王乃英效方二则

王乃英主任医师,从医60余年,经验丰富,临床治法颇有独到之处,今举效方二则,介绍于下。一、自拟解毒散火汤治疗牙痛1.药物组成:生石膏15克防风10克 荆     

人趋化因子受体CCR4的克隆与表达

目的：建立pcDI-CCR4稳定转染并具有CCR4功能性表达的细胞株,为深入研究CCR4配体提供基础。方法：利用RT－PCR技术进行人CCR4的cDNA克隆化。通过基因转染技术获得稳定转染细胞株,利用趋骅实验、钙流实验证实稳定转染细胞能有效表达CCR4并具有生物功能。结果：成功地将CCR4 cDNA克隆于真核表达质粒pcDI,转染HEK293细胞获得稳定表达CCR4的HEK293细胞,可被RANTES诱导产生趋化反应和钙内流反应。结论：建立的pcDI－CCR4稳定转染细胞株能有效表达CCR4并具有生物功能。     

老科学家的话

<正> 营养学是我国发展较早的一个学科领域。在二三十年代,我国的生物化学工作者大多数是从事营养工作的,他们为我国早期的营养学发展,作出了宝贵的贡献。全国解放前,我国人民的营养,归根结     

Waldenstr(o)m巨球蛋白血症病理细胞的特殊形态学改变二例报告

Waldenstr(o)m巨球蛋白血症(WM)是由B淋巴细胞克隆异常增殖所致的血液系统恶性肿瘤,其病理细胞具有分泌单克隆免疫球蛋白M的功能.本研究对2例WM患者的诊断经过及形态学特点进行了分析.结果表明,2例患者的细胞学检查均发现特殊的"泡沫状细胞",其细胞化学染色具有淋巴细胞的特征,而不具有单核巨噬细胞或脂肪细胞的特点.结论:本文所描述的细胞为印戒样淋巴细胞的特殊亚型,可以将其描述为"宝石镶戒样淋巴细胞".     

基因治疗的进展

10年前曾有人设想通过正常基因的转移治疗代谢性和其他功能性遗传缺陷疾病,目前有关这方面研究已取得显著进步。基因治疗即以分子遗传学技术为基础,将克隆的正常基因序列导入该基因有缺陷的患者体内,使导入的基因发挥作用而纠正基因缺陷。由     

人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定

目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础.方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMP-myc/His片段,插入pMH3表达载体.利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株.以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性.结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株.镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95％以上且具有生物学活性.结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具.     

腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素-6在真核细胞中的表达效率

目的:构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率.方法:利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素-6(IL-6)真核表达载体pAdCIIL-6和P335ciil-6.将它们瞬时转染COS-7细胞后,利用IL-6依赖株7TD1对上清中的IL-6进行检测.结果:两种新建载体分别能提高IL-6在真核细胞中的表达效率5.5和3.4倍.结论:腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡRNA(virus-associated Ⅰand ⅡRNA, VAⅠand VAⅡ)和腺伴随病毒(adeno associated virus, AAV) 的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)能提高细胞因子在真核细胞中的表达.     

硫氧还蛋白对氢醌细胞毒性的抑制

目的　氢醌引起细胞凋亡 ,可能是通过降低细胞内巯基水平及升高活性氧水平改变细胞内氧化还原状态。鉴于硫氧还蛋白在维持细胞氧化还原状态平衡上也起着重要作用 ,本研究探讨人硫氧还蛋白(hTRX)对氢醌细胞毒作用有无影响。方法　采用脂质体法 ,将真核表达质粒pVP2 2 hTRX和pVP2 2分别转入人胚肾细胞中 ,并将获得的G4 18抗性单克隆细胞株hTRX12和VP2 2细胞进行Western印迹法分析。分别用荧光探针DCFH DA法、碘化丙啶染色法及MTT法测定活性氧水平、凋亡率及细胞存活率。结果　用不同浓度氢醌处理hTRX12细胞与VP2 2细胞 ,hTRX过度表达可降低氢醌所致的活性氧水平升高 ,降低氢醌诱导的凋亡 ,抑制氢醌的细胞毒性。另外 ,用重组人硫氧还蛋白 (rhTRX)与氢醌同时处理未转染人胚肾细胞 ,也可观察到类似结果。结论硫氧还蛋白可对抗氢醌的细胞毒性 ,其机制可能是通过降低氢醌所致活性氧升高及维持细胞内巯基水平