EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定

根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比后经ＴａｑⅠ酶切形成１１９８ｂｐ和２６２ｂｐ的两个片段，证实该扩增片段即为ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶的全基因片段。以ＪＭ１０３为宿主菌，以高效表达质粒ＰＢＶ２２１为载体，按常规方法作酶切、连接、转化，最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养，用快速法少量制备质粒ＤＮＡ。根据质粒电泳结果粗筛，再行ＢａｍＨⅠ酶切初步鉴定，确定质粒大小为５１１７（１４５１＋３６６６）ｂｐ的菌落为阳性克隆。先后用ＢａｍＨⅠ和ＴａｑⅠ消化阳性重组体，以形成１２００ｂｐ和３９１７ｂｐ两片段的确定为正向连接重组体。本实验首次将ＥＢＶ－ＤＮＡ酶全基因片段克隆到高效表达载体ｐＢＶ２２１上获得成功     

~1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化

目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。     

Study on the Penetrability of PEP-1-P27mt for Cell Membranes in Vitro

Double-stranded oligomeric nucleotide encoding PEP-1 peptides was synthesized, pro- karyotic expression pET15b-pep-1-p27mt recombinant constructed, E. coli BL21 (DE3)pLysS trans- formed and induced with IPTG to highly express fusion protein PEP-1-P27mt. Fusion protein with an N-terminal His-tag could be purified by Ni2 -resin affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blotting. Cultured EC9706 cells treated with PEP-1-P27mt revealed that PEP-1-P27mt was transduced into cells after 15 min and reached maximal intracellular concentra- tions in 2 h. PEP-1-P27mt of 1 μmol/L final concentration could most strongly suppress the growth. It was suggested that PEP-1 can carry P27mt across membrane, which provides a new biological pro- tocol for using cyclin dependent kinase inhibitors p27mt in suppressing the growth of tumor cells.     

缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展

目的 探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法 将Huh7细胞置于0.1%O₂培养箱培养24 h作为缺氧组，另设常氧组，提取外泌体，纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小，免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis, RTCA)实验检测细胞增殖，划痕实验检测细胞迁移，免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达，激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果 与常氧组相比，缺氧组外泌体浓度增加，但外泌体粒径的大小没有明显变化，缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Ali...     

临床实践教学体系的构建与实施

为了保证医学生在校期间能够得到较好的临床实践技能训练,近年来湖北医药学院积极探索有利于学生临床实践技能培养的教学体系,采取＂明确一个目标,构建两大实践教学中心,实施三阶段培训,应用多种教学方法手段＂的措施,将学生的临床能力培养贯穿于整个教学过程。     

右侧颈丛神经阻滞诱发同侧一过性听力障碍1例

患者,男性,14岁,41 kg,162 cm,因右侧锁骨骨折术后1年,愈合良好,拟行内固定钢板取出术入院,选择右侧颈丛神经阻滞.各项术前常规检查未见明显异常.ASA Ⅰ级,无慢性疾病及耳疾病史,无应用耳毒性药物史,无长期配戴耳机史.麻醉前30 min肌肉注射阿托品0.4 mg和苯巴比妥80 mg.局麻药采用0.25%左旋布比卡因与1%利多卡因的混合液,不加肾上腺素.消毒,铺中后用22 G穿刺针于右侧乳突至锁骨中点连线的中点垂直皮肤进针,抵达横突后注射局麻药3 ml,然后退针至肌膜下向乳突、锁骨和颈前方向各注射局麻药3 ml局部浸润,每次注药前均回抽无血或脑脊液.     

郧阳医学院《医学沟通学》课程建设的研究

《医学沟通学》课程的开设以培养医学生的沟通能力为主要目标。医学生沟通能力的构成要件三方面分别是：语言工具的正确使用、一般人际关系的处理及沟通能力、医学诊治信息的医患沟通、医学知识教育的公共沟通、医患纠纷的危机沟通等医患沟通能力;明确“医学沟通学”的内涵,并对课程的组织与实施提出具体方案。     

急性脑出血患者血清NSE的变化

近年来生物体液中神经元特异性烯醇化酶（Neuron—specific enolase，NSE）被认为是直接反映脑神经功能损害程度的一种灵敏的特异性指标。正常情况下，NSE占脑内全部可溶性蛋白的1．5％，外周血中NSE几乎检测不到。本文通过检测急性脑出血患者外周血NSE的变化，为NSE作为评定脑功能损害程度的依据之一积累资料。     

雄激素受体基因中 GGN 三核苷酸重复序列多态性与前列腺癌风险的相关性研究的系统综述与 meta 分析

目的：对雄激素受体（AR）基因中 GGN 三核苷酸重复序列多态性与前列腺癌风险的相关性研究进行总结并得出一致性的结论。方法检索中国知网（CNKI）、维普（VIP）、万方、PubMed/Medline、Embase 和 The Cochrance Library 等电子数据库中关于 AR 基因 GGN 三核苷酸重复序列多态性与前列腺癌风险相关性研究的文献。以16个 GGN 序列为临界值,对 GGN 多态性重复长度与前列腺癌风险的相关性进行 meta 分析。结果共纳入9篇病例对照研究文献,共组成2438个病例和1968个对照。GGN 重复序列小于或等于16个者有更高的患前列腺癌的风险（OR ＝1．15,95％CI ：1．00～1．31,P ＝0．04）。结论 AR 基因中的重复 GGN 序列小于或等于16个与前列腺癌风险的增加有关。