脯氨肽酶的生化性质

综述了脯氨肽酶(prolidase)的生化性质，详细论述了人脯氨肽酶的生理、理化性质、序列及其空间结构，并对动物组织与微生物中存在的脯氨肽酶性质进行了比较。     

Q型人血清对氧磷酶在杆状病毒感染的昆虫细胞中的表达

目的　研究对氧磷酶与心血管疾病的关系。方法　采用BAC TO BAC杆状病毒系统表达Q型人血清对氧磷酶 (PON 1) ,在已获得人PON 1全长cDNA的基础上 ,通过PCR扩增 ,得到上游含EcoRⅠ酶切位点 ,下游不含终止密码子而含HindⅢ酶切位点的PON 1基因 ,将其克隆到带有 6×His·Tag的pFASTBACⅡCD14质粒中 ,构建杆状病毒转移载体pFASTBACⅡ PON 1。将含有PON 1基因的重组质粒pFASTBACⅡ PON 1转化DH10BAC感受态细胞 ,使目的基因通过同源重组插入BacmidDNA中。PCR鉴定正确后再转染入sf9昆虫细胞中 ,产生有感染力的重组杆状病毒。用乙酸苯酯为底物测定表达上清液中的酶活性。结果　比较不同感染复数(MOI)和不同感染时间PON 1在培养上清液中的表达情况 ,确定感染复数MOI为 6～ 8,感染时间 96～10 8h为PON 1的最佳表达条件 ,产率约为 4 .5mg·L- 1上清液。免疫印迹法表明重组蛋白有与抗 6×His单克隆抗体结合的抗原性。顺磁共振实验证明 ,基因工程产人重组血清对氧磷酶rhPON 1能有效清除Fe2 +诱导亚油酸脂质过氧化产生的脂质自由基 ,清除率为 5 5 .9%。结论　BAC TO BAC杆状病毒介导的草地贪夜蛾昆虫细胞sf9可高效表达Q型人血清对氧磷酶     

谷胱甘肽-S-转移酶-人表皮生长因子融合蛋白基因的表达及其产物的生物活性

目的　通过融合蛋白的表达使人表皮生长因子(hEGF)易于纯化。方法　构建基于tac启动子的pGEX 4T-1-hEGF原核表达载体,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,以异丙基 1 硫代-β-D半乳糖苷诱导,表达谷胱甘肽 S 转移酶(GST) hEGF融合蛋白。结果　表达产物占细菌总蛋白的3 4%。部分为可溶性的,部分形成包涵体。菌体裂解上清液经GlutathioneSepharose 4B纯化后,SDS PAGE电泳出现一条3 2ku蛋白条带,与GST hEGF融合蛋白的计算分子量相符。菌体裂解液中的可溶性GST hEGF的产率为63mg·L- 1 。将其添加到培养的HEK-2 93细胞中,能明显促进该细胞的分裂和生长。结论　成功地构建并表达了GST-hEGF融合蛋白基因,其表达产物GST hEGF显示良好的促细胞增殖活性     

脯氨肽酶在军事医学中的应用

应用酶清除神经性化学毒剂及有机磷农药的研究课题已有 5 0多年。 194 6年Mazur[1] 首次报道了兔组织中一种酶有水解二异丙氟磷酸酯 (DFP)的能力。 1992年国际生化组织 (TheInternationalUnionofBiochemistry)将此酶定义为有机磷酸酸酐水解酶 (Organophophorusacidanhydrolase ,OPAA ,E .C .3.1.8.2 )。它能水解多种有机磷酸乙酰胆碱酯酶抑制剂 ,包括DPF、神经性化学毒剂梭曼 (Soman)、沙林 (Sarin)和塔崩 (Tabun)以及杀虫剂对硫磷 (parathion)和对氧磷 (paraoxon)等。酶法去污染及化学毒剂的销毁意义重大。以前曾根据水解底物的不…