2型糖尿病患者外周血白细胞TLR2的表达及其功能的研究

目的探讨2型糖尿病患者外周血单个核细胞TLR2介导的免疫功能。方法应用流式细胞术检测35例2型糖尿病患者和30名对照人群外周血淋巴细胞、单核细胞、粒细胞TLR2的表达。将两组人群外周血单个核细胞进行体外分离、培养,经TLR2配体HKLM刺激后,检测TLR2的表达及TNF-α的分泌。结果对照组外周血淋巴细胞、单核细胞TLR2表达为(1.75±0.50)%、(28.38±13.92)%低于糖尿病组的(2.12±0.84)%、(35.09±12.69)%(P0.05)。HKLM刺激后,对照组淋巴细胞、单核细胞TLR2表达为(7.76±2.31)%、(58.74±15.76)%与糖尿病组TLR2表达(4.67±1.54)%、(56.32±16.34)%均有增加(P0.05);HKLM刺激前后,经配对t检验分析,对照组淋巴细胞、单核细胞TLR2表达的上调高于糖尿病组(P0.05)。用HKLM刺激对照组、糖尿病组单个核细胞TNF-α的分泌为(83.67±40.87)pg/mL、(40.82±32.52)pg/mL,高于用PBS刺激单个核细胞的(14.32±9.87)pg/mL、(18.36±11.27)pg/mL(P0.05);对照组TNF-α分泌的增加高于糖尿病组(P0.05)。结论 2型糖尿病患者外周血单个核细胞TLR2表达升高,但其介导的细胞免疫功能受损。     

槲皮素下调HSP27蛋白的表达诱导人胶质母细胞瘤T98G凋亡

目的：探讨天然药物槲皮素对人胶质母细胞瘤的生物效应及机制。方法：将人胶质母细胞瘤细胞系T98G用槲皮素治疗,采用MTT法检测治疗后T98G细胞的增殖抑制情况;通过流式细胞术检测槲皮素治疗后,T98G细胞的凋亡情况并用western blot方法检测细胞活化caspase-3 (cleaved caspase-3)的表达和热休克蛋白27(HSP27)的表达;将T98G细胞的HSP27基因用特异性HSP27 siRNA沉默后再用槲皮素治疗,检测槲皮素对T98G细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应。结果：槲皮素显著抑制T98G细胞的增殖且呈剂量和时间依赖性;槲皮素可诱导T98G细胞的凋亡和caspase-3的活化;槲皮素治疗后,T98G细胞的HSP27表达显著下降,当用HSP27 siRNA转染T98G细胞后, 槲皮素对T98G细胞的凋亡诱导活性显著提高。结论： 槲皮素有良好的抗神经胶质母细胞瘤的生物活性,其抗肿瘤效应的机制可能和下调HSP27蛋白有关。     

青蒿琥酯增强吉西他滨的抗胰腺癌活性

目的 探讨青蒿琥酯对吉西他滨化疗胰腺癌的辅助治疗作用并研究其机制。方法 MTT法检测胰腺癌细胞系Capan-2在青蒿琥酯和不同浓度吉西他滨处理下的细胞活力。Western blot检测吉西他滨和青蒿琥酯对Capan-2细胞FOXO1、Noxa、Bim表达水平,细胞色素C、Smac/DIABLO从线粒体中的释放量及caspase-9、caspase-3活化水平的影响。流式细胞术检测Capan-2细胞的线粒体膜电位和凋亡率。结果 青蒿琥酯辅助治疗明显提高吉西他滨对Capan-2细胞的杀伤活性。青蒿琥酯处理能显著促进Capan-2细胞FOXO1的表达,转染FOXO1小干扰RNA （FOXO1 siRNA）后,青蒿琥酯对吉西他滨的辅助治疗效果受到明显抑制。青蒿琥酯联合吉西他滨能显著诱导Capan-2细胞中Noxa和Bim的过表达,线粒体膜电位的降低,细胞色素C、Smac/DIABLO的释放,caspase-9、caspase-3的活化及凋亡的发生。转染FOXO1siRNA后,青蒿琥酯联合吉西他滨对Capan-2细胞的凋亡诱导途径受到显著抑制。结论 青蒿琥酯可上调FOXO1的表达,增强吉西他滨对胰腺癌细胞的凋亡诱导活性。     

黄芩素对顺铂抗宫颈癌作用影响的实验研究

目的观察黄芩素对顺铂抗宫颈癌作用的影响。方法实验分为对照组、黄芩素组、顺铂组、顺铂+黄芩素组和顺铂+黄芩素+长寿因子1(SIRT1)质粒组。各组细胞处理完毕后,噻唑蓝(MTT)实验检测宫颈癌细胞系Hela细胞活力;流式细胞术检测Hela细胞凋亡;Western blot实验检测Hela细胞中SIRT1、p53、乙酰化p53、p53上调凋亡调节因子(Puma)的表达水平及半胱天冬酶3(caspase-3)的活化水平。结果顺铂+黄芩素组对Hela细胞活力抑制率和凋亡诱导率均显著高于顺铂组[(66.3±5.7)%比(18.1±1.4)%,(38.4±3.2)%比(10.4±0.9)%,P均0.05]。顺铂+黄芩素组SIRT1表达水平显著低于顺铂组,同时顺铂+黄芩素组p53乙酰化水平和表达水平、Puma表达水平及caspase-3活化水平均显著高于顺铂组。顺铂+黄芩素+SIRT1质粒组Hela细胞活力抑制率和凋亡诱导率显著低于顺铂+黄芩素组[(25.7±2.1)%比(66.3±5.7)%,(14.5±1.1)%比(38.4±3.2)%,P均0.05]。结论黄芩素通过SIRT1/p53途径增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性。     

2型糖尿病患者外周血白细胞toll样受体表达的临床意义

目的通过2型糖尿病患者外周血淋巴细胞、单核细胞、粒细胞TLR2和TLR4表达及其介导分泌的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的检测,探讨2型糖尿病患者先天免疫功能。方法(1)应用流式细胞术检测35例2型糖尿病患者和30例对照人群外周血白细胞TLR2、TLR4的表达,并分析空腹血糖、果糖胺、糖化血红蛋白含量;(2)将各组人群外周血单个核细胞体外进行分离、培养、TLR配体刺激后,ELISA法检测培养上层液的IL-6、TNF-α含量。结果(1)糖尿病组外周血淋巴细胞、单核细胞TLR2表达(2.12±0.84)%、(35.09±12.69)%,TLR4表达(10.10±1.64)%、(62.85±6.63)%均高于对照组(1.75±0.50)%、(28.38±13.92)%;(9.07±1.60)%、(58.97±6.39)%(P0.05);(2)配体刺激前后,糖尿病组TNF-α(18.36±11.27、83.67±40.87)(pg/ml)均高于对照组(14.32±9.87、40.82±32.52),而刺激后糖尿病组IL-6(24.39±11.78)(pg/ml)高于对照组(17.67±10.84)(pg/ml);(3)糖化血红蛋白、果糖胺与单核细胞TLR2、TLR4的表达,以及配体刺激后IL-6、及TNF-α的含量成正相关(P0.05)。结论2型糖尿病患者外周血白细胞存在先天性免疫相关受体TLR表达的改变,TLR的活化及其介导的炎症因子的释放可能与糖尿病患者容易发生感染有关。     

二氢青蒿素抑制ATF2的磷酸化提高胃癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的探讨二氢青蒿素与5-氟尿嘧啶协同抗胃癌效应的机制。方法 MTT实验检测胃癌细胞系BGC-823的细胞活力;流式细胞术检测BGC-823细胞的凋亡;Western blot实验检测BGC-823细胞中ATF2、磷酸化ATF2、Bcl-xl的表达水平及细胞色素c的释放水平和Caspase-3活化水平。结果 5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素对BGC-823的细胞活力抑制率[(67.1±5.5)%]和凋亡诱导率[(37.3±2.9)%]均显著高于5-氟尿嘧啶单治疗组[细胞活力抑制率:(18.9±1.5)%,P0.05];凋亡诱导率[(9.5±0.9)%,P0.05]。5-氟尿嘧啶+二氢青蒿素+ATF2质粒组BGC-823的细胞活力抑制率[(26.5±2.1)%]和凋亡诱导率[(14.9±1.1)%]显著低于5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素组(P0.05)。5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素组的ATF2磷酸化水平和Bcl-xl表达水平均显著低于5-氟尿嘧啶单治疗组,同时5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素治疗组的细胞色素c释放水平及Caspase-3活化水平均显著高于5-氟尿嘧啶单治疗组。结论二氢青蒿素通过抑制ATF2的磷酸化增强5-氟尿嘧啶对胃癌细胞的杀伤活性。     

半夏内生菌的分离及抗菌活性筛选

目的：分离三叶半夏和掌叶半夏的内生菌,并对分离的内生菌进行抗菌活性筛选。方法：采用组织块分离法从不同品种半夏中分离内生菌,并对分离所得内生菌进行初步鉴定。利用对峙法进行抗菌活性筛选,获得具有抑菌活性内生菌。结果：共分离得到内生菌39株,其中内生细菌15株、内生真菌24株。对峙法筛选实验结果表明：5株菌对大肠杆菌具有较强拮抗性,5株菌对金色葡萄球菌有较强拮抗性,4株菌对枯草杆菌有较强拮抗性。结论：半夏含有丰富的内生菌菌种资源,实验表明多株菌具有代谢抑菌活性物质的特性,在获取天然药用生物活性成分方面存在很大潜能。     

HCY HDL-C比值与急性缺血性脑卒中的关联性分析

目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者同型半胱氨酸、高密度脂蛋白胆固醇及其比值的临床价值。方法 回顾性分析浙江省中医院2021年3月至2020年2月AIS确诊患者56例(AIS组),同期健康体检者102例(对照组)的血生化指标,首先评估观察对象的组间可比性,其次计算同型半胱氨酸、高密度脂蛋白胆固醇比值(同高比值),单因素分析血生化指标及同高比值在两组之间的差异性,最后多因素logistic回归分析血生化指标以及同高比值的临床价值。结果 两组观察对象具有可比性,两组观察对象的甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇差异无统计学意义(P>0.05);AIS组高血压患病率和空腹血糖明显高于对照组(P<0.01),总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇明显低于对照组(P<0.01),血清同型半胱氨酸水平高于对照组(P<0.05),AIS组同高比值则明显高于对照组(P<0.01);回归分析显示总胆固醇和同型半胱氨酸差异无统计学意义(P>0.05),葡萄糖、高密度脂蛋白胆固醇和同高比值差异具有统计学意义(P<0.05),其中葡萄糖OR值1.515、同高比值OR值1.216,高...     

黄芩素通过SIRT1/p53途径提高宫颈癌细胞对顺铂的敏感性

目的: 探讨中药活性成分黄芩素是否对顺铂有协同抗宫颈癌效应并研究其机制。方法: MTT实验检测宫颈癌细胞系Hela的细胞活力;流式细胞术检测Hela细胞的凋亡;western blot实验检测Hela细胞中SIRT1、p53、乙酰化p53、Puma的表达水平及caspase-3的活化水平。结果: 顺铂联合黄芩素对Hela的细胞活力抑制率(66.3±5.7)和凋亡诱导率(38.4±3.2)显著高于顺铂单治疗组的的细胞活力抑制率(18.1±1.4,P<0.05)和凋亡诱导率(10.4±0.9,P<0.05)。顺铂联合黄芩素治疗组的SIRT1表达水平显著低于顺铂单治疗组,同时顺铂联合黄芩素治疗组的p53乙酰化水平和表达水平、Puma表达水平及caspase-3活化水平均显著高于顺铂单治疗组。另外,顺铂+黄芩素+SIRT1质粒组Hela的细胞活力抑制率(25.7±2.1)和凋亡诱导率(14.5±1.1)显著低于顺铂联合黄芩素组Hela的细胞活力抑制率(66.3±5.7,P<0.05)和凋亡诱导率(38.4±3.2,P<0.05)。结论: 黄芩素通过SIRT1/p53途径增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性。     

雷公藤红素通过上调PTEN的表达提高顺铂对Hep3B干细胞的凋亡诱导活性

目的 探讨雷公藤红素是否能提高顺铂对肝癌干细胞的凋亡诱导活性并研究其机制.方法 MTT法检测雷公藤红素对顺铂杀伤Hep3B肿瘤干细胞能力的影响.Western blot方法检测雷公藤红素对Hep3B肿瘤干细胞中PTEN表达水平及PI3K/AKT磷酸化水平的影响.应用免疫共沉淀检测Hep3B肿瘤干细胞中Bad与Bcl-2和Bcl-xl的相互作用.流式细胞术检测Hep3B肿瘤干细胞的凋亡水平.结果 雷公藤红素＋顺铂组Hep3B肿瘤干细胞的细胞活力抑制率显著高于雷公藤红素单治疗组和顺铂单治疗组.雷公藤红素处理可诱导Hep3B肿瘤干细胞PTEN蛋白的上调从而抑制PI3K和AKT磷酸化并促进Bad与Bcl-2和Bcl-xl的结合.雷公藤红素＋顺铂组Hep3B肿瘤干细胞的凋亡诱导率和caspase-3的活化水平显著高于顺铂组和雷公藤红素＋顺铂＋PTEN siRNA.结论 雷公藤红素通过PTEN/PI3K/AKT/Bad途径提高顺铂对Hep3B肿瘤干细胞的凋亡诱导活性.