高效液相色谱法定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量

 目的 建立定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的HPLC分析方法,对2010年版《中国药典》相关测定方法进行有益补充。方法 采用Waters Alliance系统、Waters 2414示差折光检测器、安捷伦Zorbax Carbohydrate Analysis色谱柱,以ACN-H₂O（70∶30）作为流动相,流速1.4 mL·min^-1,柱温30 ℃测定人纤维蛋白原中的蔗糖。并用该方法平行测定13批含有蔗糖的重组人凝血因子Ⅷ,与药典IEC-HPLC方法进行方法学比较。结果 HPLC测定蔗糖对照品的保留时间RSD (n=6)为0.17%,峰面积RSD (n=6 )为0.09%。蔗糖在低（5 mg·mL^-1)、中（10 mg·mL^-1)、高（15 mg·mL^-1)3个质量浓度的回收率分别为96.2% ,98.8% ,100.3%,平均回收率为98.4%。蔗糖在2~20 mg·mL^-1（r=1.000 0）内与峰面积呈良好的线性关系。2批人纤维蛋白原中的蔗糖含量分别为48.8,45.0 g·L^-1,均符合其40~60 g·L^-1的质量范围。平行测定的13批重组人凝血因子Ⅷ的蔗糖结果与药典IEC-HPLC测定结果的相关系数r为1.000 0,两种方法无显著性差异（P>0.05）。结论 新建HPLC测定蔗糖含量方法的准确性和精密度良好,能够规避药典IEC-HPLC色谱条件下枸橼酸和蔗糖互相干扰的问题,本法可以适用于干热病毒灭活条件下人纤维蛋白原中蔗糖检测。     

骨髓基质细胞向神经细胞诱导分化过程的形态学观察

骨髓基质细胞(BMSCs)是骨髓内的一种多潜能的干细胞,具有分化为间叶组织,包括骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉等的能力,在一定条件下,骨髓基质细胞可诱导分化神经细胞,对中枢神经系统疾病的治疗有潜在的应用价值[1] 。一、材料与方法1.主要材料:αMEM培养基(Gibco公司) ,人碱性成纤维细胞生长因子(hFGF b ,Chemicon公司) ,抗人巢蛋白(nestin)单抗(Chemicon公司) ,小鼠抗微管相关蛋白 2 (MAP 2 )单抗(Sigma公司) ,β巯基乙醇(BME ,Sigma公司) ,胎牛血清(Gibco公司) ,SP免疫组织化学试剂盒(福州迈新生物技术开发公司) ,LSM 5 10Meta激…     

冻干及静注人免疫球蛋白类制品中不溶性微粒含量测定研究

 目的 选取全国14个企业报验的冻干、液体2种剂型的静注人免疫球蛋白(pH 4)及冻干、液体2种剂型的静注乙型肝炎人免疫球蛋白(pH 4)制品,考察其不溶性微粒含量。方法 按2010年版《中国药典》三部不溶性微粒光阻法,检测19批静注人免疫球蛋白（pH 4）、5批冻干静注人免疫球蛋白（pH 4）、5批静注乙型肝炎人免疫球蛋白（pH 4）和3批冻干静注乙型肝炎人免疫球蛋白（pH 4）,计算≥10和≥25 μm两个粒径通道的不溶性微粒含量。遇光阻法结果不符合规定时,采用显微计数法复测。样本均为随机抽取,并比较测定结果与自检结果的一致性。结果 抽验的32批供试品的不溶性微粒含量合格率为90.6%（29/32）,其中3批冻干静注人免疫球蛋白的不溶性微粒检查结果不符合2010年版《中国药典》三部光阻法的相关要求,但显微计数法复验结果符合规定。结论 目前国内冻干及静注人免疫球蛋白类制品中不溶性微粒质量总体情况较好,不同实验室间测定结果趋势一致;冻干、静注人免疫球蛋白(pH 4)不溶性微粒光阻法与显微计数法检查结果有呈现差异现象。     

长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制标准研究

目的：建立长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制方法和质量标准。方法：用UT-7细胞依赖株和ELISA测活法测定生物学和免疫学活性，使用高效液相色谱系统分析N-糖链结构、测定纯度，及胰蛋白酶酶切的肽图分析．等电聚焦电泳分析异构体，使用比色法检测唾液酸含量。其余检测项目按2005年版中国药典三部方法进行。结果：建立的方法经过比较和对长效人红细胞生长刺激蛋白的检测，结果稳定可靠，重复性好，各指标符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论：本研究建立了一套完善的长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制体系。     

RP-HPLC法定量测定枸橼酸离子含量

目的:建立定量测定含枸橼酸盐和蔗糖的血液制品或干热法病毒灭活中间制品中枸橼酸离子含量的高效液相分析方法,并与中国药典2005年版三部枸橼酸离子测定第二法进行比较。方法:采用RP-C18色谱柱以磷酸盐缓冲液作为流动相,以5 mmol·L-1枸橼酸离子溶液做回收率和精密度分析。选择5种共20个批次仅含枸橼酸盐不含有蔗糖的血液制品,按2005年版中国药典枸橼酸离子测定第二法平行分析,比较两者一致性。结果:RP-HPLC法枸橼酸离子保留时间大约在5min,其5次进样保留时间RSD%(n=5)为0.0,峰面积RSD%(n=5)为0.1,实验所测枸橼酸离子标准回收率大于99.0%,标准曲线线性相关系数r大于0.999。RP-HPLC法与IEC-HPLC法平行检测20个批次制品的枸橼酸离子含量,统计学结果显示2种方法相关系数r为0.9994,两者无显著差异(P>0.05)。结论:RP-HPLC法的准确性和精密度良好,与2005年版中国药典三部第二法结果一致并可规避其缺点,适用于含枸橼酸盐和蔗糖的血液制品及干热病毒灭活中间制品的枸橼酸离子含量分析,也可用于检测常规血液制品,可以作为2005年版中国药典枸橼酸离子测定的补充方法...     

人血白蛋白的蛋白质含量测定能力验证结果与分析

目的：对全国血液制品批签发授权药检机构及相关生产企业或单位实验室的人血白蛋白蛋白质含量检测能力进行评价。方法：选择符合要求的人血白蛋白产品作为原料进行合并、除菌、分装。制备后按照《中国药典》2015年版三部蛋白质含量（凯式定氮）测定,组织协作标定后确立指定值。均一性和稳定性监测合格后按能力验证要求发放样品。以多中心协作标定结果作为评价参加者能力验证结果的依据。结果：能力验证样品确立的指定值及其参考范围为（193.30±5.08） g·L^-1,参加本次能力验证的药检机构或企业实验室共13家,10家实验室结果为优秀,1家实验室为合格,2家实验室为不满意。整体满意率为84.6%,优秀率76.9%,不合格率15.4%。结论：国内血液制品的7家批签发授权药检机构能力验证结果均为优秀,部分企业实验室能力验证结果为满意,但也有个别实验室测定结果出现偏差,参加者应调查并改进。     

人血白蛋白中不溶性微粒的检测及制品质量考察趋势分析

目的:考察目前市售国内外人血白蛋白制品中不溶性微粒的含量情况并与自检结果进行对比。方法:随机抽取来自国内外企业的规格为200 g.L-1,每瓶50 mL的人血白蛋白共53批,以GWF-8JA型微粒检测仪按2010年版中国药典三部附录第一法光阻法对抽检样品进行不溶性微粒质量考察。每批供试品取1瓶,分别检测供试品中≥10μm和≥25μm 2个通道的微粒总数,将所得结果与自检数据进行趋势比对,并将2个粒径通道所测得的结果按微粒数的多少分成A、B、C、D、E 5个级别并计算符合各个级别的人血白蛋白的批次数。结果:53批人血白蛋白全部符合2010年版中国药典三部的相关规定,抽验的人血白蛋白样品中有80%以上的制品的不溶性微粒结果能够达到A级水平,各批次的检验结果与企业自检结果具有一致性。结论:随机抽样结果表明80%以上的人血白蛋白不溶性微粒结果远低于国家相关标准规定,制品质量控制良好,实验室间结果趋势一致。     

首批重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品的研制

目的 研制一种重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品,用于重组人血白蛋白等产品的蛋白质含量测定。方法 选取重组人血白蛋白产品作为原料,经质量浓度9 g·L^-1 NaCl溶液稀释后除菌过滤分装。在8家实验室按经确认和验证的方法进行协作标定并开展稳定性监测。结果 8家实验室采用包括高效液相色谱法(HPLC)、福林酚法(Lowry)、紫外测定法(UV)、2,2′-联喹啉-4,4′-二羧酸法(BCA)等测定本批标准品,蛋白质含量实验室间均值为1 961(Min 1 904,Max 2 063)μg·mL^-1,95%置信区间(1 917,2 016)μg·mL^-1;实验室间标定结果均值标准差52.89,标准误18.70,相对标准偏差(RSD)为2.70%。2~8 ℃持续对该标准品进行稳定性监测19个月,蛋白质含量未发生趋势性变化,建议本品按2~8 ℃保存和运输。结论 重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品符合相关规定,可以发放用于重组人血白蛋白相关的质量控制。     

重组人促红细胞生成素的HPLC与UPLC肽图谱分析

目的分析rHuEPO供试品及其对照品经胰酶酶解后分别在HPLC与UPLC上的肽图谱表现。方法rHuEPO供试品及对照品经透析、冻干、重新溶解和胰酶酶切后，以三氟醋酸／水，三氟醋酸／乙腈／水作为流动相梯度洗脱，分别以HPLC及UPLC连接反相色谱柱分析酶切后的肽段。结果rHuEPO供试品及其对照品经胰酶酶切后的肽段在HPLC上肽图谱表现一致，在UPLC上肽图谱也完全一致。UPLC分析rHuEPO肽图需要的进样量更少，且较传统HPLC的分析时间大为缩短，同时不损失分离度及灵敏度。结论UPLC与HPLC均能验证rHuEPO供试品及对照品肽图的一致性，相比于HPLC、UPLC分析肽图谱更方便快捷，更节省样品，更适合分析rHuEPO肽图。     

首批肠道病毒71型人免疫球蛋白国家标准品的研制

 目的 制备首批肠道病毒71型免疫球蛋白国家标准品,用于肠道病毒71型特异性免疫球蛋白产品效价测定。方法 选择国内经批签发检验合格的静注人免疫球蛋白产品以及高效价肠道病毒71型人免疫球蛋白作为原料进行合并,分装冻干后并按规定对标准品的水分含量、分装精度、无菌检查和稳定性进行考察。在5家实验室按微量细胞病变法进行协作标定,以肠道病毒71型中和抗体滴度的倒数作为中和效价,单位定义为u。结果 5家实验室共进行了63次协作标定,结果均经LOG转换后进行计算,实验室内几何变异系数GCV范围为1.5%~4.1%,实验室间几何变异系数GCV平均值为3.1%,效价几何平均值为327 U。为以后使用和计算方便,该批次标准品赋值为330 U。该标准品160 d加速破坏实验和22 m长期稳定性考察显示效价稳定无下降趋势,12 m测定不同温度点的单体加二聚体(HPLC-SEC法)含量大于98.0%,有效成分稳定。该标准品的水分含量为0.6%,分装精度为0.56%,无菌检查合格。结论 该批肠道病毒71型人免疫球蛋白标准品各项检测指标符合要求,可以作为国家标准品发放用于肠道病毒71型特异性免疫球蛋白的效价测定。