乙型肝炎病毒adw亚型基因组在大肠杆菌中的克隆

乙型肝炎是严重危害人类健康的一种疾病,其感染率相当高,尤其在亚洲及非洲地区某些国家更高。患者中有相当数量成了慢性患者,致使劳动力丧失,部分导致肝硬变、肝坏死和肝癌。乙型肝炎的病原是乙型肝炎病毒(HBV),存在于感染者的血浆或肝细胞中,在感染者的血浆中为42nm球状的Dane颗粒结构,HBV感染的免疫学标志有表面抗原(HBsAg)、“e”抗原(HBeAg)及其相应的抗体和抗核心抗原(HBcAg)的抗体。     

体外重组双功能质粒及其性质的研究——(一)P~(MM-1)的构建与功能表达

目前在遗传工程研究中,大多利用大肠杆菌作为分子无性繁殖的宿主。然而,近几年在开创新的无性繁殖宿主的研究中,枯草杆菌是颇有吸引力的。对枯草杆菌的遗传分析已有了较详细的研究,能转导和转化。它的recE_4突变株,是非缺失重组缺陷株,     

应用微细胞检测克隆基因的表达

在遗传工程研究中,克隆基因表达的检测是一个重要环节。如果克隆的基因DNA,已知它编码某一特殊的蛋白或某种RNA时,可以应用放射免疫化学方法、与相应的RNA探针杂交检测法、测定某种酶的活性及通过适当宿主之互补功能突变株的方法来测定。但当克隆的基因其表达蛋白功能不清楚时,应用微细胞系统检测是一个较为理想的方法。微细胞是某些细菌的突变株在生长期间产生的,它具有细胞壁、细胞膜、核蛋     

组织型纤溶酶原激活剂cDNA在大肠杆菌中的表达研究

将去除信号肽编码序列的组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）结构基因片段插入载体ｐＢＶ２２０的ＥｃｏＲＩ位点。目的基因受λＰ＿ＬＰ＿Ｒ启动子调控，通过温度调节诱导，ｔ－ＰＡ基因获得表达。电镜观察可见表达产物以包含体形式存在；表达量占非溶性菌体总蛋白的５％－８％。包含体产物经溶解及复性处理，可恢复活性；用溶纤维琼脂糖平板法、中和试验等方法证明了复性产物具有特异的ｔ－ＰＡ溶纤活性．     

PL启动子控制的乙型肝炎核心抗原基因在大肠杆菌中的表达

应用乙型肝炎核心抗原(HBcAg)对其相应的抗体(抗HBc)及抗HBcIgM的检测,对乙型肝炎的临床诊断、分型、流行病学调查以及对乙肝疫苗安全性鉴定等都具有重要意义。但因HBcAg来自乙肝病人的尸肝或富含Dane颗粒的病人血清中,因此来源困难,不能大量生产。1981年以来,国外报导了应用基因工程技术在大肠杆菌中合成HBcAg来检测抗HBc,取得较好结果。我们实验室于1982年构建了adw亚型HBV无性繁殖系。随后采用bla启动子使HBcAg在大肠杆菌中获得表达,并以这种抗原用ELISA方法检测乙肝病人血清中抗-HBc和抗HBcIgM,获得比较满意的效果。在此基础上,应用基因工程技术构建更高表达HBcAg的工程菌株,本文报告采用γ噬菌体PL启动子,使HBc基因在大肠杆菌中表达。     

重组人Shiga-EGF工程菌发酵工艺研究

目的研究表达重组人Shiga EGF(rhShiga EGF)融合蛋白工程菌的发酵条件。方法通过摇瓶试验优选适合工程菌生长、表达的培养基配方、pH及以乳糖替代IPTG作诱导剂等 ,并在 5L发酵罐上进行试验。 结果采用A3配方的培养基 ,在pH 6 .8条件下 ,以乳糖诱导表达 5h ,5L罐发酵工程菌菌密度 (A60 0nm)达到 15 ,菌体湿重 2 7g/L ,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的 15 %～ 2 0 %。结论确立以乳糖为诱导剂的发酵条件能降低目的蛋白制备成本     

重组人IL-4抗血清的特异性评价

白细胞介素 4(ＩＬ 4)在参与机体免疫调节方面有重要作用 ,临床上与过敏性哮喘、皮炎等疾病有关。美国Ｇｅｎ ｚｙｍｅ公司已研制开发ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＩＬ 4水平 ,但价格昂贵[1,2 ] 。本实验制备ｒｈＩＬ 4抗血清以应用于ＩＬ 4的生物学活性研究及临床检测ＩＬ 4水平。1　材料和方法1 1　动物及主要试剂　日本大耳白家兔 (雄性 2 0ｋｇ左右 ) ,由本院动物中心提供 ;ＩＬ 4细胞依赖株ＣＴＬＬ 2 /ＩＬ 4Ｒ由本室保存。免疫用ｒｈＩＬ 4抗原为本课题组制备 ;标准ｒｈＩＬ 4购于ＧＩＢＣＯ ;弗氏完全佐剂购自Ｓｉｇｍａ ;羊抗兔酶标抗血…     

类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展

类风湿性关节炎 (rheumatoidarthritis, RA)是一种慢性进行性的自身免疫性疾病, 以关节滑膜炎及对称性、破坏性的关节病变为主要特征。RA的发病率在我国约为 0. 4%, 全球为 0. 5% ~1. 0%。半个世纪以来, 人们提出多种假说来尝试解释RA, 但是因为RA的发病机制过于复杂, 自 20世纪初的免疫超敏反应被确认时, 关于RA的发病机制一直处在不断的发展变化中。尽管RA的发病机制至今尚未明确, 但许多针对其特异淋巴细胞或循环分子的各种制剂已初步显示出有效性, 预示着对RA的治疗具有广阔的前景。我们拟对RA的发病机制及其治疗方法的研究…     

肋骨骨髓树突状细胞的诱导及在肿瘤免疫治疗中的应用前景

树突状细胞 (ＤＣｓ)是专业性抗原递呈细胞 ,在肿瘤免疫中起重要作用。在临床实验研究中 ,大多利用患者外周血干细胞诱导扩增ＤＣｓ,我们从肾癌患者手术切除的肋骨骨髓中获得ＤＣｓ ,对诱导方法及ＤＣｓ特性鉴定报告如下。材料与方法　ＧＭ ＣＳＦ为美国先灵葆雅药厂产品 ;ＩＬ 4和ＴＮＦ α由军事医学科学院生物工程所惠赠 ;ＣＤ80、ＣＤ86和ＣＤ1ａ纯化单抗为Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司产品 ;标记抗体ＣＤ45、ＣＤ14、ＣＤ4、ＣＤ8、ＣＤ3、ＨＬＡ ＤＲ为Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ公司产品。树突细胞的获得和培养 :从肋骨冲出的细胞 ,经密度梯…     

人sTNFR II-IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母菌中的表达及其产物分析

目的:在毕赤酵母菌中表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白。检测融合蛋白是否形成二聚体,并对其N-糖链进行分析。方法:从人淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增目的基因sTNFRII与IgG Fc,然后利用重叠延伸PCR得到嵌合体基因sTNFRII-IgG Fc,并将其插入pPIC9载体中。以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行克隆与表达。采用ELISA筛选高表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白的重组毕赤酵母菌株,对融合蛋白通过还原和非还原SDS-PAGE分析其二聚体结构,采用L929细胞检测融合蛋白抗TNF-α的生物学活性,最后利用荧光辅助糖电泳(FACE)分析融合蛋白的N-糖链。结果:成功地建立了可分泌表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白的重组酵母菌株,摇瓶培养后融合蛋白的表达量为2mg/L。SDS-PAGE和Western blot表明,该融合蛋白能自然形成二聚体结构;可抑制TNF-α对L929细胞的杀伤作用,其中和5×104U/LTNF-α的EC50为170μg/L。FACE分析融合蛋白N-糖链的大小为11~13个糖残基。结论:在毕赤酵母菌中成功地表达了sTNFR II-IgG Fc融合蛋白,为在毕赤酵母菌中表达其他的Fc融合蛋白和抗体提供了参考。