基于靶点人源化小鼠的PD-1/CTLA-4双特异性抗体及其IgG1亚型的抗癌活性评价

目的：构建基于靶点人源化小鼠的程序性死亡受体-1(PD-1)/细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)双特异性抗体（BsAb）并对BsAb及其IgG1亚型进行抗癌活性评价和探讨其潜在的作用机制。方法：构建和扩增并纯化不同结构及抗体亚型的PD-1/CTLA-4抗体BsAb1、BsAb2和BsAb3,对纯化BsAb进行靶点亲和力检测,采用荧光素酶报告基因实验和FCM检测抗体的生物学活性。基于B-hPD-1-hPD-L1-h CTLA-4人源化小鼠的MC38-hPD-L1结肠癌细胞移植瘤模型对BsAb进行体内药效评估,并通过移植瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）分析PD-1/CTLA-4抗体的作用机制。结果：成功制备的BsAb1、BsAb2及BsAb3对靶点PD-1和CTLA-4均有较强的特异性亲和力、对靶点通路均有不同程度的阻滞活性,均明显抑制移植瘤的生长（P<0.05或P<0.01）。IgG1亚型BsAb体内药效更优（P<0.01）,TIL分析发现BsAb2-IgG1明显增加了CTL百分率（P<0.05）,显著降低了肿瘤浸润Treg细胞百分率（P<0.01...     

麻疹疫苗再接种后的细胞免疫力

一些临床经验表明细胞介导免疫在麻疹感染的恢复中是关键的。作者应用固相淋巴细胞增殖试验和空斑减少中和(PRN)试验对麻疹疫苗再接种者检测了抗原特异性细胞和体液免疫应答。     

通过P基因的单链构象多态性鉴别腮腺炎疫苗株和野毒株

聚合酶链反应(PCR)扩增的DNA片段的单链构象多态性(PCR-SSCP)分析已成功地用于快速检测一些基因的突变。本文作者采用PCR-SSCP分析法不仅可用于各腮腺炎疫苗株之间的鉴别,还可以用于疫苗株和野毒株的鉴别。 将4个腮腺炎疫苗株和12个从具有腮腺炎或脑膜炎症状的腮腺炎患者的咽拭子或脑脊液中分离出来的野毒株在培养细胞中传代,传代次数不超过5次。提取病毒特异性RNA,反转录成cDNA后用P9和P10引物     

用优化RT-PCR高度敏感地检测血液样品中的病毒RNA基因组

聚合酶链反应（PCR）是扩增小量 DNA和RNA的最有力的工具,并广泛应用于核酸研究领域。然而RNA很容易因RNA酶的污染而降解,并且,在进行PCR扩增之前.RNA必须用逆转录酶反转录成 DNA,因此,RNA检测的敏感性一般比DNA低两个数     

转基因小鼠在病毒学研究中的应用

本文以乙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒和脊髓灰质炎病毒为例着重论述了转基因小鼠在病毒学研究中的应用,综述了近几年来以转基因小鼠为工具的病毒学研究成果。     

昆虫细胞表达的重组流感血凝素疫苗的免疫效果评价

应用DNA重组技术可以快速克隆流感病毒血凝素(HA)基因并使其在真核系统中有效地表达.应用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达的HA蛋白,对青年人接种后,可诱生抗体并预防感染.本文作者对这一重组蛋白在老年人中的免疫效果进行了评价.用表达流感病毒A/北京/32/92(H3N2)HA基因cDNA全序列的重组杆状病毒感染昆虫细胞产生的HA抗原纯度在99%以上,该重组抗原称为rHAO.将rHAO疫苗溶于PBS使接种量分别为15、45或135μg/0.5ml,同时设立三价亚病毒疫苗和安慰剂对照.     

人巨细胞病毒糖蛋白gp52的原核表达及初步应用

目的探讨以表达人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）中抗原性较强的蛋白片断代替全病毒抗原建立ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒的可行性。方法以聚合酶链反应扩增ＨＣＭＶ聚合酶辅助糖蛋白（ｇｐ５２）的有效抗原基因序列，导入带有高效转录启动子ｐＴｒｃ和６个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中表达，经金属鏊和亲和层析（ＩＭＡＣ）法纯化后，用酶联免疫吸附法检测新生儿血清，并与全病毒抗原检测进行比较。结果重组ｇｐ５２占大肠杆菌总蛋白的４０％，ＩＭＡＣ纯化后纯度达９４．５％。在４３份疑似ＨＣＭＶ感染的新生儿血清中阳性检出率为５１．２％，而用全病毒抗原检测阳性率只有２５．９％。结论ＨＣＭＶｇｐ５２蛋白具有良好的抗原性，可用于建立新一代的检测试剂盒。     

人巨细胞病毒糖蛋白gp52的原核表达及初步应用

目的 探讨以表达人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）中抗原性较强的蛋白片断代替全病毒抗原建立ＨＣＭＶ ＩｇＭ检测试剂盒的可行性。方法 以边反应扩增ＨＣＭＶ聚合酶辅助糖蛋白（ｇｐ５２）的有效抗原基因序列，导入带有高效转录启动子ｐＴｒｃ和６个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中表达，经金属鏊和亲和层析（ＩＭＡＣ）法纯化后，用酶联免疫吸附法检测新生儿血清，并与全病毒抗原检测进行比较。结果 重组ｇｐ５     

采用抗体捕获放射免疫法检测唾液中的麻疹、腮腺炎和风疹抗体

作者采用抗体捕获放射免疫法来检测唾液标本中的麻疹、腮腺炎和风疹病毒特异性IgM(MACRIA)和特异性IgG(GACRIA),并认为本法可替代血清学诊断。 从已确诊的63例麻疹病人、19例腮腺炎病人和150例风疹病人中采集唾液标本。发病第1周,在92％的麻疹病人,75％的腮     

极性小分子抗原包被条件的摸索

极性小分子抗原包被条件的摸索沈月雷邱平王剑锋戴斌李德富（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）当抗原的分子量较小和／或极性较强时，蛋白往往不容易被包被在酶标板上［１］。因为在常规包被过程中，蛋白主要是通过疏水作用结合在酶标板的表面［２］。为了提高...