牙髓干细胞来源胞外囊泡通过调节miR-100-5p抑制γ射线所致小鼠骨髓细胞FDC-P1凋亡

目的 探讨牙髓干细胞来源胞外囊泡(DPSC-EV)对γ射线导致小鼠骨髓细胞凋亡的抑制作用及机制。方法 使用超速离心法从DPSC中分离DPSC-EV,用Western印迹法鉴定其表面标志物,用纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测DPSC-EV颗粒数目及粒径大小。细胞处理：(1)⁶⁰Co γ射线照射小鼠骨髓细胞FDC-P1,单次照射剂量分别为0,2和6 Gy,实验时间为照射后24和48 h;(2) FDC-P1细胞经⁶⁰Co γ射线2和6 Gy照射后立即加入DPSC-EV(终浓度5×10¹¹L^-1)干预24 h;(3) FDC-P1细胞转染微RNA(miRNA)抑制剂后进行2 Gy照射并立即加入DPSC-EV(终浓度5×10¹¹L^-1)干预24 h;(4) FDC-P1细胞转染miRNA模拟物后进行2 Gy照射,继续培养24 h。用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹法检测胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和活化PARP蛋...     

线粒体示踪体系的建立及验证

目的 通过构建稳定表达线粒体荧光报告系统的牙髓干细胞（DPSC）建立线粒体示踪体系,并采用该示踪体系研究间充质干细胞（MSC）向辐射损伤细胞输送线粒体。方法 (1)构建质粒pSIN-EF1α-COX8A-DsRed2（简称COX8A-DsRed2）,并进行基因测序和PCR鉴定;COX8A-DsRed2用293T细胞包装获得慢病毒（Lv-COX8A-DsRed2）并感染DPSC,采用荧光显微镜观测红色荧光蛋白DsRed2在DPSC线粒体的稳定表达（DPSC-COX8A-DsRed2）。(2)在DPSC-COX8A-DsRed2中使用荧光染色法观察DsRed2荧光蛋白与线粒体膜受体线粒体外膜转位酶20(TOMM20)和线粒体示踪试剂MitoTracker Green的共定位。(3)采用10 Gy X射线照射大鼠小肠隐窝上皮细胞系IEC-6建立细胞辐射损伤模型,并使用5(6)-羧基二乙酸荧光素N-琥珀酰亚胺酯（CFSE）荧光染料标记IEC-6细胞;于照射后,立即加入DPSCCOX8A-DsRed2,继续培养24 h,荧光显微镜观察DPSC-COX8A-DsRed2能否向辐照受损细胞递送线粒体...     

溶瘤腺病毒联合阿特珠单抗对EMT-6乳腺癌原位移植瘤模型小鼠的治疗作用

目的 研究溶瘤腺病毒rAd.Null联合免疫检查点抑制剂阿特珠单抗(atezolizumab)对三阴性乳腺癌(TNBC)的治疗作用。方法 健康雌性Balb/c小鼠第3～4脂肪垫接种EMT-6乳腺癌细胞(第0天，D0)，制备EMT-6乳腺癌原位移植瘤小鼠模型。D7将模型小鼠随机分为移植瘤对照组、rAd.Null组、阿特珠单抗组和rAd.Null+阿特珠单抗(联合治疗)组。D7和D10,rAd.Null和联合治疗组瘤内注射rAd.Null 100μL(2.5×10¹⁰VPs);D8,D11和D14，阿特珠单抗和联合治疗组ip给予阿特珠单抗10 mg·kg^-1。D26将小鼠处死，剥离完整移植瘤组织，测量移植瘤体积和瘤重，计算抑瘤率；HE染色观察移植瘤组织病理变化。D26同时收集外周血和脾，免疫组织化学染色法观察移植瘤组织CD8⁺T淋巴细胞和活化胱天蛋白酶阳性细胞即凋亡细胞百分比，流式细胞术分析小鼠外周血和脾中CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞及脾调节性T细胞(Treg)百分比，实时荧光定量P...