杨梅素联合围脂滴蛋白基因沉默促进前脂肪细胞系3T3-L1的降脂

目的探讨杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解通路的影响。方法采用经典"鸡尾酒"方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出杨梅素最佳干预浓度和时间。杨梅素联合sh-PLIN1干扰载体对成熟的脂肪细胞进行干预,实验共分为4组:对照组(control group)、转染组(sh-RNA group)、杨梅素组(Myric group)和联合干预组(Myric+sh-RNA group)。油红O染色脂滴,观察脂滴形态;Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、MEK、p-MEK和激素敏感性脂肪酶磷酸化蛋白(p-HSL)的表达;ELISA测定细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)和磷酸化的蛋白激酶C(p-PKC)的含量。结果与Myric组和sh-RNA组相比,Myric+sh-RNA组脂滴形态变小,数量明显减少。与sh-RNA组和对照组相比,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内p-PKC含量、p-ERK/ERK和p-MEK/MEK的比值以及p-HSL表达显著升高(P0.05)。同时,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内cAMP和PKA含量低于sh-RNA组和对照组(P0.05)。结论杨梅素的促脂解作用可能是通过激活PKCMEK/ERK信号通路,增加该通路中p-HSL的表达量来实现的;杨梅素同时可能对cAMP/PKA信号通路中相关因子的活性有一定的抑制作用。     

MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

亚麻木酚素对去卵巢大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的 探讨亚麻木酚素主要活性成分开环异落叶松树酯酚二葡萄糖苷（SDG）干预对雌性去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法 选取SPF级健康SD雌性10周龄大鼠50只,按照体重随机分为2组,分别为未去卵巢组、去卵巢组,去卵巢组又分为缺血再灌注假手术组、缺血再灌注组、SDG干预组、雌二醇干预组。SDG干预组采用蒸馏水溶解SDG在50 mg/kg.体重 剂量下灌胃,雌二醇干预组采用0.8 mg/kg.体重 剂量进行灌胃,其余组均采用等量蒸馏水灌胃,共灌胃60 d。采用western blot对Bcl-2、Bax、 BAD、p-BAD蛋白进行检测。结果 与缺血再灌注假手术组比较,缺血再灌注明显使去卵巢大鼠的Bcl-2/Bax水平降低、Bad/p-Bad水平升高,SDG干预后,去卵巢大鼠心肌组织Bcl-2/Bax水平增高、Bad/p-Bad水平降低。结论 SDG可以通过下调Bad/p-Bad水平以及上调Bcl2/Bax水平来发挥对心肌缺血再灌注损伤后的保护作用。     

杨梅素联合围脂滴蛋白对脂肪细胞脂解的影响

目的 研究杨梅素（Myric）与围脂滴蛋白（PLIN1）联合作用对3T3-L1 脂肪细胞脂解的影响。 方法 常规培养及诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,筛选出Myric 最佳干预浓度和时间。Myric 联合sh-RNA 干 扰载体对已诱导分化成熟的3T3-L1 脂肪细胞进行联合干预,实验共分为四组：联合干预组（Myric+sh-RNA）、 转染组（sh-RNA）、杨梅素组（Myric）和空白组。采用油红O 进行脂滴染色,观察脂滴形态;采用酶学方法 检测细胞中三酰甘油（TG）和甘油含量,了解细胞脂解情况;采用Western blot 检测脂肪细胞中PLIN1A、三 酰甘油脂肪酶（ATGL）和激素敏感性脂肪酶（HSL）的表达量。结果 以浓度为100 μmol/L 的Myric 干预 72 h 时,细胞内TG 含量最低,甘油含量最高,脂解效果最佳,与其他浓度和干预24 h 比较,差异有统计学意义 （P <0.05）。联合干预后,与Myric 组和sh-RNA 组比较,Myric+sh-RNA 组细胞内TG 含量下降,甘油含量升 高,脂滴形态变小,数量减少,差异有统计学意义（P <0.05）。同时,Myric+sh-RNA 组PLIN1A 蛋白表达量降低, ATGL 和HSL 蛋白表达量升高,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 Myric 联合PLIN1 可以更有效降低PLIN1 表达量,提高ATGL 与HSL 的表达量,从而提高脂解效率。     

基于复杂网络分析针刺治疗痉挛性斜颈的选穴规律

[目的] 运用复杂网络技术分析针刺治疗痉挛性斜颈的选穴规律。[方法] 检索1990年1月1日—2022年10月31日中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库（WANGFANG DATA）、维普中文科技期刊数据库（VIP）、中国生物医学文献数据库（CBM）、PubMed、EMbase及Web of Science收录的针刺治疗痉挛性斜颈相关文献。采用Excel 2019建立数据库,统计腧穴频次及频率、腧穴归经、腧穴分布部位情况,选用SPSS Modeler18.0软件建模进行关联规则分析;选用Gephi 0.9.2 软件进行复杂网络分析。[结果] 共纳入100 篇文献,包含123条针灸处方,涉及163个腧穴,腧穴总频数为1 291次。十四经穴使用最多,其次为经验效穴;风池、百会、合谷为针刺治疗痉挛性斜颈使用频数前3位的腧穴;督脉、足少阳胆经和足太阳膀胱经为使用频数前3位的经脉;所用腧穴多分布于头面颈项部。风池-阳陵泉、涌泉-劳宫、百会-印堂和水沟-劳宫-涌泉为针刺治疗痉挛性斜颈的高频穴对。[结论] 临床针刺治疗痉挛性斜颈疗法较为多样化,但多以局部取穴及医家经验为主,规范化操作及临床研究有待推广深入。     

高渗盐水液体复苏对重症急性胰腺炎的前瞻性多中心 随机对照临床试验

目的 探讨高渗盐水(HS)液体复苏对重症急性胰腺炎(SAP)的临床价值。方法 采用前瞻性、多中心、随机对照临床试验方法,纳入2018年8月至2022年2月期间3家医院重症医学科(ICU)收治的40例SAP患者,随机分为HS组(n=19)和林格液(LR)组(n=21),观察并比较两组患者液体复苏24 h后的血流动力学变化、前3 d液体复苏量、第7天脏器功能评分和炎症指标,治疗期间机械通气、血液净化治疗、血管活性药物和外科手术等治疗干预情况,胰腺坏死和继发感染发生率,以及ICU住院天数、总住院天数、住院病死率、不良反应发生率,并采用二元Logistic回归分析观察影响患者第7天脏器衰竭的相关因素。结果 HS和LR液体复苏24 h后,两组心率和血乳酸水平较基线值下降(P<0.05)。HS组较LR组前3 d所需液体复苏量更少(mL:12 287±3083 vs. 14 494±4475,P<0.05),第7天改良Marshall评分<2分比例更高(47.36%vs. 9.52%),急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分(分：4.83±3.22 vs. 7.9...     

针刺肩井穴治疗下肢疾患理论初探

肩井穴属足少阳胆经,为手足少阳经与阳维脉的交会穴,是临床上治疗颈肩疼痛的常用腧穴。通过多年临床学习发现,针刺肩井穴对于癔病性瘫痪、膝关节炎、坐骨神经痛、髂胫束综合征等下肢疾病的治疗也具有显著的效果。现从经络循行规律、下病上治理论、与阳维脉交会特点及生物力学四个方面,对针刺肩井穴治疗下肢疾患进行论述。     

MCHR1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建有效针对小鼠黑色素浓集激素受体1(melanin-concentrating hormone receptor 1,MCHR1)的shRNA(small hairpin RNA)真核表达载体。方法设计合成3条小鼠MCHR1基因的shRNA序列以及1条无同源性的shRNA序列作为阴性对照,与质粒重组构建sh-MCHR1干扰载体,并进行菌液PCR和DNA测序鉴定;脂质体法转染小鼠3T3-L1细胞后观察MCHR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果经菌液PCR及DNA测序鉴定表明各shRNA载体构建成功;转染3T3-L1细胞后,与空载体组相比,阴性对照组MCHR1 mRNA和蛋白的表达均无明显差异,但实验组3种干扰载体均能显著抑制MCHR1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且3种载体的抑制程度有一定的差异,以sh-MCHR1-1载体沉默效果最佳。结论 sh-MCHR1干扰载体构建成功,为进一步探究MCHR1与肥胖症之间的关系奠定了实验基础。     

沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素对3T3-L1脂肪细胞脂解的机制探究

目的 研究沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素(ISO)联合作用对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响及机制探讨。方法 sh-PLIN1干扰载体成功转染后,以浓度为10μM的ISO处理3T3-L1脂肪细胞。采用油红O进行脂滴染色,观察脂滴形态;采用酶学方法测定甘油三酯(TG)和甘油含量,了解细胞脂解情况;采用Western-Blot法检测脂肪细胞中围脂滴蛋白A(PLIN1A)、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)和其磷酸化蛋白(p-HSL)的表达水平;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞中环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)的浓度。结果 与空白组比较,ISO+sh-PLIN1组和ISO组脂滴变小,TG含量降低,甘油含量升高,有统计学意义(P<0.01)。同时,ISO+sh-PLIN1组和 sh-PLIN1组中ATGL 表达量均升高,有统计学意义(P<0.05)。ISO+sh-PLIN1转染组和ISO组中HSL、p-HSL、cAMP及 PKA 的表达量均上调(P<0.05)。结论 ISO促进脂解作用可能是cAMP/PKA通路介导,增加HSL和p-HSL的表达量来实现,而cAMP/PKA信号通路不能介导沉默PLIN1的促脂解作用。