铜绿假单胞菌gshb基因突变对MexXY-OprM主动外排泵表达的影响

目的:研究铜绿假单胞菌谷胱甘肽合成酶基因(gshb)突变体对MexXY-OprM外排泵表达的影响.方法:运用同源重组技术构建铜绿假单胞菌的谷胱甘肽合成酶基因(gshb)突变体,将连有MexXY-OprM外排泵启动子的pMS402质粒电转化到此突变体中,通过pMS402质粒上的Lux报道子发光值大小检测MeXY-OprM外排泵的表达变化情况.结果:MexXY-OprM外排泵的表达在谷胱什肽合成酶突变体中显著降低.结论:铜绿假单胞菌中的谷胱甘肽对MexXY-OprM的表达具有促进作用,这将为进一步探讨MexXY-oprM的分子机制提供理论依据.     

SP-TAT-Apoptin融合蛋白对HepG2细胞周期的影响

目的: 研究SP-TAT-Apoptin融合基因诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和细胞周期阻滞, 探讨其用于肝癌治疗的可能性.方法: 通过DNA重组技术, 以pcDNA3.1/Apoptin质粒11为模板, 构建SP-TAT-Apoptin融合基因 plenti6-V5-D-TOPO真核表达载体.用SP-TAT-Apoptinplenti6-V5-D-TOPO真核表达载体转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO), 转染后Blasticidin霉素进行筛选, 并进行鉴定得到稳定表达SP-TAT-Apoptin的CHO细胞株.收集含有TAT-Apoptin融合蛋白的筛选细胞培养上清, 用于HepG2细胞培养.于共培养后的不同时段收集HepG2细胞, 流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期.结果: 用包含SP-TAT-Apoptin融合基因的plenti6-V5-D-TOPO真核表达载体瞬时转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO), 成功筛选出稳定表达SP-TAT-Apoptin融合蛋白的CHO细胞, 收集细胞培养上清, 继续用于HepG2细胞培养, 可观察到HepG2细胞阻滞于G1期并引起细胞凋亡.结论: SP-TAT-Apoptin融合表达可引起HepG2细胞的细胞周期G1期阻滞.     

基因融合技术及其应用

随着基因组学的发展和完善,进而推动了科学家们对后基因组学的研究.基因融合技术作为一种快速、便捷的研究方法,已被广泛的应用于分子生物学,研究基因的转录调控、表达及功能.该文主要概述了基因融合技术的原理、近年来使用的技术方法和特点,以及在分子生物学中的主要应用.     

活性氧在细菌耐抗生素机制中的作用

细菌对抗生素的耐药性以惊人的速度蔓延,阐明抗生素导致细菌死亡内在机制,对提高抗生素药效以及寻找新型抗生素显得尤为迫切。近期研究表明,抗生素引起的细菌内活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)产生,是导致细菌细胞死亡的关键原因。该文对ROS、SOS和细菌耐药性方面的最新研究进行了综述和探讨,为开发新型抗菌药物,遏制细菌感染和耐药性提供新的思路。     

铜绿假单胞菌中RND外排泵的研究进展

细菌耐药性及其导致的抗生素疗效降低,是目前治疗细菌性感染所面临的最大难题.研究细菌内在和获得性耐药机制,寻找能够有效降低或消除细菌耐药性的化合物,对创建不产生抗性的新抗生素、提高现有抗生素的治疗效率、降低细菌感染的发病率和死亡率是十分重要且非常迫切的[1].     

中药抗细菌感染机理之浅见

抗生素的发现和使用是人类医学史上最重要的突破之一。但由于病原菌耐药性的蔓延,传染病再次对人类健康构成巨大的威胁。中药蕴藏着大量生物活性物质,是新型抗生素开发的独特而重要的资源。尽管有些传统中药有明确的临床使用效果,中药抗菌成分的临床应用却极少,其作为抗生素药品在国际医药界使用的情况甚少。结合本实验室研究结果,本研究阐述了中药抗细菌感染的新的分子机理。不同于传统抗生素通过抑菌、杀菌而发挥作用,一些传统中药的有效成分实则是"抗致病药物",这类抗感染成分在临床上具有病原菌产生抗性几率低、对正常菌群影响小等优势。     

SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体的构建和鉴定

目的：通过基因克隆构建表达SP—TAT—Apoptin融合基因的真核表达载体．方法：通过DNA重组技术，以pCD—NA3．1／Apoptin质粒为模板，进行PCR反应；将具有分泌功能的信号肽和能够携带核酸、蛋白和肽自由地通过细胞膜和核膜的蛋白转导域TAT序列连接于Apoptin基因5’端；PCR反应的产物连接于plenti6-V5-D—TOPO真核表达载体．用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组结果；将重组的真核表达载体瞬时转染HUVEC细胞，用免疫荧光标记对转染后的细胞进行处理，观察重组蛋白的表达情况．结果：PCR产物大小符合要求，重组质粒plenti6-V5-D—TOPO／SP-TAT-Ap—optin双酶切鉴定与预期一致，测序结果正确．且经激光共聚焦显微镜观察到重组蛋白的表达，表明重组表达载体已构建成功．结论：成功克隆出SP-TAT-Apoptin融合基因，并成功构建其真核细胞表达载体，为下一步研究SP-TAT-Apoptin融合基因对肿瘤的生长抑制作用的体内外研究奠定了基础．