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目的:从药用植物大叶蛇葡萄Ampelopsis megalophylla中克隆得到类纤维素合酶(Cellulose synthase-like,Csl)基因(Am Csl)全长,并对序列进行生物信息学分析。方法:根据大叶蛇葡萄A. megalophylla转录组测序数据得到的Am Csl基因序列设计特异引物,以嫩叶总RNA逆转录的c DNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增Am Csl基因全长,并进行TA克隆测序,利用多种软件对该序列进行生物信息学分析。结果:Am Csl全长c DNA为1 438 bp,包含1个561 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码186个氨基酸,蛋白质分子式为C_(1011)H_(1547)N_(233)O_(257)S_(10),理论相对分子质量为22. 40 k Da,理论等电点(PI)为7. 59,脂肪族指数(AI)为116. 88,存在跨膜区,无信号肽,可能定位于内质网膜,平均疏水系数为0. 670,不稳定指数为42. 56,属于疏水性不稳定蛋白,保守结构域包含了1个纤维素合成酶超家族结构域,二级结构以α-螺旋为主。氨基酸多序列比对和系统进化树分析发现,Am Csl与同科植物葡萄有较高的同源性。结论:获得了大叶蛇葡萄Am Csl基因的全长,对其进行了初步的生物信息学分析,为进一步研究大叶蛇葡萄多糖的积累和生物合成的调控奠定了必要基础。 相似文献
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目的探究蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L^-1)和不同干预时间(24、48、72 h)的AMP对SiHa细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258法、Annexin-FITC/PI法检测AMP对SiHa细胞凋亡的影响;流式细胞术检测细胞周期变化;Rh-123法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测AMP对SiHa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达的影响。结果AMP对SiHa细胞抑制率呈浓度和时间依赖性(P<0.05),最低IC 50值为40.33μmol·L^-1;随着AMP浓度的增加或作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05);当AMP浓度为80μmol·L^-1时,细胞周期阻滞在G 2/M期,呈一定的时间依赖性;线粒体膜电位随AMP浓度上升而下降;Bax/Bcl-2和Cleaved-caspase-3表达水平均上调,呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论AMP明显抑制SiHa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G 2/M期,可能通过线粒体途径诱导SiHa细胞凋亡。 相似文献
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目的 研究蛇葡萄素(ampelopsin, AMP)诱导人宫颈癌细胞SiHa发生自噬及其可能的作用机制。方法 单丹磺酰胺(monodansylcadaverine, MDC)染色法观察AMP对SiHa和C-33A细胞自噬的影响；透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察经AMP干预的SiHa和C-33A细胞超微结构的变化；自噬双标腺病毒转染(mRFP-GFP-LC3)法检测SiHa细胞自噬流强度；Western blot法对SiHa细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin-1、Atg13及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的表达情况进行检测。结果 MDC染色结果显示，随着AMP浓度的升高，代表自噬小体的亮绿色逐渐增多；TEM实验结果表明，与空白对照组相比，AMP组细胞线粒体嵴溶解消失，同时可见自噬小体和自噬溶酶体；mRFP-GFP-LC3实验结果提示，随着AMP浓度的升高，细胞内自噬小体和自噬溶酶体增多，提示自噬流增强；同时发现LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg13蛋白表达上调，P62、p-PI3K、p-AKT、... 相似文献
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