白细胞介素-12增强HBsAg疫苗免疫应答的实验研究

目的研究白细胞介素-12（IL-12）对乙肝病毒表面抗原（HBsAg）疫苗的免疫增强作用。方法选用C57BL／6J小鼠,使用不同剂量的重组鼠白细胞介素-12（rmlL-12）和HBsAg联合给药,检测给药前后血清中IFN-1,的浓度以及给药后小鼠脾脏淋巴细胞对HBsAg刺激的免疫应答能力的变化。结果高剂量HBsAg和高剂量rmIL-12联合两次给药后,血清中IFN-γ浓度明显高于单独给HBsAg组或rmIL-12组（P〈0．05）;高剂量联合给药组的小鼠脾脏淋巴细胞经HBsAg体外刺激后诱生IFN-γ的能力明显高于单独给HBsAg组或rmlL-12组（P〈0．05）,流式细胞检测分析表明IFN-γ主要来源于CD4^＋和CD8^＋的T细胞。结论rmlL-12能快速明显地提高C57BL／6J小鼠对HBsAg的特异性免疫应答能力,为IL-12和HBsAg在临床上联合治疗慢性乙肝感染提供了理论依据。     

IL-12对辐射损伤后小鼠造血干细胞的修复作用

目的 研究重组小鼠白介素12(rmIL-12)对经辐射损伤后小鼠骨髓造血干细胞的修复作用.方法 选用SPF级BALB/c鼠,直接取骨髓造血干细胞或小鼠本身在辐照前后用rmIL-12处理后,检测造血干细胞的数量和凋亡细胞数,探讨rmIL-12对辐射损伤后骨髓造血干细胞的修复功能.结果 不论是直接辐射细胞或小鼠本身,在辐照前后用rmIL-12处理后,rmIL-12具有提高受损骨髓造血干细胞的数量增加,细胞凋亡率减少.结论 rmIL-12对辐射损伤后的造血干细胞具有明显的促进修复作用,这为临床上治疗造血细胞受损提供实验依据.     

肝病治疗仪联合阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎病毒携带者的研究

目的观察肝病治疗仪联合阿德福韦酯对慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者(CHBVCs)细胞免疫和HBV复制的影响,旨在探讨该治疗仪治疗CHBVCs的作用和作用机制。方法 60例CHBVCs随机分为2组。治疗组应用肝病治疗仪联合阿德福韦酯治疗,对照组单用阿德福韦酯。用ELISA法和实时荧光定量PCR法分别检测治疗前和治疗12周及24周2组患者PBMCs上清液IFN-γ和血清HBV DNA含量。结果治疗组治疗后IFN-γ显著增高(P<0.05或0.01),HBV DNA有效下降率显著高于对照组(P<0.05)。结论肝病治疗仪联合阿德福韦酯可上调CHBVCs患者细胞免疫应答,诱生细胞因子IFN-γ,抑制HBV复制,优于单用阿德福韦酯。     

重组人白细胞介素12对健康人外周血单个核细胞产生γ干扰素影响的研究

目的建立重组人白细胞介素12(rhIL-12)的生物活性检测方法,观察rhIL-12诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC)产生γ干扰素(IFN-γ)的水平与剂量和时间之间的关系,揭示其变化规律。方法rhIL-12供试品刺激健康人PBMC分泌IFN-γ,经国际标准品校正,建立rhIL-12生物活性测定方法。以1 ng/mL浓度rhIL-12诱导健康人PBMC,分别于24、48、72、96和120 h 5个时间点用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清的IFN-γ水平。测定0.1、0.5和2.5 ng/mL 3个浓度rhIL-12诱导人PBMC 72 h后培养上清的IFN-γ水平,用Prism 5.0统计软件的重复测量方差分析法对所得数据进行统计学处理。结果rhIL-12供试品的生物活性曲线呈典型S型,IFN-γ含量为最大浓度一半时的供试品浓度(ED50)为(1.008±0.238)ng/mL,供试品rhIL-12效价为7 938 IU/mL。测定1ng/mL浓度rhIL-12刺激健康人PBMC后5个时间点培养上清中IFN-γ显示,不同个体高峰出现时间有所不同,在高峰出现前均呈现递增趋势。高、中、低3个浓度r...     

HBsAg联合rhIL-12对慢性乙型肝炎患者PBMC诱生IFN-γ的作用

目的确认重组人白细胞介素12（rhIL-12）联合乙型肝炎表面抗原（HBsAg）可增强慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）对HBsAg产生特异性细胞免疫应答,探讨rhIL-12联合HBsAg作为治疗型乙型肝炎疫苗的应用前景。方法取8名正常人和16例慢性乙型肝炎患者的PBMC,分别用不同浓度的HBsAg、rhIL-12单独体外刺激,再用HBsAg联合rhIL-12（0．01、0．1和1．0ng／mL）刺激患者PBMC,72h后用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中的1干扰素（IFN-γ）。结果HBsAg或rhIL-12单独刺激仅产生低水平的IFN-γ,联合使用HBsAg和rhIL·12刺激后,患者PBMC产生的IFN-1平均水平显著高于单独使用HBsAg或rhIL-12（P均〈0．05）。HBsAg（0．5μg／mL）联合rhIL-12（0．01、0．1和1．0ng／mL）刺激患者PBMC产生的IFN-1与rhIL-12的浓度之间呈明显的量效关系。结论HBsAg和rhIL-12联合刺激乙型肝炎患者PBMC,通过产生高水平IFN-γ激活乙型肝炎患者特异性细胞免疫。     

重组人白细胞介素12对健康人外周血单个核细胞产生γ干扰素影响的研究

目的建立重组人白细胞介素12（rhIL-12）的生物活性检测方法,观察rhIL-12诱导健康人外周血单个核细胞（PBMC）产生γ干扰素（IFN-γ）的水平与剂量和时间之间的关系,揭示其变化规律。方法rhIL-12供试品刺激健康人PBMC分泌IFN-γ,经国际标准品校正,建立rhIL-12生物活性测定方法。以1ng／mL浓度rhIL-12诱导健康人PBMC,分别于24、48、72、96和120h5个时间点用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清的IFN-γ水平。测定0．1、0．5和2．5ng／mL3个浓度rhIL-12诱导人PBMC72h后培养上清的IFN-γ水平,用Prism5．0统计软件的重复测量方差分析法对所得数据进行统计学处理。结果rhIL-12供试品的生物活性曲线呈典型S型,IFN-γ含量为最大浓度-半时的供试品浓度（ED50）为（1．008±0．238）ng／mL,供试品rhIL-12效价为7938IU／mL。测定1ng／mL浓度rhIL-12刺激健康人PBMC后5个时间点培养上清中IFN-γ显示,不同个体高峰出现时间有所不同,在高峰出现前均呈现递增趋势。高、中、低3个浓度rhIL-12分别诱导健康人PBMC产生的IFN-γ水平与浓度之间呈显著量效关系,且在0．1ng／mL的极低浓度即可诱生高水平IFN-γ。结论rhIL-12供试品生物活性良好,与国际标准品比对基本一致,不同人群对rhIL-12的应答高峰存在个体差异,以诱生IFN-γ作为评价rhIL-12生物活性的指标具有明显的量效关系。     

重组人IL-12和SCF促进新生儿脐带血中CD34~+细胞的分裂增殖

目的分析IL-12及SCF对CD34+细胞分裂增殖及IL-12Rβ的表达。方法分离正常足月产新生儿脐带血与健康成年人外周血中的单个核细胞,采用流式细胞术(FACS)比较2组中CD34+细胞的频率,分析IL-12及SCF对CD34+细胞的作用。结果健康成年人外周血中CD34+细胞平均频率为0.13%,显著低于新生儿脐带血中CD34+细胞的平均频率1.53%(P<0.001)。进一步研究表明,SCF可以促进CD34+细胞表达CD25;IL-12及SCF可以显著促进CD34+细胞的分裂增殖以及IL-12Rβ1的表达。结论新生儿脐带血中CD34+细胞的频率明显高于成年人外周血中CD34+细胞的频率。IL-12及SCF可以促进CD34+细胞的分裂增殖以及IL-12Rβ1的表达。     

IL-12对小鼠受 X 射线辐射所致造血系统损伤的影响

目的 研究白细胞介素-12(IL-12)对X射线照射所致造血系统损伤的影响.方法 选用BALB/c小鼠,使用不同剂量的重组鼠白细胞介素-12(rmIL-12)于X射线4.0 Gy辐照前24 h和辐照后2h分别给药一次,采血检测辐照前后的血象变化.结果 各组小鼠白细胞在照射后第4日均下降至低值后开始回升,在照射后第8日,rmIL-12(200 ng/只)剂量组的白细胞数量明显高于照射后生理盐水组、rmIL-12(50 ng/只)剂量组和rhG-CSF(2.5 mg/只)组(P＜0.001);各组小鼠照射后红细胞开始持续下降,直至第12日达最低水平,继而各组红细胞数量开始恢复.在第12日(200 ng/只)剂量组的红细胞数量明显高于照射后生理盐水组(P＜0.001);各组小鼠血小板在照射后前8d均呈下降趋势,给药对下降趋势影响不明显,在第12日,各组血小板开始恢复,但各组之间恢复情况差异不明显.结论 IL-12能明显促进X射线辐射损伤后的造血系统的提前修复,为IL-12在临床上治疗造血系统损伤提供了实验依据.     

重组人白细胞介素-12对食蟹猴的反复给药毒性研究

目的:观察重组人白细胞介素-12(rhIL-12)对食蟹猴的长期毒性。方法:食蟹猴皮下注射给予rhIL-12,剂量分别为0.5,5和40μg·kg-1,每周3次,共13周。检测指标包括临床症状、血液学、血生化、免疫、血清抗体和组织病理学检查。结果:rhIL-12给药后导致动物出现腹泻、面部及眼睑部肿胀、腹股沟淋巴结肿大、溃疡、及注射局部红斑和硬结等临床症状,并出现贫血和白细胞分类异常,血液生化指标出现肝脏转氨酶升高,免疫学指标出现外周血总T淋巴细胞比例增加,CD4细胞百分率下降,CD8细胞百分率增加。第7次给药后,给药组动物产生了rhIL-12抗体。结论:食蟹猴皮下注射给予rhIL-12,毒性靶器官和组织为血液系统、肝脏、心脏、肾脏和淋巴结等免疫调节系统,其安全剂量为0.5μg·kg-1。