慢病毒载体介导的bFGF基因转染兔BMSCs的实验研究

摘要： 目的 观察在体外培养条件下, 慢病毒载体介导的碱性成纤维细胞生长因子 （bFGF） 基因转染对兔骨髓基质干细胞 （BMSCs） 生物学特性的影响。方法 采用密度梯度离心法及贴壁筛选法获取 BMSCs; 利用慢病毒载体将 bFGF 基因转染到 BMSCs 中, 根据转染条件分为 bFGF 转染组、 空病毒组、 未转染组, 转染后分别对 3 组细胞的形态 bFGF mRNA 及蛋白表达、 细胞增殖情况、 细胞周期及碱性磷酸酶 （ALP） 活性进行观察。结果 采用密度梯度离心法和贴壁筛选法, 成功获得高纯度的 BMSCs。载有 bFGF 基因的慢病毒转染 BMSCs 后, 细胞形态无明显变化, 而 bFGF mRNA 与蛋白表达均明显增强、 细胞增殖曲线上移、 增殖期细胞比例增大、 ALP 活性明显增高, 与空病毒组及未转染组比较, 差异均有统计学意义 （P＜0.05)。结论 利用慢病毒载体将兔 bFGF 基因导入体外培养的 BMSCs, 目的基因获得稳定表达, 并且自身过表达的bFGF 可以促进BMSCs 的增殖与成骨分化。     

FGF-2基因转染rBMSCs构建组织工程骨移植修复兔股骨头缺血性坏死模型

[目的]评价FGF-2基因转染r BMSCs构建组织工程骨移植修复兔股骨头缺血性坏死的治疗效果。[方法]采用密度梯度离心联合贴壁法体外分离、培养rBMSCs,并检测与XACB的生物相容性。用FGF-2基因过表达慢病毒转染rBMSCs,并检测FGF-2基因在rBMSCs成功过表达后,与XACB复合培养构建组织工程骨。将成功建立的激素型兔股骨头缺血性坏死模型随机分为5组:A组(control)、B组(XACB)、C组(XACB+r BMSCs)、D组(XACB+rBMSCs+Lv-GFP)、E组(XACB+rBMSCs+Lv-FGF2/GFP),进行组织工程骨移植。术后3、6、12周分点取材,进行大体解剖观察、X线片检查、HE染色评估新骨形成面积,评价该组织工程骨修复兔股骨头缺血性坏死模型的治疗效果。[结果]采用密度梯度离心联合贴壁法可获取高度均一的rBMSCs,与XACB的生物相容性良好。FGF-2基因转染rBMSCs(MOI=100),其效率在95%以上,q PCR及Western Blot检测rBMSCs可稳定过表达FGF-2。组织工程骨植入术后6周,大体标本观察及X线片检查显示E组缺损区修复面积在80%以上,术后12周缺损区完全修复,其成骨作用明显强于其他各组,而且X线评分及新骨形成面积也均高于其他各组(P0.05)。[结论]FGF-2基因过表达慢病毒转染rBMSCs与XACB复合培养构建的组织工程骨可有效促进兔股骨头缺血坏死的修复效果。     

单边多功能外固定架骨搬运治疗胫骨创伤后 骨髓炎合并骨缺损的疗效分析

目的 探讨单边多功能外固定架骨搬运治疗胫骨创伤后骨髓炎合并骨缺损的治疗效果。 方法 选取贵州医科大学附属医院2010 年2 月-2016 年5 月收治的胫骨创伤后骨髓炎合并骨缺损11 例患者。 所有患者均首先进行彻底清创，感染控制后，采用单边多功能外固定架进行骨搬运治疗。记录骨搬运时间、 再生区固化时间、停泊点愈合时间及外固定架携带时间，统计患者并发症及外固定指数，采用Paley 评分标准 评估疗效。结果 所有患者均随访12 ～ 23 个月，平均16.1 个月。骨搬运时间70 ～ 132 d，平均101.9 d。停 泊点骨愈合时间5.5 ～ 13 个月，平均10.5 个月。再生区固化时间为5 ～ 12 个月，平均9.2 个月。外固定携带 时间6 ～ 13.5 个月，平均10.9 个月。外固定指数0.92 ～ 1.55 个月/cm，平均1.13 个月/cm。患者按Paley 评 分标准优7 例，良3 例，一般1 例。3 例钉道感染，2 例踝关节僵硬，3 例断端畸形愈合。结论 单边多功能外 固定架骨搬运是治疗胫骨创伤后骨髓炎骨缺损的有效方法，可彻底治愈骨感染。