ADH2等位基因缺失的酿酒酵母杂合子的构建

目的破坏酿酒酵母乙醇脱氢酶2基因（ADH2）构建ADH2等位基因缺失的菌株。方法设计一对嵌合引物通过PCR从pUG6质粒中扩增赋予G418抗性的异源显性Kan^r标记产生ADH2基因破坏序列组件。将这个序列组件转化双倍体酵母菌株通过同源重组由loxP-KanMX-loxP替换其中的一个ADH2产生kan^＋转化子。经G418筛选及菌落PCR验证转化子。结果获得了一株缺失一个ADH2等位基因的遗传稳定杂合子菌株。结论PCR介导的基因破坏技术是构建酿酒酵母杂合子菌株的有效手段。     

鲍鱼菇子实体多糖的纯化及其免疫学作用

目的从鲍鱼菇(Pleurotus abalonus)子实体中分离纯化均一组分的多糖,初步研究该多糖对小鼠的抑瘤作用和免疫功能的影响。方法粗多糖经热水提取,95%乙醇沉淀,Sevag法去蛋白,DEAE-sephadex A-25柱层析纯化,获得均一组分的鲍鱼菇子实体多糖PPA-1。以瘤重大小判断抑瘤效果,以巨噬细胞吞噬功能检测非特异性免疫功能,以血清溶血素IgM的水平及迟发型超敏反应(DTH)检测特异性免疫功能。结果PPA-1≥75 mg/kg对小鼠S180移植性肿瘤有抑制作用(P<0.01);PPA-1≥50 mg/kg能提高荷瘤小鼠的脾指数(P<0.05、P<0.001),能提高正常小鼠巨噬细胞吞噬率(P<0.05、P<0.01)、吞噬指数(P<0.05、P<0.001)及血清溶血素IgM的水平(P<0.05);PPA-1≥75 mg/kg能增强正常小鼠迟发型超敏反应(P<0.05、P<0.001)。结论一定剂量的鲍鱼菇子实体多糖PPA-1能够抑制小鼠S180肿瘤生长,能够增强小鼠的非特异性免疫及特异性的体液免疫和细胞免疫功能。     

高密度流加放大培养Schizochytrium sp. FJU-512生产DHA

以提高裂殖壶菌生物量,油脂产量和DHA产量为目的,研究从15 L发酵罐到100 L发酵罐流加补料放大培养条件。根据单位体积液体中搅拌功率相同的准则,进行主要控制参数———搅拌转速的理论放大计算。由裂殖壶菌15 L发酵搅拌转速为220～465 r/min,通气量为1.0～2.0 L/L.min(vvm),确定了100 L发酵罐放大的理论转速为150～310 r/min,通气量为1.0～2.0 vvm。通过实验研究,成功实现了由15 L发酵罐至100 L发酵罐的裂殖壶菌放大培养,裂殖壶菌的生物量、油脂产量和DHA产量分别由原来的103.26,51.50 g/L和19.44 g/L增加到110.75、50.77和22.32 g/L。     

DHA的生理功能及其生物来源

二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid，简称DHA）因其特定的结构与多种重要的生理功能倍受人们关注，已成为研究的一大热点。本文就目前国内外对DHA生理功能的研究进展加以综述，并总结了其主要的生物来源及研究现状。     

低温胁迫对裂殖壶菌DHA生物合成及SOD表达的影响

培养温度对裂殖壶菌产油脂中二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)含量以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)表达水平均有重大影响。细胞干重测定和气相质谱联用法检测了不同温度下裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512的生长和脂肪酸组成,荧光定量PCR法比较各温度下SOD mRNA表达量。结果表明,低温有利于DHA的合成,低温胁迫下SOD mRNA表达量最高。探讨裂殖壶菌耐低温胁迫的机制可能是低温增加培养基中溶解氧水平,氧化应激造成SOD的高表达,加快活性氧自由基的清除,促进DHA等不饱和脂肪酸的积累,增强膜的流动性以适应低温环境。其次,从DHA高产菌株裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512 EST文库筛选出SOD基因,并应用生物信息学分析该氨基酸序列。     

Mucor sp.EIM-10 C18-Δ~(15)脂肪酸脱氢酶启动子区域的克隆和功能鉴定

应用LA-PCR技术,扩增得到1291bp的Mucor sp.EIM-10Δ15脂肪酸脱氢酶启动子区域的单一产物。对该产物测序,经序列比对分析,发现该序列具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、GC盒等元件。根据本中心已构建的质粒PYD15PMCD15和质粒PYGFP,构建启动子功能鉴定阴性质粒PYMCD15,将扩增得到的Δ15脂肪酸脱氢酶启动子区域序列连接到PYMCD15中,构建重组表达质粒PYMD15PMCD15,转化Saccharomyces cerevisiae尿嘧啶营养缺陷型INVSc1。发酵诱导后GC/MS分析,结果表明Δ15脂肪酸脱氢酶启动子区域能够启动Mucor sp.EIM-10Δ15脂肪酸脱氢酶基因的表达。