重组水蛭素Ⅲ口服乳糜微粒的研究

为了实现重组水蛭素Ⅲ口服给药途径并验证其药效.将其制成乳糜微粒,比较了3种制备方法,确定了逆相蒸发法为rHV3乳糜微粒的最佳制备方法.优化了制备条件,通过正交实验确定了rHV3乳糜微粒配方,制得的rHV3乳糜微粒的包封率为(65.08±1.96)%.在-20℃保存条件下rHV3乳糜微粒稳定性良好.药效学实验结果表明,口服rHV3乳糜微粒具有良好的抗凝和抗栓作用.     

重组水蛭素Ⅲ的中试工艺研究

从大肠杆菌中大规模纯化重组水蛭素Ⅲ,进行重组水蛭素Ⅲ中试发酵工艺和纯化中试工艺研究,连续大量纯化3批,并对纯化终产品进行鉴定。通过菌种活化,一级、二级种子液制备,30L发酵罐补料-批式发酵水蛭素产量达到6000ATU/ml,发酵液经还原性SDS-PAGE分析表明在14000u处有单一条带,为重组水蛭素Ⅲ二聚体。经大孔树脂层析、DEAE-纤维素层析、制备型反相高效液相层析等3步纯化后重组水蛭素Ⅲ的比活达8270ATU/mg。经分析型反相高效液相色谱分析,纯度达95%以上,总收率达到39%以上。通过实验建立了稳定的发酵和纯化工艺流程。