程中,由肠源性内毒素引发的全身炎性反应,是导致各脏器发生纤维化的重要机制。     

肝纤维化患者肝组织中胰岛素样生长因子结合蛋白的表达及意义

胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）可参与细胞的生长、分化和存活，并在许多生理和病理情况下发挥作用。目前一些研究显示IGFBP可能与纤维化的发生发展有关。Shaarawy等研究表明血清IGFBP3的水平可作为临床上定量评价肝硬化患者肝细胞合成能力的生物学标志。目前认为肝星状细胞（HSC）活化是肝纤维化发生的关键，转化生长因子β1（TGFβ1）是最重要的促纤维化细胞因子。